ILK與VEGF在肝細胞癌中的表達及相互關系

河北省滄州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院（000）李勝水 李雙標 張鳳梅

河北省滄州市人民醫(yī)院（061001）李秀清3

河北省滄州市青縣人民醫(yī)院（062650）李翠萍4 李麗5

原發(fā)性肝癌是肝臟中最常見的惡性腫瘤，其病理類型90%以上是肝細胞癌[1]（hepatocellular carcinoma，HCC）。ILK是新近發(fā)現(xiàn)的一個具有3個結(jié)構(gòu)單位的Ser/Thr蛋白激酶，作為整合素和生長因子受體信號傳導途徑中的一個重要效應物，ILK調(diào)節(jié)著細胞的粘著、生存、分化和凋亡[2]。其相關蛋白PKB、GSK3等是細胞程序死亡和細胞周期循環(huán)的重要調(diào)節(jié)蛋白。由于這些原因，使得ILK與腫瘤的形成、浸潤轉(zhuǎn)移和臨床預后等密切相關。血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）也稱血管通透因子（VPF）[3]，具有很強的血管生成和增強血管通透性的作用，在腫瘤血管生成中起關鍵作用，其表達的強弱直接影響著腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移[4][5][6]。

本研究通過檢測ILK和VEGF在肝細胞癌組織中的表達情況，分析表達結(jié)果與組織學分級的關系及兩者的相關性，并為肝細胞癌的靶向治療提供一定參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1一般資料 收集滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院2004年1月～2013年6月手術切除標本55例及距腫物至少4cm處正常肝組織20例，且均未在手術前行放、化療。所有切片均由具有豐富經(jīng)驗的病理科主任醫(yī)師進行復檢。每例選取蠟塊4μm連續(xù)切片1～2張，進行常規(guī)HE染色和免疫組化染色。

1.2實驗材料和方法 鼠抗人ILK、VEGF單克隆抗體，DAB顯色試劑盒，S-P試劑盒及其他試劑均為福州麥新生物技術公司產(chǎn)品。手術切除標本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋后4μm連續(xù)切片，采用S-P法常規(guī)免疫組化染色，以中性磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗做陰性對照，以已知ILK、VEGF陽性的肝細胞癌組織做陽性對照。

1.3結(jié)果判定標準 ILK、VEGF陽性結(jié)果的判定均以胞質(zhì)呈棕黃色至棕褐色顆粒狀，而細胞核處空泡狀或染色淡為準。每張切片采用隨機10個高倍視野下陽性細胞計數(shù)，陽性細胞數(shù)與細胞總數(shù)之比計算陽性百分率。ILK陽性細胞表達率＜10%定為（-），11～30%定為（+），31～75%定為（++），76～100%定為（+++）；VEGF陽性細胞表達率＜6%定為（-），7～25%定為（+），26～75%定為（++），76～100%定為（+++）。

1.4統(tǒng)計方法 采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，對ILK、VEGF的表達情況與肝細胞癌病理分級的關系以及各指標之間的相互關系進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

ILK、VEGF在正常肝組織、肝細胞癌病理分級以及兩指標之間的相互關系見附表1和2。

附表1 ILK、VEGF在正常肝組織、肝細胞癌病理分級以及兩指標之間的相互關系

在55例肝細胞癌中，ILK49例表達為陽性，陽性率89.1%，陽性染色主要位于癌細胞胞質(zhì)；在20例正常對照的有4例表達弱陽性（+），其余為陰性，陽性率20%，陽性染色主要位于正常肝細胞。肝細胞癌中ILK陽性表達率顯著高于正常肝細胞組（P＜0.05）。中低分化組陽性率93.8%和100%高于高分化組50%（P＜0.05）；且低分化組15例樣本中陽性表達（++）11例、（+++）3例，明顯高于高分化組8例樣本中陽性表達（++）1例、（+++）0例。VEGF有53例表達陽性，陽性率96.4%，陽性染色主要位于細胞胞質(zhì)，在20例正常對照的有1例表達陽性（++），4例弱陽性（+），其余為陰性，陽性率25%，陽性染色主要位于間質(zhì)細胞及部分肝細胞。肝細胞癌中VEGF陽性表達率顯著高于正常肝細胞組（P＜0.05）。中低分化組陽性率96.4%高于高分化組75%（P＜0.05），且低分化組15例樣本中陽性表達（++）10例、（+++）4例，高于高分化組8例樣本中陽性表達（++）4例、（+++）0例。55例肝細胞癌標本中二者共同陽性49例，二者共同陰性2例，ILK、VEGF的表達具有明顯相關性（P＜0.05）。

附表2 肝細胞癌中ILK、VEGF指標之間的關系

3 討論

實體腫瘤的生長很大程度上依賴于持續(xù)的血管生成，血管的生成對腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移起著非常重要的作用。VEGF與受體結(jié)合后通過一系列信號傳導機制導致血管內(nèi)皮細胞分裂增殖，增加微血管的通透性，促進血漿蛋白外漏，基底膜降解，最終導致新的基質(zhì)及新的血管形成，為腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移提供條件。本研究顯示，VEGF在肝細胞癌組中陽性表達率顯著高于正常肝細胞中的陽性表達率（P＜0.05）；同時中低分化肝細胞癌中VEGF含量明顯高于高分化肝細胞癌，表明隨著腫瘤細胞分級的增高，VEGF含量表達增強，提示VEGF定量檢測可作為肝細胞癌一種早期無創(chuàng)性診斷和預測預后的良好指標。

整合素連接激酶（integrin-linked kinase，ILK）是一種新近發(fā)現(xiàn)的絲氨酸/蘇氨酸（Ser/Thr）蛋白激酶。它能通過與整合素β1和β3亞單位的結(jié)合介導細胞與細胞外基質(zhì)的連接。目前研究證據(jù)顯示，ILK的過度表達與多種惡性腫瘤密切相關。ILK在人類前列腺癌、肺癌、喉鱗狀細胞癌、卵巢癌、膠質(zhì)瘤、惡性黑色素瘤、肝癌等組織中均高表達，且表達程度與腫瘤的惡性程度呈正相關，與本研究結(jié)果相吻合。

動物實驗發(fā)現(xiàn)，將ILK過表達的細胞導入裸鼠體內(nèi)可引發(fā)腫瘤[7][8][9][10][11]。本研究顯示：在肝細胞癌組織中ILK的陽性表達率89.1%。肝細胞癌組織中ILK呈棕黃色顆粒，定位于腫瘤細胞質(zhì)。ILK 蛋白在肝細胞癌組的表達率89.1%明顯高于正常肝細胞組陽性率20%，且表達強度明顯增強；同時中低分化組陽性率93.8%和100%高于高分化組50%（P＜0.05）；且低分化組15例樣本中陽性表達（++）11例、（+++）3例，明顯高于高分化組8例樣本中陽性表達（++）1例、（+++）0例，提示ILK對于促進肝細胞癌的發(fā)生發(fā)展呈正相關性。

本研究結(jié)果表明，VEGF與ILK的表達有明顯的相關性，隨著ILK表達的升高，VEGF表達也升高，ILK與VEGF存在正相關，且具有明顯的統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明它們之間有著某種必然的聯(lián)系，提示ILK與VEGF在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中可能存在協(xié)同作用。

綜上所述，ILK與VEGF參與肝細胞癌的發(fā)生、發(fā)展過程，二者的高表達與肝細胞癌的分化程度密切相關，成為評估肝細胞癌惡性程度的重要生物學指標。