化濁解毒愈瘍湯對濁毒內(nèi)蘊型胃潰瘍大鼠血清TNF-α、胃黏膜SOD的影響*

王紅霞，張曉艷，孫園園，董笑一，豆志偉，曹東義

(1.河北省中醫(yī)藥研究院，石家莊 050031;2.河北醫(yī)科大學(xué)，石家莊 050011)

化濁解毒愈瘍湯是曹東義教授在濁毒理論指導(dǎo)下，結(jié)合自己多年來的臨床經(jīng)驗總結(jié)出的治療胃潰瘍的經(jīng)驗方，在臨床上取得治愈率高、復(fù)發(fā)率低的滿意療效。本實驗通過制造濁毒內(nèi)蘊型胃潰瘍大鼠模型，觀察化濁解毒愈瘍湯對實驗性大鼠血清中腫瘤壞死因子-α及胃黏膜SOD影響的實驗研究，進一步探討其對濁毒內(nèi)蘊型胃潰瘍的治療作用及機制，為臨床治療胃潰瘍提供進一步的實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 動物

50只清潔級 Wistar雄性大鼠，體質(zhì)量 180～250g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供(合格證號(冀)2004-1-00)。

1.2 藥物

化濁解毒愈瘍湯藥物組成:白芍30g，甘草6g，黃連 6g，茯苓 15g，白術(shù) 9g，煅瓦楞粉 30g，煅牡蠣30g，當(dāng)歸 12g，苦參 6g，蒲公英 20g，積雪草 15g。所需中藥均購自河北省中醫(yī)藥研究院，并由制劑室煎成湯劑。雷尼替丁膠囊由河北永豐藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(0.15g/粒，批號國藥準(zhǔn)字 H13020830)。

1.3 試劑

55%乙醇、100%分析純冰乙酸(廣州丹旺貿(mào)易有限公司)、3%戊巴比妥鈉溶液(上海寶曼生物科技有限公司)均由河北省中醫(yī)藥研究院濁毒實驗室提供;TNF-α試劑盒為上海酶聯(lián)生物科技有限公司產(chǎn)品;SOD試劑盒由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。

1.4 儀器

MK3酶聯(lián)免疫檢測儀(芬蘭雷柏公司產(chǎn)品)、600型電熱恒溫水箱(天津產(chǎn))、FJ-2021r-放免計數(shù)器(西安產(chǎn)品)。

2 方法

2.1 藥物制備

中藥常規(guī)水煎煮制成生藥含量為2.26g/ml的溶液，使用時水浴加溫至25℃。雷尼替丁用蒸餾水稀釋至5.74mg/ml的混懸液，均放置于4℃冰箱保存?zhèn)溆茫褂脮r水浴加溫至25℃。

2.2 模型制備

參照呂冠華［1］濕熱環(huán)境加高脂高糖飲食和乙醇的綜合造模加以改進，并用乙酸侵蝕胃壁制造胃潰瘍方法［2］:空白組大鼠飼養(yǎng)于正常環(huán)境中，并給予正常飲食，其余各組大鼠均飼養(yǎng)于高熱潮濕(溫度為32℃，相對濕度為96%)的環(huán)境中，飼以高脂高糖飲食，即在普通飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上，每日每只加用10%蜂蜜自由飲用，且隔日按大鼠體質(zhì)量灌服豬油10g/kg，并與豬油隔日灌服10ml/kg白酒，共為10d。禁食不禁水24h，腹腔內(nèi)按40mg/kg的量注射3%戊巴比妥鈉溶液進行麻醉，之后于劍突下0.5cm縱向切開腹壁2cm，將胃輕移出腹腔，用直徑為5mm的濾紙片浸漬冰乙酸在胃竇部漿膜面貼30s×2次，再用0.9%的氯化鈉沖洗后覆蓋網(wǎng)膜，最后縫合完好。

2.3 動物分組給藥

將50只健康雄性Wistar大鼠隨機分為5組，每組10只，分別為空白組、模型組、雷尼替丁治療組、化濁解毒愈瘍湯高、低劑量治療組。造模后24 h開始給藥治療，化濁解毒愈瘍湯低、高劑量治療組分別按 6.5g/(kg·d)、26 g/(kg·d)灌胃，雷尼替丁治療組按15mg/(kg·d)灌胃，均每天1次;正常對照組、模型組給予蒸餾水灌胃，連續(xù)灌胃2周。

2.4 標(biāo)本采集和處理

灌胃治療2周后頸椎脫臼法處死大鼠，斷頭取血做血清學(xué)檢測，以及用刀片刮取胃竇組織黏膜并稱重，冰浴下制備10%組織勻漿，3000r/min離心15min，取上清－20℃以下保存，留作 SOD。打開腹腔取出鼠胃，將大鼠胃大彎剪開，用生理鹽水沖洗后，沿潰瘍周圍切下約1cm×1cm大小的胃壁，用4%甲醛液固定，用濾紙吸干，石蠟切片5μm厚，蘇木精-伊紅染色法染色(HE染色)，光鏡觀察。

2.5 檢測指標(biāo)及方法

2.5.1 潰瘍指數(shù)測定 在顯微鏡下用游標(biāo)卡尺測量胃潰瘍損傷的長度與寬度，計算潰瘍指數(shù)(UI)=潰瘍最長徑與垂直于最大長徑的最大寬徑之積［3］。

2.5.2 測定血清 TNF-α 各組大鼠取血清用放射免疫分析法測定大鼠血清 TNF-α水平，嚴(yán)格按試劑盒步驟進行。

2.5.3 測 SOD用黃嘌呤氧化酶法測定，方法嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

3 統(tǒng)計學(xué)分析

4 結(jié)果

4.1 各組大鼠胃潰瘍

光鏡下可見，空白組與中藥高劑量治療組大鼠胃竇壁結(jié)構(gòu)無變化，且均未見明顯的炎性細胞浸潤。模型組大鼠胃竇壁結(jié)構(gòu)破壞，漿膜面見有瘢痕組織，并有大量炎性細胞浸潤，潰瘍周圍黏膜腺體間質(zhì)有充血、水腫。西藥治療組與中藥低劑量治療組均見胃竇壁結(jié)構(gòu)接近正常，有少量炎性細胞浸潤。

4.2 各組大鼠胃潰瘍指數(shù)(UI)比較

表1顯示，治療組均能明顯降低 UI，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，中藥低劑量治療組與西藥治療組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

4.3 各組大鼠血清TNF-α含量的比較

表2顯示，與正常組比較，模型組 TNF-α含量升高(P＜0.05);與模型組比較，各治療組 TNF-α含量均顯著降低(P＜0.05)，各治療組之間中藥低劑量組與西藥組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜SOD含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);與模型組比較，各治療組量組大鼠胃黏膜SOD含量均有顯著增高，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，各治療組之間中藥小劑量組與西藥組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 各組大鼠胃潰瘍指數(shù)(±s)mm2

表1 各組大鼠胃潰瘍指數(shù)(±s)mm2

注:與模型組比較:#P＜0.01;與雷尼替丁組比較:▲P＞0.05(n=10)

組別只數(shù) 潰瘍指數(shù)(mm2)模 型 組10 25.06±1.68雷 尼 替 丁 組 10 8.02±1.23#中藥低劑量組 10 7.95±1.08#▲中藥高劑量組 10 7.21±1.67#▲

表2 各組大鼠血清TNF-α和胃黏膜SOD含量比較(±s)

表2 各組大鼠血清TNF-α和胃黏膜SOD含量比較(±s)

注:與正常對照組比較:#P＜0.05;與模型組比較:▲P＜0.05;與西藥治療組比較:△P ＞0.05(n=10)

組別 只數(shù) TNF-α (μg/g prot) SOD(u/mg prot)模 型 組 10 0.998±0.185# 95±50.12#正 常 組 10 0.421±0.098▲ 235±40.82▲中藥高劑量組 10 0.456±0.172▲ 224±30.12▲中藥低劑量組 10 0.531±0.187▲△ 179±28.23▲△西 藥 治 療 組 10 0.565±0.206▲ 184±20.65▲

5 討論

TNF-α又名惡液質(zhì)素，由單核、巨噬細胞產(chǎn)生，是可造成組織廣泛損傷的促炎癥因子。TNF-α是引起潰瘍形成的烈性介質(zhì)，在胃黏膜損傷過程中發(fā)揮作用。TNF-α是重要的致炎因子，可促進其他細胞因子包括 IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、PAF、PGs等繼發(fā)性釋放，并引起中性粒細胞活化，急性期蛋白生成，凝血過程啟動產(chǎn)生小血管內(nèi)凝血，影響?zhàn)つぱ豕┙o加劇損傷，甚至形成潰瘍［4］。TNF與機體的炎癥免疫反應(yīng)有密切關(guān)系［5］。蘇彩女等［6］通過檢測慢性胃炎患者血TNF-α水平顯著高于正常人的結(jié)果表明，TNF在胃炎的病理損傷過程中起重要的作用，并認為其升高原因可能是患者炎癥反應(yīng)激活巨噬細胞的結(jié)果。于海等［4］通過實驗觀察到除單寒組外，消炎痛型胃潰瘍各模型大鼠血清TNF-α含量均顯著升高。腫瘤壞死因子(tumor necrosis factorα，TNF-α)是促炎癥反應(yīng)因子，具有廣泛的生物學(xué)功能，在細胞生長死亡、腫瘤形成、免疫反應(yīng)和應(yīng)激反應(yīng)諸方面都具有重要作用［7］。它也能更強地誘導(dǎo)一氧化氮(NO)和誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iN0S)的合成，進一步加重炎癥反應(yīng)［8］。一定含量的自由基對人體有生理作用，但其產(chǎn)生過多就會超出機體的清除能力，進而對機體造成損傷［9］。過氧化物歧化酶(SOD)在自由基清除系統(tǒng)是占重要位置的酶類，在胃壁細胞內(nèi)活性很強。SOD能夠及時有效地清除體內(nèi)自由基，從而免除自由基對機體造成的損害作用。體內(nèi)SOD含量的大小，在一定程度上反映了機體清除自由基能力的大小。

郭喜軍等［10］認為，濁毒的形成是致病因素之一，濁毒相關(guān)為害乃胃潰瘍病機關(guān)鍵之所在。化濁解毒愈瘍湯由白芍、甘草、黃連、茯苓、白術(shù)、煅瓦楞粉、煅牡蠣、當(dāng)歸、苦參、蒲公英、積雪草、地錦草等組成，用于治療濕熱內(nèi)運型胃潰瘍，具有燥濕化濁、清熱解毒、抑酸止痛作用。方中的苦參、蒲公英、黃連燥濕化濁解毒;茯苓、白術(shù)健脾祛濕解毒;瓦楞粉、煅牡蠣抑酸止痛;當(dāng)歸、白芍、甘草益氣養(yǎng)血緩急止痛。現(xiàn)代藥理研究證實，黃連含黃連堿、甲基黃連堿等，具有較強的抗菌、抗炎、抗癌作用，對幽門螺旋桿菌有較強的抑菌作用，能夠協(xié)同西藥根除幽門螺旋桿菌［11］。白芍、炙甘草均能抑制胃酸分泌、抗炎、緩解胃腸平滑肌痙攣［12］;蒲公英有良好的抗菌活性，對幽門螺旋桿菌有很好的抑制作用［13］。施之琪等［14］通過實驗研究認為，雪草總苷在一定程度上可以刺激胃黏膜肉芽組織生長，促進炎癥修復(fù)和潰瘍愈合，對于胃潰瘍具有一定的預(yù)防及治療作用。曹瑞珍［15］等研究表明，地錦草提取物可明顯提高小鼠血液SOD活性，提高機體的抗氧化能力。胡素敏等［16］研究發(fā)現(xiàn)，中藥張氏益胃湯有明顯修復(fù)潰瘍作用，其機制可能是通過降低潰瘍大鼠血清TNF-α水平。本實驗研究表明，胃潰瘍模型組與正常對照組比較大鼠血清TNF-α明顯升高;胃黏膜SOD含量顯著降低，中藥及西藥均能明顯降低大鼠血清 TNF-α含量及增加胃黏膜SOD含量且潰瘍指數(shù)明顯減小(P＜0.01)，說明中藥化濁解毒愈瘍湯與西藥雷尼替丁均對實驗性胃潰瘍大鼠具有良好的治療作用。其機制可能是通過降低潰瘍大鼠血清TNF-α含量、增加胃黏膜SOD含量、減輕自由基對胃黏膜造成的損害，從而達到治療的目的。實驗還說明，中藥與西藥在治療本病近期療效方面無明顯優(yōu)勢，且中藥的劑量越大越明顯。但是從長遠療效方面，中藥無明顯毒副作用更應(yīng)值得推廣與應(yīng)用，可創(chuàng)造社會及經(jīng)濟效益。

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