GC 法同時測定芎姜CO2超臨界提取物成分含量

夏曉靜，董 宇，俞忠明，王明軍

(1.浙江醫藥高等專科學校，浙江 寧波 315100;2.浙江省中醫藥研究院，浙江 杭州 310007)

運用正交試驗篩選出具活血化瘀和縮宮效應的傅氏生化湯的優選方——由川芎和炮姜組成的芎姜合劑 (9∶2)［1］，在此基礎上，經提取工藝優化試驗，選擇CO2超臨界提取法作為川芎合劑的最佳提取工藝。通過氣相色譜法，建立了同時測定芎姜合劑CO2超臨界提取物中阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 含量的方法［2-6］，為進一步的制劑工藝研究及中藥新藥研發提供質量控制的依據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

安捷倫6890N 氣相色譜儀 (美國安捷倫公司)，FID 檢測器，Mili-Q 純水儀，METTLER AE 240 分析天平，KQ-400DB 型數控超聲波清洗器。阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 的對照品 (北京恒元啟天化工技術研究院、北京世紀奧科生物技術公司聯合研制，純度均≥98%)，川芎藥材 (杭州華東中藥飲片有限公司，批號121014)和炮姜藥材 (杭州華東中藥飲片有限公司，批號121003)經浙江省中醫藥研究院鑒定為正品藥材。無水乙醇為分析純。

1.2 試劑配制和色譜條件

1.2.1 混合對照品溶液配制

分別稱取阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 的對照品18，276，100 mg，用無水乙醇溶解定容至10 mL，制成對照品儲備液，分別制成含量為0.180 0，2.76 和1.000 mg·mL-1的混合對照品溶液，經微孔濾膜 (0.45 μm)過濾，續濾液作為對照品溶液備用。

1.2.2 供試品溶液配制

稱取芎姜CO2超臨界提取物40 mg，置10 mL 容量瓶中，加無水乙醇定容，微孔濾膜 (0.45 μm)過濾，續濾液作為供試品溶液。

1.2.3 色譜條件

HP-5 毛細管柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm);氣化室溫度250℃，檢測器溫度250℃;分流比25∶1，進樣量1 μL;尾吹40 mL·min-1，檢測器FID。升溫程序:初始溫度120℃，保持2 min;以10℃·min-1升溫至165℃，保持8 min;載氣氮氣流速2 mL·min-1，氫氣流速35 mL·min-1，空氣流速435 mL·min-1。在此色譜條件下各色譜峰均達到基線分離，各主成分色譜峰的理論板數均＞5 000。

2 結果與分析

2.1 樣品專屬性

取供試品、對照品和空白樣品溶液 (不含超臨界萃取物的溶劑)分別注入氣相色譜儀分析顯示，供試品色譜中，在與對照品色譜各主峰相應位置均檢出色譜峰，而空白樣品則無色譜峰，表明陰性樣品無干擾，說明此方法具有較好專屬性。

2.2 各成分的線性關系

分別吸取阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 的混合對照品溶液，稀釋成梯度濃度，測定、記錄指標成分峰面積。以各指標成分的濃度 (X)為橫坐標，以相應的峰面積 (Y)為縱坐標，繪制標準曲線，各成分的回歸方程相關系數和線性范圍見表1。

表1 阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 的線性關系和相關系數 (n=6)

2.3 檢測限和定量限

取混合對照品溶液適量，稀釋成不同梯度濃度溶液，在氣相色譜條件下測定，信噪比為3 和10時的濃度為指標成分的檢測限和定量限 (表1)。

2.4 精密度試驗

取混合對照品溶液，在氣相色譜條件下連續進樣6 次。結果阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 峰面積的相對標準差分別為1.36%，1.93%和0.94%，表明精密度良好。

2.5 重復性試驗

取芎姜CO2超臨界提取物共6 份，將制備的供試品溶液在氣相色譜條件下測定，記錄峰面積，計算含量。結果阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 平均含量為0.043 8，1.302 0 和0.317 0 mg·mL-1，相對標準差為2.86%，2.88% 和2.90%，表明方法重現性良好。

2.6 穩定性試驗

室溫下，取同一供試品溶液于0，2，4，6，8，12，24 h 分別進樣，記錄峰面積。阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 峰的相對標準差分別為1.55%，1.52%和0.78%，表明供試品溶液在24 h 內穩定性較好。

2.7 加樣回收試驗

取同一芎姜合劑CO2超臨界提取物6 份，每份約40 mg，置于10 mL 量瓶中，加入各對照品，依1.2.2 的方法制備供試品溶液，依1.2.3 的條件測定、計算阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 的加樣回收率 (表2)。

表2 阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 加樣回收率 (n=6)

2.8 樣品測定

取3 批芎姜合劑CO2超臨界提取物，每批2份，每份約40 mg，置于10 mL 容量瓶，無水乙醇定容。取上述各供試品溶液進樣，測定峰面積，計算3 批芎姜CO2超臨界提取物中阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 的含量 (表3)。

表3 芎姜CO2超臨界萃取物含量測定

3 小結

采用石英毛細管色譜柱 (HP-5，30 m×0.32 mm，0.25 μm)、FID 檢測器測定芎姜合劑CO2超臨界提取物中主要成分阿魏酸、6-姜酚和洋川芎內酯A 的含量，結果表明，此法測定芎姜復方CO2超臨界提取物中萃取成分含量簡便、快速、準確，可適用于芎姜合劑的質量控制。

［1］王明軍，葉定江，朱荃.傅氏生化湯縮宮效應的正交設計分析［J］.成都中醫藥大學學報，2000，23 (4):39-40.

［2］汪楊麗，嚴鑄云，馬云桐，等.不同品種和產地川芎油GC-MS 分析［J］.中成藥，2010，32 (8):1433-1435.

［3］郭小藤，趙睜睜，容蓉，等.兩種方法測定川芎油中藁本內酯、洋川芎內酯和正丁基苯酞的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18 (13):95-98.

［4］王楠，張藝，李響，等.全二維氣相色譜/飛行時間質譜分析不同產地的川芎揮發油［J］.色譜，2010，28 (4);329-335.

［5］曾志，謝潤乾，譚麗賢，等.川芎水蒸氣蒸餾和超臨界CO2提取物化學成分的GC-MS 分析鑒別［J］.應用化學，2011，28 (8):956-962.

［6］鄭偉然，陶永華，苗宏偉，等.炮姜超臨界CO2萃取6-姜酚的工藝研究［J］.中草藥，2011，42 (10):2023-2025.