胎盤FATP1和HFABP基因的表達水平與胎兒生長發育的相關性研究

侯小霞 劉俊曉 王孟麗

胎盤FATP1和HFABP基因的表達水平與胎兒生長發育的相關性研究

侯小霞 劉俊曉 王孟麗

目的 探討必需脂肪酸轉運蛋白水平與胎兒生長發育的相關性。方法 采用實時定量PCR(RT-PCR)檢測胎盤中FATP1和HFABP mRNA 表達水平, 同時收集新生兒的身長、體重、頭圍和胎齡等指標。結果 胎盤中FATP1 和HFABP mRNA的水平, 男性和女性之間有顯著差異；FATP1 mRNA的水平與新生兒的身長相關, HFABP與胎齡表現出相關性。結論 胎盤中FATP1和HFABP的表達與胎兒的發育關系密切。

胎盤；FATP1；HFABP；生長發育

胎盤能調節母體與胎兒之間營養物質和外源性化學物質的轉運。必需脂肪酸及其衍生物是通過胎盤來調節的重要物質, 也是生物膜必不可少的組成成分和胞內外信號分子的前體。哺乳動物不能合成必需脂肪酸, 因此, 胎兒依賴母體日常攝入的必需脂肪酸及其在胎盤中的定向運輸來獲取足夠的數量, 以維持正常發育［1］。胎盤中必需脂肪酸轉運蛋白FATP1及HFABP的表達水平反應了胎兒能通過胎盤獲得的必需脂肪酸的數量。本實驗以新生兒為研究對象, 在出生時采集胎盤組織, 檢測胎盤中必需脂肪酸轉運蛋白FATP1及HFABP的mRNA表達水平, 從而探討胎兒生長發育與新生兒胎盤必需脂肪酸轉運蛋白水平的相關性。

1 材料與方法

1.1 一般資料 本研究中, 男性新生兒69名, 女性新生兒52名, 均在同一地區醫院出生。在取得父母同意后, 在新生兒出生時進行樣本采集和數據收集。

1.2 胎盤的采集和蛋白水平的檢測 以臍帶附著處為中心將胎盤分成兩份, 在臍帶周圍剪一小塊全厚度的組織, 立即放入凍存管中, 標記姓名和編號, -70 ℃低溫冰箱保存。采用實時定量PCR(RT-PCR)檢測胎盤中FATP1和HFABP mRNA 表達水平。主要試劑：RNA 酶抑制劑(廣州瑞真生物有限公司)；逆轉錄PCR試劑盒(PrimeScript RT reagent Kit Perfect Real Time, Takara, 日本)；熒光定量PCR試劑盒(SYBR Premix Ex TaqTM(Tli RNaseH Plus), Takara, 日 本 )；2×Taq PCR Master Mix(北京諾維森生物科技有限公司)。

胎盤組織RNA提取：取100 mg胎盤組織置于勻漿器中,充分研磨, 加入1000 μl Trizol, 轉移至EP管中, 反復吹打至組織完全分散, 加入氯仿200 μl, 顛倒混勻, 27 ℃ 放置 5 min,4 ℃12000 rmp離心15 min, 將上層水相轉移于另一EP管中,加入等體積異丙醇混勻放置 15 min, 4 ℃12000 rmp離心10 min, 棄上清, 加預冷的75%乙醇, 4 ℃7500 rmp離心 5min,棄上清, 加入30 μl DEPC水。

逆轉錄cDNA的反應條件：37℃,15 min(反轉錄反應)；85℃,5 sec(反轉錄酶的失活反應)。將cDNA用DEPC水稀釋5倍, 備用。實時定量PCR的擴增標準程序：95 ℃, 30 s；95 ℃ , 5 s; 60 ℃ , 31 s (重復 40個循環 )。

1.3 新生兒體格發育指標的收集 新生兒出生后, 進行身長(cm)、體重(kg)、頭圍(cm)和胎齡(周)的檢測, 收集數據。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0軟件進行統計分析, 偏正態分布用中位數表示, 均數比較用非參數檢驗(K-S、M-W檢驗), 相關因素分析使用Spearman等級相關分析, 以α=0.05作為檢驗標準。

2 結果

胎盤中FATP1 和 HFABP mRNA的水平, 經統計分析結果顯示, 男性新生兒胎盤中FATP1 和 HFABP mRNA的表達水平高于女性, 差異有統計學意義(均P＜0.01)。隨著FATP1 mRNA表達水平的升高, HFABP的表達水平也顯著增加(Rs=0.51, P＜0.001)；FATP1與新生兒的身長相關, HFABP與胎齡表現出相關性。

表1 胎盤中FATP1及HFABP的表達水平與新生兒出生相關指標的相關分析

3 討論

本研究發現, 胎盤中FATP1, HFABP的表達水平在男性和女性新生兒中的表現出明顯的差異(P＜0.01), 表現為FATP1, HFABP在男性新生兒胎盤中的表達水平高于女性。由此我們推測, FATP1, HFABP在男嬰和女嬰之間的生長發育上存在較大的機制差別。以前的研究中, 脂肪酸轉運蛋白表達的上調, 會導致各種類型的脂肪酸和脂質在胎盤中積累, 可能會引起胎盤代謝活動和脂質活動增強, 從而降低胎兒必需脂肪酸的供給。胎兒脂肪酸供應不足會導致胎兒宮內發育遲緩, 胎兒面部畸形, 死胎, 嚴重的產后發育遲緩,并可能與成人時期一些疾病風險增加有關。胎盤中FATP1和HFABP的表達水平之間具有較強的相關性(P＜0.001), 胎盤中FATP1的表達水平與新生兒身長有較強的相關性, 胎盤中HFABP的表達水平與新生兒胎齡有較強的相關性。說明胎盤中FATP1和HFABP的表達與胎兒的發育關系密切。研究發現, 胎兒長鏈多聚不飽和脂肪酸的攝入情況與胎齡,胎兒體重, 身長, 頭圍均有關［2］。母親懷孕期間飲食中脂肪酸的構成對一些出生結局會造成影響, 包括胎兒的生長速度和胎齡［3］。

［1］ Y.Xu,S.Agrawal,T.J.Cook.Maternal Di-(2-ethylhexyl)-phthalate Exposure Infuences Essential Fatty Acid Homeostasis in Rat Placenta.Placenta, 2008, 29(11):962-969.

［2］ Gerard Hornstra.Essential fatty acids in mothers and their neonates.Am J Clin Nutr, 2000, 71:1262S-9S.

［3］ Olsen SF,Secher NJ.Low consumption of seafood in early pregnancy as a risk factor for preterm delivery: prospective cohort study.BMJ,2002,324(7335):447.

471009 洛陽, 鄭州大學附屬洛陽中心醫院