卵巢上皮性腫瘤中P27和P53蛋白的表達及其相關性研究

高會玲 焦悅 孫樹靜

在婦科腫瘤中，卵巢癌是死亡的首要原因，其生存時間明顯低于五年［1］。對于卵巢癌早期診斷而言，沒有一種理想的腫瘤標志物可以達到滿意的靈敏度和特異性。國內外學者目前都在致力于研究能夠預測惡性腫瘤患者預后的生物學指標，目的是更合理的應用綜合治療方法，以提高患者的生存期。細胞生物學因子P27及P53都是與細胞周期Gl期檢查點(Check-Point)相關的抑癌基因，其蛋白異常表達與腫瘤的發生、發展及預后密切相關。本研究應用免疫組織化學方法檢測100例上皮性卵巢腫瘤組織中P27及P53蛋白的表達情況，研究P27及P53在上皮性卵巢腫瘤組織中的表達，探討它們在上皮性卵巢腫瘤發生發展中的作用及其相互關系，并為上皮性卵巢腫瘤治療監測和預后評估提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料 120例標本均來自于河北醫科大學第四醫院2008年至2009年手術病例。分為3組：(1)卵巢上皮性良性腫瘤組25例(良性組)，年齡15～45歲;(2)卵巢上皮性交界性腫瘤組18例(交界性組)，年齡25～55歲;(3)卵巢上皮性惡性腫瘤組57例(惡性組)，年齡36～75歲，其中卵巢漿液性囊腺癌39例，黏液性囊腺癌9例，卵巢子宮內膜樣癌9例。卵巢癌中Ⅰ～Ⅱ期14例，Ⅲ～Ⅳ期43例(根據國際婦產科學會制定的卵巢癌FIGO分期);高中分化34例，中低分化23例，盆腔淋巴結轉移8例。并取正常卵巢組織20例作為對照組，年齡35～55歲。標本經10%甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚連續切片，粘貼于涂有0.05%多聚賴氨酸的載玻片備用。

1.2 方法 采用免疫組織化學S-P法，免疫組化結果按陽性細胞百分比及陽性細胞染色強弱評分(immunohistochemical scores，IHS)：IHS=A×B判定。P27蛋白免疫組化染色陽性定位于細胞核及胞漿，P53蛋白免疫組化染色陽性定位于細胞核，二者陽性均呈棕黃色或棕褐色顆粒。光鏡分析按AB值法(A代表顯色深淺，B表示顯色細胞所占的比例)。AB法判斷：A：無顯色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分;B：1分顯色細胞少于1/3，2分顯色細胞占1/3～2/3，3分顯色細胞多于2/3。每個細胞陽性表達的積分(A×B)可分為四級：“-”(陰性)積分為0分;“+”(弱陽性)積分為1～3分;“++”(陽性)積分為4～6分;“+++”(強陽性)積分6分以上。染色特征及結果判定用已知的陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件，組間率的比較采用χ2分割法和確切概率法(Fisher’s Exact Test);P27和P53的相關性采用Spearman等級相關分析，P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 P27蛋白在不同卵巢組織中的表達情況 P27染色陽性為胞核及胞漿內出現棕黃色顆粒為陽性，其在正常卵巢、良性腫瘤、交界性腫瘤及卵巢癌中的表達情況見表1～2，陽性表達率分別為90.00%，80.00%，55.56%和36.84%，惡性組P27蛋白表達明顯低于正常組和良性組，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1～3。

2.2 P27與卵巢癌組織臨床病理學特征的關系 卵巢上皮性癌中，P27陽性表達率在＜50歲和≥50歲患者、在卵巢癌不同病理類型中差異無統計學意義(P＞0.05);在不同的組織學分級中(G1～G2，G3)P27陽性表達率分別為69.57%及14.71%，組間比較差異有統計學意義(P＜0.05);在不同的臨床分期中早期癌(Ⅰ～Ⅱ期)與晚期癌(Ⅲ～Ⅳ期)P27陽性表達率分別為71.43%及25.58%，組間比較差異有統計學意義(P＜0.05)。淋巴結有轉移組P27陽性率低于無轉移組，但差異無統計學意義(P＞0.05)。見表3。

表1 4組卵巢組織p27 IHS分值 例

表2 p27陽性表達χ2檢驗比較

表3 P27蛋白在不同病理類型卵巢組織表達比較

2.3 P53蛋白在不同卵巢組織中的表達情況 P53蛋白免疫組化染色陽性主要定位于細胞核，其在正常組織中未見表達，在卵巢良性、交界性及惡性腫瘤中陽性表達率逐級增高，分別為12.00%，16.67%和63.16%，惡性組P53蛋白表達明顯高于良性組和交界性組(P＜0.05)。見表4～6。

2.4 P53與卵巢癌組織臨床病理學特征的關系 卵巢上皮性癌中，P53陽性表達率在＜50歲和≥50歲患者、在卵巢癌不同病理類型中差異無統計學意義(P＞0.05);在不同的組織學分級中(G1～G2，G3)P53陽性表達率分別為43.48%及76.47%，差異有統計學意義，低分化的卵巢癌陽性表達率明顯高于高分化組;在不同的臨床分期中早期癌(Ⅰ～Ⅱ期)與晚期癌(Ⅲ～Ⅳ期)P53陽性表達率分別為35.71%及72.09%，組間比較差異有統計學意義(P＜0.05)。說明P53蛋白表達陽性率與組織學分型、臨床分期有關，差異有統計學意義(P＜0.05)。淋巴結有轉移組P53陽性率低于無轉移組，但差異無統計學意義(P ＞0.05)。見表6。

2.5 P27和P53在卵巢癌組織中表達的相關性 57例卵巢癌組織中P27與P53表達，二者在卵巢癌組織中呈明顯負相關關系(Rs=-0.397，P ＜0.05)。見表7。

表4 4組卵巢組織p53 IHS分值 例

表5 p53陽性表達χ2檢驗比較

表6 P53蛋白在不同病理類型卵巢組織表達比較

表7 P27和P53在卵巢癌組織中表達的相關性 例

3 討論

大量研究證明P27蛋白表達的缺失或減少與消化道癌癥、肺癌、腎癌、前列腺癌等惡性腫瘤的浸潤性增加及預后不良密切相關［2］。本實驗通過免疫組化S-P方法對100例卵巢上皮性腫瘤以及20例正常卵巢上皮組織中的P27蛋白的表達進行檢測，結果可見P27蛋白陽性表達定位于胞漿及細胞核中，在正常組織中P27蛋白陽性表達主要定位于細胞核中，但在卵巢上皮性癌中陽性表達主要定位于細胞漿中，本實驗結果提示P27蛋白在卵巢正常上皮組織、良性腫瘤、交界性腫瘤及惡性腫瘤細胞核內的表達陽性率有顯著差異(P＜0.05)，其在卵巢惡性腫瘤中的表達明顯低于正常卵巢組織，這與姚軍等［3］研究結果一致。并且本實驗結果提示P27蛋白表達的陽性率與卵巢癌組織分化程度、臨床分期有關，差異有統計學意義(P＜0.05)。在卵巢惡性腫瘤中，臨床分期越高、組織分化程度越低者P27蛋白的陽性表達率越低。P27蛋白的表達在低分化組明顯低于中高分化組，差異有統計學意義(P＜0.05)，P27蛋白的表達在臨床分期Ⅲ～Ⅳ期明顯低于Ⅰ～Ⅱ期，差異有統計學意義(P ＜0.05)，這與 Shimizu等［4］研究結果一致，但其認為P27蛋白的表達只與惡性腫瘤臨床分期相關，臨床分期是惟一影響預后的獨立預后因素。這種差異可能與樣本量大小、臨床分期及組織學分型等多個因素有關，有待進一步對卵巢惡性腫瘤患者進行大規模、系統性的研究，進而得出較可靠的一致性的結論。本實驗中，卵巢癌中的P27蛋白表達明顯低于卵巢正常組織、良性腫瘤及交界性腫瘤，而臨床期別越晚，組織分化程度越低，P27蛋白的表達越低。提示P27蛋白的表達與臨床分期及組織分化相關(P＜0.05)。說明P27在卵巢腫瘤中的發生發展、評估預后，指導治療及逆轉腫瘤耐藥中發揮重要作用。

現在已逐漸明確，P53基因分為野生型P53基因和突變型P53基因。野生型P53基因在維持細胞的正常生長、抑制腫瘤細胞的增殖中起到了重要作用，而研究已證實突變型P53基因具有癌基因的功能，對細胞增殖有正性調控作用，促進瘤細胞向惡性轉化［5］。P53蛋白的異常表達被認為是P53基因突變的標志。本實驗通過免疫組化S-P方法對100例卵巢上皮性腫瘤及20例正常卵巢上皮組織中的P53蛋白的表達進行檢測，結果發現大部分的腫瘤細胞核中可見P53蛋白表達。P53蛋白在卵巢正常上皮組織中不表達，而在卵巢良性腫瘤組織，交界性腫瘤組織及卵巢惡性腫瘤組織中表達的陽性率有顯著差異(P ＜0.05)，這與多項研究結果［6，7］一致。P53 蛋白的表達上調提示P53基因的表達在卵巢癌發生發展中起重要作用，提示P53基因的突變與卵巢腫瘤惡性轉化直接相關。本實驗結果還提示P53蛋白表達的陽性率與年齡、淋巴結轉移及組織學類型無關，差異無統計學意義(P＞0.05)。但有文獻報道P53蛋白的表達與年齡、淋巴轉移及組織學類型的關系還存在爭議。可能與收集的樣本數、實驗方法等因素有關，也可能與卵巢腫瘤在惡性發展中還有其他原癌基因激活和抑癌基因失活有關。而本實驗結果提示P53蛋白表達的陽性率與卵巢癌組織分化程度、臨床分期有關。組織分化越低，臨床期別越高，P53蛋白的表達陽性率越高，差異有統計學意義(P＜0.05)，提示P53基因的突變可能是發生在卵巢癌發生的早期，是卵巢癌發生過程中的早期事件，可以推測P53的表達是提示卵巢惡性腫瘤預后的一個十分有意義的指標，

目前國內外文獻對二者在卵巢上皮性腫瘤中的表達鮮見報道。本研究采用IHS評分法對每張病理切片進行綜合客觀的評分，對P27及P53在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤、卵巢交界性腫瘤及上皮性卵巢癌組織中表達的相關分析，結果顯示：在卵巢上皮性腫瘤中P27和P53蛋白的IHS分值呈負性相關關系，表明兩者在卵巢上皮性癌的發生、發展中發揮一定的相互作用。P53蛋白的陽性表達率越高說明細胞DNA損傷越嚴重，它與P27蛋白的表達呈負性相關，可以解釋為在M期腫瘤細胞損傷越多(即P53高表達)，其后在從G1向S期的轉化過程中受P27的抑制作用越少(即P27低表達);反之，若在M期受到P53的抑制越少(即P53低表達)，那么在從G1向S期的轉化過程中受P27的抑制越大(即P27高表達)。證實了P27和P53具有相當的預后價值，特別是同時兩者檢測意義更大。本實驗研究雖然討論了兩者之間的關系，但細胞周期的調控還有很多因素參與。影響卵巢癌的諸多相關因子并非彼此獨立的起作用，其相互之間存在著內在聯系，各自的作用及相互之間的作用機制尚待研究，多因素的檢測對卵巢癌的早期診斷、惡性程度的判斷具有一定意義，對于評價預后，指導卵巢癌的多基因治療，提高治療效果發揮著重要的作用。

1 Matin AG，Femandez CM.Lights and shadows of the tumoral marker CA-125 in ovarian cancer.Clin Transl Oncol，2009，10：449-452.

2 張鳳艷，張金子，鄒樹彪，等.胃癌組織中P21 P27 P53和Rb的表達及臨床意義.臨床與實驗病理性雜志，2011，27：586-589.

3 姚軍，曾永群，黃健.P27蛋白在卵巢癌組織中的表達變化及意義.山東醫藥，2009，49：63-66.

4 Shimizu M，Nikaido T，Toki T，et al.Clear cell carcinoma has an experssion pattern of cell cycle regulatory molecules that is unique among varian adenocarcinomas.Cancer，1999，85：669-677.

5 崔斬霞，王海軍惠起源.胃粘膜不同病變組織中突變型P53蛋白表達的研究.延安大學學報(醫學科學版)，2008，6：3-4.

6 徐海耿，王華.P53基因在上皮性卵巢癌的表達及臨床意義.中華臨床醫學，2006，6：489-490.

7 Lee JS，Choi YD，Lee JH，et al.Expression of cyclooxgyenase-2 in peithelial ovarian tumors and its relation to vascular endothelial gorwth factor and P53 expression.Enterational Joumal of Gynecologieal Cancer，2006，16：1247-1253.