肝細胞癌中MACC1基因的表達及其臨床意義

張秀梅，顧金松，劉 曙，孫成福

譚 進，石 明，蘇建軍 (興化市人民醫院病理科，江蘇 興化 225700)

肝細胞癌中MACC1基因的表達及其臨床意義

張秀梅，顧金松，劉 曙，孫成福

譚 進，石 明，蘇建軍 (興化市人民醫院病理科，江蘇 興化 225700)

目的：探討腸癌轉移相關基因l(metastasis-associated in colon cancer-1，MACC1)在肝細胞癌組織中的表達及臨床意義。方法： 采用RT-PCR技術檢測MACC1在肝癌組織及對應癌旁組織中表達情況，并分析MACC1基因的表達與肝細胞癌臨床病理分級的關系。結果： MACC1 mRNA水平在肝癌組織的表達水平顯著高于癌旁肝組織(P<0.05)，在癌旁肝組織的表達水平顯著高于正常肝組織(P<0.05)；MACC1 mRNA的表達水平與肝癌組織Edmondson病理分級顯著相關(P<0.05)， MACC1 mRNA的表達水平與癌旁組織Edmondson病理分級無顯著相關性(P>0.05)。結論：MACC1在肝細胞癌組織中的表達較對應癌旁組織明顯升高，并且與腫瘤細胞的分化程度明顯相關，提示MACC1可作為肝細胞癌潛診斷因子。

MACC1；肝細胞癌；病理

原發性肝癌是一種原發灶發生于肝細胞和肝內膽管上皮細胞的惡性腫瘤，其中肝細胞性肝癌(HCC)是最主要的病理類型，占原發性肝癌90%以上[1]。MACC1基因是2009年由Stein等發現并命名的一個新基因。Stein等研究發現，MACC1作為肝細胞生長因子(HGF)/c-met信號通路的一個關鍵調節因子在結腸癌的侵襲和轉移中發揮著重要作用[2]，此外，劉清泉等發現MACC1基因可能在肝細胞癌的侵襲轉移中發揮著重要作用，有可能成為肝癌治療的新靶點之一[3]。為了進一步研究MACC1在肝細胞癌及對應癌旁組織中的表達，分析其在肝細胞癌及對應癌旁組織中的表達水平及其與臨床病理分級中的聯系，本研究對我院救治的肝癌患者的病理組織中MACC1mRNA的表達水平進行檢測。現報道如下。

1 對象與方法

1.1對象

選取我院2011年3月至2013年3月期間肝細胞癌(HCC)的手術切除標本，共40例，手術切除癌組織及相對應的癌旁肝組織；選取同時期正常肝組織標本18例作為對照組(4例為肝內膽管結石患者行部分肝臟切除術、12例為肝血管瘤行血管瘤切除術、2例為肝破裂行部分肝臟切除術)。所有患者術前均未行放射、化療及射頻消融治療，所有組織標本經術后病理學證實為肝細胞癌。病例組中男性22例，女性18例，年齡51～60歲，平均年齡(54.42±3.78)歲。所有病例術前都未進行放化療和射頻消融等治療。所有組織標本切下后迅速放入液氮，后移至-80℃冰箱凍存。HCC組織根據Edmondson標準分級[4]：Ⅰ級12例，Ⅱ級13例，Ⅲ級11例，Ⅳ級4例。

1.2方法

1.2.1 主要試劑 RNA提取試劑盒Trizol購于Gibco公司；逆轉錄試劑盒購于Femantes公司；DNA Marker、PCR試劑盒、焦碳酸二乙脂(DEPC)均購于生興生化科技(南京)有限公司。

1.2.2 RNA提取及逆轉錄反應 取約100mg組織，加入1ml Trizol，充分勻漿，抽提總RNA，所得RNA溶于20μl DEPC處理水。提取的總RNA經紫外分光光度計進行定量及檢測純度。按逆轉錄試劑盒說明書進行操作，產物-20℃保存備用。

PCR反應條件：94℃變性5min后擴增30個循環，循環參數為：94℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，最后72℃延伸7min。

RT-PCR引物由英濰捷基公司合成，MACC1基因的上游引物F：5-CTTGCGGAGGTCACCATAGC，R：5-GATTTCCAACAACGGGCTCA，內參GAPDH 引物F：5-GGTAAAGGTCGGTGTGAACG，R：5-ACCATGTAGTTGAGGTCAATGAAGG。

1.3統計學分析

數據采用SPSS17.0軟件進行統計分析，計量資料組間比較采用t檢驗，相關分析采用spearman相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1正常肝組織、肝癌組織及對應癌旁組織中MACC1mRNA的表達水平

圖1 正常肝組織、肝癌及對應癌旁組織中MACC1mRNA的表達統計

與正常肝組織(1.03±0.12)比較，MACC1在癌旁組織中mRNA表達水平(5.12±0.99)顯著增高，差異有統計學意義(P<0.05)；與癌旁組織比較，MACC1在肝癌組織中mRNA的表達水平(12.88±1.32)顯著增高，差異有統計學意義(P<0.05)，以上結果提示MACC1在肝細胞癌組織與癌旁組織中均高表達，且在肝細胞癌中表達更高。見圖1。

2.2MACC1表達水平與在肝癌組織病理分級的相關性

MACC1 mRNA表達水平與HCC分化程度顯著相關(P<0.05)，說明HCC分化愈差,MACC1表達愈弱。而MACC1mRNA表達水平與癌旁組織分化程度無顯著相關(P>0.05)。見表1。

表1 CKS1蛋白表達強度與HCC分化程度的關系

注：與HCC分化程度比較，▲r=0.710，P<0.05；◆r=0.221，P>0.05。

3 討 論

肝細胞癌是我國常見惡性腫瘤之一，其特點主要為起病隱匿，生長快速，預后差，給患者造成巨大的損害。近年來HCC發病率和死亡率有逐年升高的趨勢，目前HCC首選的、療效最確切的治療方法為手術切除，然而臨床發現手術治療的總體治療效果仍不能令人滿意[4]。研究認為腫瘤瘤體的大小、數目雖然是影響患者預后的重要因素，但根本因素是腫瘤的生物學特征[5]。

MACC1基因定位于人染色體7p15.3，結構包含7個外顯子和6個內含子，其cDNA含有2559個核苷酸序列，編碼的結合蛋白包含852個氨基酸。以往的研究認為MACCI作為一個關鍵調節因子在結腸癌的侵襲中發揮著重要作用[2]，且有發現MACC1基因可能在肝細胞癌的侵襲轉移中亦發揮著重要作用[3]。本研究通過對40例肝癌組織、癌旁肝組織以及18例非肝癌的正常肝組織中MACC1 mRNA的表達情況進行了檢測，探討其在肝細胞癌及其癌旁組織中的診治意義。結果顯示，MACC1 mRNA水平在肝癌組織的表達水平顯著高于正常肝組織，且肝癌組織中MACC1 mRNA水平顯著高于癌旁組織。這就說明MACC1的表達水平可能與肝癌的增殖能力和惡性程度有著密切的聯系，提示了MACC1在肝癌的發生發展中可能起著重要的協同作用，這與Gao等報道的結果相一致[6]。為了進一步驗證上述結果，我們將MACC1的表達水平與肝癌組織及癌旁組織的病理分級進行相關性分析，結果發現MACC1 mRNA表達水平與與HCC分化程度顯著相關，而MACC1 mRNA表達水平與與癌旁組織分化程度無顯著相關，這與Kawamura研究認為的MACC1可作為癌癥的預示因子的結果相一致[7]。然而，本研究存在著不足之處，如本研究沒有檢測MACCl在肝癌及癌旁組織中的蛋白水平的表達以及其與HCC分化的聯系，有待進一步的驗證。

綜上所述，MACCl在肝細胞癌的發生、發展中起著重要的作用，檢測肝癌組織中的MACCl表達水平對患者診斷和臨床個體化治療具有一定的指導意義。

[1]楊秉輝，夏景林，黃力文，等.我國肝癌“臨床相”30年的變遷-原發性肝癌3250例的對比研究[J].中華醫學雜志，2003，83(12)：1053-1057.

[2]Stein U，Wralther W，Arlt F，et a1.MACCl，a newly identified key regulator ofHGF-MET signaling，predicts colon cRncer metastasis[J].Nat Med，2009，15(1)：59-67.

[3]劉清泉,劉青光,昝獻峰,等.MACC1基因在肝細胞癌中的表達及臨床意義[J]. 華中科技大學學報：醫學版，2010，39(1): 22-24.

[4]Bruix J，Sherman M.Management of hepatocellular carcinoma[J].Hepatology，2005,42(5):1208-1236.

[5]Inoue K，Hasegawa K，Ishizawa Z，et al.Is there any difference in survival according to the portal tumor thrombectomy method in patients with hepatocellular carcinoma[J].Surgery，2009,145(1):9-19.

[6]Gao J，Ding F，Liu Q， et al.Knockdown of MACC1 expression suppressed hepatocellular carcinoma cell migration and invasion and inhibited expression of MMP2 and MMP9[J]. Mol Cell Biochem，2013，376(1/2):21-32.

[7]Kawamura M，Saigusa S，Toiyama Y,et al. Correlation of MACC1 and MET expression in rectal cancer after neoadjuvant chemoradiotherapy[J]. Anticancer Res，2012 ，32(4):1527-1531.

2013-05-29

張秀梅(1974-)，女，主治醫師，主要從事臨床病理學的診斷及研究工作。

R730.2

A

1673-1409(2013)27-0010-03

[編輯] 一 凡