復(fù)方益腎更寧合劑對(duì)圍絕經(jīng)期大鼠E2、β-EP 的影響*

王新斌，趙粉琴，謝智慧，安蓉芳

( 甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州730000)

目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征的治療常用的是激素替代療法，雖然其改善圍絕經(jīng)期綜合征療效肯定，但因其可致陰道不規(guī)則出血、乳房脹痛、中遠(yuǎn)期使用可致子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌等副作用而不被廣大婦女普遍接受，使而且應(yīng)用有一定局限性。中醫(yī)藥對(duì)本病的研究已經(jīng)逐步深入并且取得了一定的進(jìn)度，治療上辨病與辨證相結(jié)合，著眼于整體調(diào)治，具有綜合性強(qiáng)，副作用少，遠(yuǎn)期療效較穩(wěn)定的特點(diǎn)，因此從中醫(yī)藥角度尋找較為理想的療法，成為研究的重點(diǎn)。本文通過(guò)對(duì)圍絕經(jīng)期大鼠血清雌二醇(E2)及下丘腦β－內(nèi)啡呔(β-EP)的測(cè)定，探討益腎更寧合劑防治圍絕經(jīng)期綜合征的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1．1 動(dòng) 物

SPF 級(jí)SD 健康雌性大鼠60 只，鼠齡15～18 月，體質(zhì)量(300±20)g;4～6 月齡SD 雌性大鼠10 只，體質(zhì)量(250 ±20)g。動(dòng)物合格證:SCXK(甘)2004－0006，均由甘肅中醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1．2 藥品、試劑與儀器

益腎更寧合劑由熟地黃12 g、山茱萸10 g、淫羊藿18 g、珍珠母30 g、白芍12 g、麥冬10 g、黃連6 g、紫草12 g 等組成，由甘肅中醫(yī)學(xué)院制劑室提供;尼爾雌醇，1 mg/片，北京四環(huán)制藥有限公司產(chǎn)品，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)［H11020123］。血清雌二醇(E2)、放射免疫盒，北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供，批號(hào)20070605;β－內(nèi)啡呔(β-EP )放射免疫盒，北京華英生物技術(shù)研究所提供，批號(hào)20070730。80－1 型電動(dòng)離心機(jī)，金壇市恒豐儀器廠產(chǎn)品;GC－911 型γ－放射免疫計(jì)數(shù)器，中國(guó)科技大學(xué)實(shí)業(yè)總公司產(chǎn)品，蘭空醫(yī)院放免科提供。

1．3 模型的建立

選取60 只15～18 月齡SPF 雌性SD 大鼠，連續(xù)5 d 進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片及光學(xué)顯微鏡下觀察，無(wú)規(guī)律性動(dòng)情周期變化，確定為圍絕經(jīng)期大鼠［1］。

1．4 動(dòng)物分組與給藥

據(jù)此選取15～18 月齡SD 雌性大鼠40 只，采用隨機(jī)數(shù)字法分為模型對(duì)照組(圍絕經(jīng)期組)、尼爾雌醇組和益腎更寧合劑高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組8 只。另選青年大鼠(鼠齡4～6 月)8 只作為青年對(duì)照組。參照文獻(xiàn)方法［2］，按人和大鼠間體表面積折算的等效劑量比率1∶0．018 計(jì)算給藥劑量。模型對(duì)照組、青年對(duì)照組以蒸餾水0．01 mL/g體質(zhì)量灌胃，1 d 1 次。尼爾雌醇組，用蒸餾水配成混懸液，劑量為0．24 μg /g，相當(dāng)于成人用量的8 倍，以0．01 mL/g 體質(zhì)量灌胃，每2 周灌胃1 次。益腎更寧合劑高、中、低劑量組依次按生藥量26．56，13．28，6．64 g/kg，以0．01 mL/g 體質(zhì)量灌胃，1 d 1 次。各組根據(jù)體質(zhì)量變化，調(diào)整給藥劑量，連續(xù)給藥4 周。

1．5 檢測(cè)指標(biāo)

大鼠于末次給藥并且禁食、禁水24 h 后，于腹主動(dòng)脈采集血，離心分離血清，－20 ℃保存?zhèn)溆谩４笫笱錏2、β-EP 檢測(cè)按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1．6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13．0 統(tǒng)計(jì)分析軟件處理。數(shù)據(jù)以均數(shù)()±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，采用單因素方差分析。以P＜0．05 為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

益腎更年合劑可提高圍絕經(jīng)期大鼠E2、β-EP含量，且存在著一定的量效關(guān)系。與模型組對(duì)照對(duì)比，各劑量用藥組E2、β-EP 含量均有所升高，其中益腎更年合劑高、中、低劑量組E2和高劑量組β-EP較之，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清E2、β-EP 含量對(duì)比 ng·L-1，±s

表1 各組大鼠血清E2、β-EP 含量對(duì)比 ng·L-1，±s

注:與模型對(duì)照組對(duì)比，* P ＜0．05，＊＊P ＜0．01;與青年對(duì)照組對(duì)比，# P ＜0．05 ，## P ＜0．01。

組 別 動(dòng)物數(shù) E2 β-EP模型對(duì)照組 7 7．547 1 ±0．806 7## 115．374 3 ±30．196 8##青年對(duì)照組 8 14．340 0 ±0．627 5 194．008 0 ±45．076 9＊＊尼爾雌醇組 8 11．137 1 ±0．932 6＊＊## 171．906 5 ±32．639 7*復(fù)方益腎更寧合劑高劑量組 8 10．213 1 ±0．782 1＊＊# 166．407 1 ±30．309 1*復(fù)方益腎更寧合劑中劑量組 8 9．283 8 ±0．539 5＊＊## 145．838 4 ±26．107 0#復(fù)方益腎更寧合劑低劑量組 8 8．953 3 ±0．821 7* ## 140．841 3 ±21．804 7#

3 討 論

女性進(jìn)入圍絕經(jīng)期，由于卵巢功能減退，雌激素分泌減少，對(duì)下丘腦－垂體－卵巢軸的負(fù)反饋?zhàn)饔脺p弱，使FSH、LH 分泌增加。雌激素的缺乏是發(fā)病的始動(dòng)環(huán)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)中，復(fù)方益腎更寧合劑低、中、高劑量組血清E2含量較模型對(duì)照組升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，且低劑量、中劑量、高劑量組血清E2含量按順序呈遞增趨勢(shì)，可見(jiàn)益腎更寧合劑能升高圍絕經(jīng)期大鼠血清E2水平。近幾年，在中醫(yī)微觀辨證方面，有學(xué)者發(fā)現(xiàn):雌激素水平低下者，大多與腎陰、癸水不足有關(guān)［3］。這也與本病的病因病機(jī)相符合。復(fù)方益腎更寧合劑中，主要有熟地黃、山茱萸、白芍、麥冬等藥物，著重滋補(bǔ)腎陰，以升高雌激素水平，調(diào)整紊亂的生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)。此外，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn):淫羊藿能增強(qiáng)下丘腦－垂體－性腺軸及腎上腺皮質(zhì)軸、胸腺軸等內(nèi)分泌系統(tǒng)的分泌功能;紫草具有抗促性腺激素和絨毛膜促性激素的作用，具有雌激素樣活性［4］。據(jù)此推測(cè)，益腎更寧合劑提高E2水平的機(jī)制，亦與其含有“植物樣雌激素”成分，具有類似雌激素作用有關(guān)，但此尚需進(jìn)一步證實(shí)。

β-EP 是神經(jīng)肽類物質(zhì)，參與調(diào)節(jié)呼吸、心血管運(yùn)動(dòng)、行為反應(yīng)等，并有鎮(zhèn)痛，抑制腎上腺素、多巴胺、P 物質(zhì)等釋放作用，且與內(nèi)分泌系統(tǒng)相互影響，對(duì)促性腺激素釋放激素(GnRH)、FSH、LH 有抑制作用。中樞性β-EP 參與神經(jīng)內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)，下丘腦弓狀核β－內(nèi)啡肽神經(jīng)元內(nèi)有雌激素受體存在，成為雌激素在下丘腦的靶細(xì)胞之一。呂肖鋒等［5］研究發(fā)現(xiàn):絕經(jīng)婦女血中β-EP 及其抗體水平明顯低于正常育齡婦女，β－內(nèi)啡肽的下降與雌激素的下降同步。β-EP 抗體的下降可能表示免疫系統(tǒng)對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)紊亂，從而出現(xiàn)圍絕經(jīng)期婦女神經(jīng)精神癥狀。此外，有學(xué)者［6］提出，精神抑郁與神經(jīng)介質(zhì)的變化有關(guān)，而內(nèi)啡肽可與多種神經(jīng)介質(zhì)(包括兒茶酚胺)發(fā)生交叉反應(yīng)，干擾生物胺(5－羥色胺、γ－氨基酸、組織胺等)的代謝，從而影響情緒和行為，與圍絕經(jīng)期抑郁的發(fā)生有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中測(cè)定了圍絕經(jīng)期大鼠下丘腦的β-EP 含量，發(fā)現(xiàn)益腎更年合劑高劑量組β-EP 與模型對(duì)照組對(duì)比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，說(shuō)明益腎更寧合劑高劑量組可使下丘腦的β-EP 水平回升。提示益腎更寧合劑是治療β-EP 水平降低致圍絕經(jīng)期情緒和行為異常等癥的有效藥物

本研究結(jié)果為益腎更寧合劑治療圍絕經(jīng)期綜合征提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，即益腎更寧合劑能夠改善圍絕經(jīng)大鼠體液內(nèi)分泌功能，這可能是其治療圍絕經(jīng)期綜合征作用機(jī)制之一。

［1］程化奇，熊舜華，殷新尤，等．大鼠更年期實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯浚跩］．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)，1993，13(4):1921．

［2］黃繼汗，黃曉暉，陳志揚(yáng)，等．藥理實(shí)驗(yàn)動(dòng)物間和動(dòng)物與人體間的等效劑量換算［J］．中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療，2004，9(9):1069－1071．

［3］夏桂成．中醫(yī)婦科理論與實(shí)踐［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:166．

［4］高學(xué)敏．中藥學(xué)［M］．北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2002:516－518．

［5］呂肖鋒，葉雪清．絕經(jīng)后婦女血β－內(nèi)啡肽及其抗體改變［J］．中國(guó)實(shí)驗(yàn)臨床免疫學(xué)雜志，1993，5(4):37－38．

［6］Hanker JP，Schncider HP．Path0genesis and diognosis of disorders in the climacteric［J］．Gynakoioge，1986，19(4):210．