象拔蚌人工育苗技術研究

劉明坤, 王昌勃, 孔令鋒, 李 琪

(中國海洋大學 海水養殖教育部重點實驗室, 山東 青島 266003)

象拔蚌(Panopea generosa)隸屬瓣鰓綱, 海螂目,縫棲蛤科, 海神蛤屬, 是一種大型埋棲型貝類, 成體主要生活在潮下帶至 110 m的水下底質中, 埋棲深度因底質性質而異, 通常為 0.6～1.0 m, 是北美洲太平洋沿岸的重要經濟貝類[1]。象拔蚌肉味鮮美, 營養價值高,深受消費者喜愛。近年來, 由于北美洲捕撈配額制度的實施[2], 加之棲息地破壞等原因, 象拔蚌的漁獲量正逐年下降。從20世紀70年代開始, 國外水產科研機構已相繼開展了象拔蚌的人工育苗和養成技術的研究工作[3]。

目前, 中國市場上的象拔蚌完全依賴進口, 美國和加拿大的象拔蚌年產量在3000 t左右, 年收入達3～4億美元, 其中, 每年有 1000～1200 t銷往中國, 價值為1～1.5億美元[4]。山東、遼寧等地沿海灘涂面積廣闊, 開展象拔蚌的人工繁殖及增養殖技術研究, 對于增加養殖新品種具有重要意義。國內學者雖然在 20世紀 90年代對象拔蚌的引種、育苗和養成技術進行過探索[4-7],但是由于育苗和養成周期長, 死亡率高等原因, 始終沒有建立起成熟的規模化苗種培育和養成技術。本文對從美國和加拿大引進的象拔蚌親貝的促熟、人工催產和幼蟲培育等人工繁育關鍵技術進行了研究。

1 材料與方法

1.1 親貝促熟

人工育苗試驗在山東省威海南洋生物技術有限公司進行。試驗用親貝于2012年3月采捕于美國西雅圖和加拿大哥倫比亞海域。親貝洗刷干凈后, 放入20 m3水泥池中促熟。促熟密度1～2個/m3, 初始溫度6℃, 暫養3～4 d后, 每天升溫0.5℃, 升至11～12℃恒溫待產。促熟期間日投餌2次, 餌料以三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)為主, 餌料細胞密度為2～3萬個/mL, 輔以人工配合餌料螺旋藻粉和蛋黃。每日倒池1次, 連續充氣。

1.2 親貝的誘導排放與孵化

種貝促熟 20～23 d, 積溫達到 220℃以上時, 配子發育成熟, 可進行人工催產。采用升溫和藻液刺激相結合的方法, 誘導溫度為16℃, 藻液細胞濃度3～4萬個/mL。受精卵孵化密度為30個/mL, 孵化期間每30 min攪池1次。

1.3 幼蟲培育

胚胎發育至D形幼蟲階段后, 用300目篩絹選優至30 m3水泥池中進行幼體培育。幼蟲培育密度4個/mL,附著時減少至1～2個/mL。培育用水經二級沙濾、鍋爐升溫、500目網袋過濾后入池使用。幼蟲培育水溫16～18℃, 鹽度28～30, 連續微量充氣。日換水2次, 每次1/2水體, 7 d倒池1次。附后不再倒池, 每次換水量增至培育水體的 2/3～1。餌料以金藻(Isochrysis zhanjiangensis)為主, 輔以扁藻(Platymonas subcordiformis)和海洋紅酵母, 日投餌 6次, 浮游期餌料細胞密度為0.3～0.6萬個/mL, 附著后增加至0.8～1.2萬個/mL。

1.4 附著變態

幼蟲生長至350～380 μm, 出現足和水管原基時進入附著變態階段。分別以細砂(粒徑: 0.30～0.45 mm)、聚乙烯網片、波紋板和卵石(粒徑: 2～3 cm)為附著基, 研究不同附著基對幼體附著變態誘導效果的影響。幼體培育密度為1個/mL, 每組試驗設3個重復。投放附著基5 d后統計各附著基的單位面積(cm2)附苗量。

1.5 統計分析

利用SPSS16.0對實驗數據進行統計分析, 用單因素方差分析(ANOVA)比較不同附著基的附苗效果, 并進行Duncan多重比較, 差異顯著性水平設為P＜0.05。

2 結果

2.1 受精與孵化

親貝經誘導刺激后, 水管充盈挺直, 進出水管變紅、擴大。雄性先排, 精子呈煙霧狀, 雌性產卵呈顆粒狀或扁平塊狀。雌貝排卵可持續2 h, 成熟卵子呈圓形、淡紅色, 排出后即分散, 不粘連, 卵徑82 μm。受精卵在不同水溫下孵化時間不同, 水溫11℃時需83 h發育至D形幼蟲, 16℃時僅需46 h(表1)。

2.2 幼蟲培育

浮游幼蟲的生長曲線如圖1所示。浮游幼蟲在D形幼蟲階段生長緩慢, 殼長平均日增長6.2 μm(1～5 d)。在達到殼長180 μm的殼頂期幼蟲之后, 生長明顯加快, 殼長平均日增長 16.8 μm(6～20 d)。

表1 水溫對象拔蚌受精卵孵化時間的影響Tab. 1 The hatching time of the larvae of P. generosa at different temperatures

圖1 象拔蚌浮游幼蟲的生長Fig. 1 Growth of larval of P. generosa

幼蟲各階段的發生時間和特征描述見表2, 選幼時D形幼蟲殼長120 μm, 經過18～20 d的培育, 殼長達到 340～380 μm, 可以清晰地看到鰓弓和平衡囊,足能伸出殼外, 面盤發達, 仍具有浮游能力, 此時適合投放附著基。在以細砂為附著基時, 幼蟲發育至27～35 d可觀察到單管稚貝, 稚貝身體后端有一出水管, 38～45 d發育至雙管稚貝, 出水管下部發育出進水管, 此時進出水管較短, 能自由縮入殼中。投放附著基 47 d后, 可觀察到具備成貝外形特征的幼貝,進出水管紅褐色, 不能縮入殼中。

2.3 附著基對幼體附著變態的影響

投放附著基5 d后, 細砂、聚乙烯網片、波紋板和卵石 4種附著基的單位面積平均附苗量分別為(4.57±0.75)個/cm2, (0.42±0.09)個/cm2, (0.06±0.04)個/cm2和(2.19±0.61)個/cm2。不同附著基的采苗率依次為:細砂＞卵石＞聚乙烯網片＞波紋板, 各組之間差異性顯著(P＜0.05)。

表2 象拔蚌幼蟲發育階段的特征描述Tab. 2 The developmental timetable and characters of larvae of P. generosa

圖2 象拔蚌幼體不同附著基附苗量Fig. 2 The settling rates of P. generosa for four substrates

3 討論

在貝類人工育苗過程中, 親貝性腺發育的好壞決定著人工育苗的成敗, 因而親貝的促熟環節十分重要。本研究所用親貝從國外引進, 經過長途運輸,需要暫養恢復[8]。孔寧等[9]在庫頁島厚蛤蜊(Pseudocardium sachalinense)親貝促熟培育中, 將從國外引進的親貝暫養5～7 d, 保證了親貝的成活率。本試驗中象拔蚌親貝入池后暫養3～4 d, 不進行升溫,有效避免了因環境變化劇烈導致親貝大量死亡的情況發生。親貝促熟培育期間, 合適地投放活餌料及人工餌料, 既能保證親貝的攝食, 滿足性腺發育所需要的營養物質, 又能保持水質新鮮, 是育肥催熟的關鍵。鄧陳茂等[10]在珠母貝(Pinctada margaritifeta)親貝人工促熟培育中, 混合投喂三角褐指藻、鴨蛋黃、活酵母取得了滿意的效果。魏振華等[6]在象拔蚌親貝促熟時投喂硅藻, 親貝也能成熟產卵、排精。本試驗中不僅投喂活餌料硅藻, 而且輔以螺旋藻粉、蛋黃等人工配合餌料, 使營養更加均衡, 達到了良好的促熟效果。

貝類的人工催產有升溫刺激、流水刺激、陰干刺激、化學藥物刺激等多種方法, 一般來說, 多種方法結合誘導比單一方法效果要好。本試驗中, 采用升溫和藻液刺激誘導相結合的方法成功進行了催產。關于藻液刺激親貝產卵的報道并不多見, 鄧陳茂[10]]、符韶等[11]]在珠母貝的親貝人工催產中采用升溫與濃扁藻液相結合的方法均取得了滿意的效果。象拔蚌卵子的平均卵徑為82 μm, 比同屬其他物種的卵徑要大, 如新西蘭象拔蚌(P. zelandica)的平均卵徑為77 μm[12], 墨西哥象拔蚌(P. globosa)的平均卵徑為52 μm[13]。溫度是影響海洋貝類受精卵孵化的重要因素, 即在一定范圍內, 提高溫度可以縮短孵化時間。尖紫蛤(Soletellina acutaCai et Zhuang)的受精卵在26、29和32℃下的孵化時間分別是990、940和910 min[14]。象拔蚌的受精卵在11℃ 時需83 h完成孵化, 而在16℃時只需要46 h。

育苗周期長是象拔蚌人工育苗的一大特點。在象拔蚌的幼蟲培育過程中, 有 20 d的浮游期, 投放附著基后需繼續培育70 d左右才能達到5 mm的出池規格,整個育苗周期約90 d。這比新西蘭象拔蚌和其他一些雙殼貝類的育苗周期都要長, 新西蘭象拔蚌幼蟲的浮游期為16 d[11]。中國紫蛤(Hiatula chinensis)的幼蟲浮游期為17 d, 育苗周期67 d[15]。泥蚶(Tegillarca granosa Linnaeus)幼蟲的浮游期為 10 d左右, 育苗周期30～40 d[16]。長的育苗周期對培育條件, 特別是對附著后水質的要求更為嚴格, 這也是影響育苗成敗的重要因素。象拔蚌幼蟲發育依次經過擔輪幼蟲、D形幼蟲、殼頂幼蟲、匍匐幼蟲, 幼蟲發育階段無眼點出現, 足和水管原基的出現是幼蟲附著變態的標志。附著后經過單管稚貝、雙管稚貝, 進而發育成幼貝。浮游幼蟲變態前攝食量小, 生長緩慢, 附著變態后攝食量加大, 生長速度加快, 殼長明顯拉長, 貝苗已具備成體象拔蚌形態。

海洋環境中, 物理因子、化學因子和生物因子在不同的時間和空間尺度上都會影響貝類幼體的附著變態[17]。在水體條件不適合附著時, 織紋螺(Nassarius)的面盤幼蟲可推遲變態達14 d之久, 而船蛆(Teredo)的面盤幼蟲找不到木頭便停止變態, 海膽(Melita)的長腕幼蟲找不到合適的底質也會推遲變態[18]。本研究中不同附著基的采苗率依次為: 細砂＞卵石＞聚乙烯網片＞波紋板, 各組之間差異顯著(P＜0.05)。這與魏振華[6]的研究結果基本相同。細砂附苗效果好, 幼苗生長快, 但殼體附著物較多, 且容易滋生纖毛蟲、聚縮蟲等原生動物, 使死亡率升高。定期倒池換砂可以有效清除池底殘留物, 保持水體清潔, 為象拔蚌稚貝生長提供穩定良好的水質環境。使用卵石和聚乙烯網片附著基, 苗體清潔, 但附苗較少, 生長緩慢。波紋板基本無幼蟲附著,這可能與附著基的粗糙程度有關[15]。鑒于自然條件下象拔蚌多棲息于細砂底質的生活習性, 在今后的育苗生產中可采用細砂作為采苗和稚貝培育的基質, 在稚貝培育期間定時倒池換砂, 防止原生動物滋生及底質環境的惡化, 從而達到良好的育苗生產效果。

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