食管癌組織中ERK與VEGF-C、CD44v6表達的相關性研究

慶琳琳 胡繼春 趙曉志

腫瘤的發生與多種因素有關，但“基因調控失衡”學說備受關注，因為許多研究已經表明腫瘤的發生、發展過程與多種基因變化密切相關［1］。細胞外信號調節激酶(extracellular-signal protein kinase，ERK)參與體內多種生理與病理過程，調控多種信號傳遞蛋白的表達，但ERK對VEGF-C、CD44v6的調控作用研究則較少。因此，我們以免疫組化法研究食管癌組織中ERK、VEGF-C、CD44v6變化，探討三者之間的相關性及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2002年1月至2009年6月食管癌手術切除標本50例，均經病理切片證實為鱗狀細胞癌。其中男39例，女11例;年齡38～75歲。依據1999年WHO腫瘤國際組織學臨床病理分期標準：Ⅰ期8例，Ⅱ期20例，Ⅲ期12例，Ⅳ期10例;有淋巴結轉移31例，無淋巴結轉移19例。所有患者術前均未行放、化療。另取術中切取的正常食管組織19例作為正常研究對照。

1.2 免疫組織化學法研究 即用型鼠抗人CD44v6單克隆抗體，兔抗人ERK、VEGF-C多克隆抗體均購自武漢博士德生物工程有限公司。免疫組化法依照試劑盒操作說明書進行，用已知陽性切片作為陽性對照組，磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗作為陽性對照。

1.3 結果判定標準 實驗結果判定標準以染色強度和陽性細胞數之和表示。具體為：(1)染色強度：0分為陰性，1分為弱陽性，2分為陽性，3分為強陽性;(2)陽性細胞數：0分為陽性細胞數＜5%，1分為陽性細胞數5% ～25%，2分為陽性細胞數25～50%，4分為陽性細胞數≥75%。以上兩者之和≤3為陰性，兩者之和＞3為陽性。

1.4 統計學分析 應用SPSS12.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗和spearman等級相關分析兩者相關性，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ERK、VEGF-C、CD44v6表達結果 ERK、VEGF-C、CD44v6在正常食管組織表達率為10.5%、15.7%、21.1%，食管癌組織中表達率為54.0%、78.0%、74.0%，相互對比均有統計學差異(P ＜0.05)。見表1。

2.2 ERK、VEGF-C、CD44v6表達與食管癌臨床病理特征的關系 ERK、VEGF-C、CD44v6表達與性別、年齡、臨床病理分期差異無統計學意義(P＞0.05)，而與淋巴結有無轉移差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表2。

2.3 ERK與 VEGF-C、CD44v6的相關性分析結果 ERK與VEGF-C表達呈正相關(r=0.653，P=0.005)，ERK與CD44v6表達呈正相關(r=0.603，P=0.006)。

表1 ERK、VEGF-C、CD44v6在正常食管及食管癌組織中表達的陽性率 例(%)

表2 ERK、VEGF-C、CD44v6表達與臨床特征的關系

3 討論

現在大量研究認為，腫瘤的發生與多種因素有關，但“信號傳導通路調控失衡”學說近年來備受關注，因為機體各種生理過程都需要精密的調節才能完成，形成一個復雜的信號傳導與調控網絡系統，某些信號傳導蛋白的改變可能引起受控“靶蛋白”表達異常，導致腫瘤的發生。在眾多信號傳導途徑中，絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-associated protein kinase，MAPK)信號傳導途徑經研究證明是一條很重要的傳導途徑，而其中 Raf-MEKERK通路尤其重要［2］。ERK是一個重要的調節蛋白酶，可以介導細胞外周期蛋白的表達，而后者又參與了機體內多種蛋白表達，是機體內生理反應調控的關鍵位點。最新研究表明，ERK在多種腫瘤疾患中表達增高，例如肝癌、大腸癌、乳腺癌組織中均可見高表達［3］，所以推測其與腫瘤的發生可能有密切關系。

食管癌同其它惡性腫瘤一樣，具有浸潤性生長的特點，并可以發生遠端轉移，這些行為與腫瘤細胞表面黏附分子表達變化有關，CD44v6是CD44的一種變型體，也具有黏附分子的特性，可以引起腫瘤細胞與細胞外基質中多種結構蛋白發生反應，過量表達可以引起細胞外基質構形發生變化，腫瘤細胞隨后發生位移，使其具備轉移生長能力，因此CD44v6蛋白可能參與腫瘤細胞的生長轉移過程。已有研究表明，CD44v6與大腸癌，胃癌等腫瘤的浸潤轉移有關［4］，我們研究也顯示了CD44v6蛋白在食管癌組織中有高表達，并與腫瘤的淋巴轉移相關聯，這與近期的另一項關于食管癌的研究結果相似［5］，該研究也顯示CD44v6、VEGF-C與食管癌的發生存在相關性。腫瘤細胞的轉移除自身運動能力增強外，腫瘤組織中微血管與淋巴管過量生長也是為其轉移提供必需的條件之一。研究表明，腫瘤組織不斷增大與新生血管和淋巴管密切相關，沒有血管及淋巴管循環，腫瘤組織不可能增大，腫瘤細胞也不會發生轉移［6］。但這一過程有需要相關因子參加，VEGF-C是VEGF家族蛋白的一種重要蛋白，可以促進血管及淋巴管內皮細胞生長，對腫瘤組織中血管淋巴管網絡形成具有重要意義。VEGF-C在多種腫瘤中有高表達，并且與腫瘤的轉移密切相關，我們在實驗中也觀察到了VEGF-C在食管癌生長到轉移過程中變化較大，即腫瘤組織表達高于正常組織，發生淋巴轉移組高于未發生淋巴轉移組，表明了VEGF-C是食管癌疾患中發生與發展的重要調節因子。

綜上所述，CD44v6和VEGF-C均可能參與了食管癌中癌細胞的轉移過程，更有意義的發現在于對 ERK與 CD44v6和VEGF-C的相關性分析后所得的結果，因為結果提示了ERK的表達與CD44v6和VEGF-C的表達呈正相關，所以ERK可能參與了CD44v6和VEGF-C的調控，可以設想ERK是一條信號傳導通路中一個上游調控蛋白，它的變化對下游蛋白CD44v6和VEGF-C有直接的影響，如能控制ERK高表達是否會對CD44v6和VEGF-C的表達產生影響則需要進一步研究，而且機體內信號傳導通路存在復雜的網絡性，所以確切的機制還需要大量的研究。

我們對食管癌中ERK、VEGF-C、CD44v6三者表達及相互關系研究中，可以得出初步結論：ERK、VEGF-C、CD44v6不但參與了食管癌的轉移過程，而且三者之間存在相互調節機制，所以它們可能成為以后進一步研究的重要靶點。

1 Wang H，Yu J，Wang LF，etal.The expression of aromatase cytochrome P450 in eutopic endometrium and its clinical significance.Practi Obstetrics Gynecol，2003，19：95-98.

2 Chen TP，Chen CM，Chang HW，etal.Increased expression of SKP2 and phospho-MAPK/ERK1/2 and decreased expression of p27 during tumor progression of cervical neoplasms.Gyaecol Oncol，2007，104：516-523.

3 慶琳琳，胡繼春，趙曉志.結直腸腺癌中skp2、p27kip1、ERK蛋白的表達及意義.山東醫藥，2011，51：60-62.

4 胡大為，敖亞洲，物景哲，等.CD44v6、p27表達與大腸癌臨床病理學因素的關系.腫瘤研究與臨床，2009，21：597-599.

5 王洪遠，費洪鈞，梁雅靜.食管癌組織中上皮鈣黏素，CD44v6和血管內皮生長因子C表達與淋巴結轉移的關系.腫瘤防治研究，2010，22：755-757.

6 王雪平，赫建平，羅玉賢，等.TRAIL、MMP-2及TIMR2在大腸癌中的表達及意義的研究.河北醫藥，2011，33：971-974.