結腸癌組織中AQP1表達與臨床病理特征的關系及預后意義

石曉明 吳勝春 楊永賓 唐雷 王躍欣 呂柏楠

結腸癌是我國常見的消化道惡性腫瘤，近年來發(fā)病率一直處于上升趨勢。但由于結腸癌早期臨床表現不典型，就診時多已處于進展期，治療效果及預后都不理想。如能發(fā)現與結腸癌發(fā)生進展關系密切的基因，則有可能作為腫瘤標志物、預后因子，還有可能作為新的結腸癌生物治療靶點。關于結腸癌新基因的研究目前已成為熱點，但迄今尚未取得突破性進展。新近研究發(fā)現，水通道蛋白家族(AQPs)的多個成員與許多惡性腫瘤關系密切［1-3］，已引起學者們的關注。其中水通道蛋白1(AQP1)在結腸癌等疾病中表達增高［4，5］，但有關 AQP1在結腸癌中具體臨床意義的研究尚不多見。故本研究檢測了AQP1蛋白在結腸癌組織中的表達，進一步對AQP1與結腸癌臨床病理特征及腫瘤預后的關系進行了分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2007年9月至2010年10月在我院普外科住院手術并術后病理確診的結腸原發(fā)癌石蠟標本54例，并取其中40例的癌旁組織標本。所有患者的臨床病理資料均記錄完整，術后均以月為單位進行隨訪?；颊咧心?0例，女14例;年齡38～74歲，中位年齡58歲。兔抗人AQP1多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，免疫組化試劑盒為福建邁新生物技術公司產品。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色：石蠟標本連續(xù)4μm切片，脫蠟水化后3%過氧化氫孵育，蒸餾水沖凈后以PBS浸泡進行抗原修復。嚴格按免疫組化試劑盒要求進行操作：工作液封閉、加入一抗、孵育并沖洗后依次加二抗工作液、辣根酶標記鏈酶卵白素工作液。DAB顯色，蘇木素復染后進行脫水，最后中性樹脂封片，分別進行HE和免疫組化染色。

1.2.2 結果判斷：免疫組化結果由2名病理專業(yè)醫(yī)師進行雙盲閱片。每張切片隨機取5個高倍視野(×400)，每個視野均隨機計數100個細胞，計算陽性率。AQP1以黃色或棕黃色顆粒出現在細胞膜和細胞漿內為結果陽性。AQP1陽性記分標準：細胞內無陽性表達為(-)，＜50%細胞陽性表達為(+)，≥50%細胞陽性表達為(++)。

1.3 統(tǒng)計學分析 應用SAS8.0統(tǒng)計軟件，采用χ2檢驗、Kaplan-Meier生存分析檢驗等方法對實驗數據進行處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 結腸癌與癌旁組織AQP1表達比較 結腸癌組織中AQP1表達陽性率為75.93%(41/54)，而癌旁組織AQP1陽性率為22.50%(9/40)。AQP1在結腸癌組織中表達明顯高于癌旁組織(χ2=26.34，P ＜0.05)。

2.2 AQP1表達與結腸癌臨床病理特征之間的關系 結果顯示，AQP1表達與結腸癌的浸潤深度、脈管瘤栓、淋巴結轉移情況有關(P＜0.05)，AQP1陽性表達的患者腫瘤浸潤深度更深、脈管瘤栓和淋巴結轉移的陽性率更高;而AQP1表達與結腸癌患者的性別、年齡、腫瘤長徑、腫瘤部位、分化程度、臨床分期、是否遠處轉移等特征無關(P＞0.05)。見表1。

2.3 AQP1表達與胃癌患者預后關系 54例患者中有47例得到隨訪數據，失訪率12.96%。對47例患者進行Kaplan-Meier生存分析檢驗，AQP1陽性患者的平均生存期為(16±8)月，陰性患者平均生存期為(28±15)月，2組比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.738，P=0.030)。見圖 1。

3 討論

結腸癌是我國常見的消化道惡性腫瘤，隨著生活水平的不斷提高，近年來該病的發(fā)生率在國內外均處于上升趨勢，嚴重威脅人民健康。由于結腸癌起病比較隱匿、早期無明顯特異癥狀，患者就診時經常已處于進展期，甚至已無手術機會，預后很差。因此，確定影響結腸癌的基因并將這些基因作為腫瘤標志物、預后判斷因子及生物治療的靶標已成為當前結腸癌研究的趨勢。水通道蛋白1(AQP1)即為目前受到關注的基因之一。迄今AQPs家族已發(fā)現13個家族成員(AQP0-AQP12)，可轉運水分子、甘油及其他小分子物質。AQP1為水通道蛋白家族的成員之一，基因定位于染色體7p14，蛋白質分子量為28kD，以四聚體形式存在于細胞膜上［6］。國內外研究均有報告認為AQP1可促進腫瘤新生血管的形成，可以促進腫瘤的侵襲、轉移，在宮頸癌、結直腸癌、肺癌等多種惡性腫瘤中均存在高表達［2，4，5，7］。且體外實驗表明，抑制其表達可有效逆轉腫瘤細胞的侵襲轉移能力［7，8］。說明AQP1與腫瘤發(fā)生進展關系密切。

表1 結腸癌AQP1表達與臨床病理特征的關系例

圖1 AQP1表達與結腸癌患者預后關系的Kaplan-Meier生存分析結果

另有研究表明AQP1與膽道腫瘤、胸膜惡性間皮瘤、腎癌等惡性腫瘤的預后有關［9-11］，而關于AQP1與結腸癌臨床病理特征及預后關系的報道尚不多見。

本研究結果發(fā)現，AQP1在結腸癌組織中表達明顯高于癌旁組織，提示AQP1表達與腫瘤發(fā)生、進展有關，與其他研究結果類似［2-5］。AQP1與腫瘤的浸潤深度、淋巴結轉移及脈管瘤栓情況有關，AQP1表達陽性的結腸癌患者腫瘤浸潤較深、淋巴結轉移率較高、脈管瘤栓情況也更為嚴重，說明AQP1與結腸癌的侵襲轉移行為有關，與國內孔斌等［12］研究的結果相似。但AQP1促進結腸癌侵襲轉移的機制還不明確，有待進一步深入研究。本研究進行的預后分析顯示，AQP1表達陽性的患者生存期較陰性者短，預后較差。這些結果說明AQP1與結腸癌進展、轉移有密切關系，并可作為預后指標。但本研究樣本量不大、隨訪時間也較短，還有待進一步擴大研究規(guī)模、延長隨訪時間，對AQP1在結腸癌中的確切作用予以證實。

本研究發(fā)現AQP1與結腸癌的臨床病理特征有關，且對結腸癌預后有較好的預測作用。但本研究樣本量較小，且僅對一些臨床指標進行了分析，具體機制并不明確。因此，進一步研究擴大樣本例數、延長隨訪時間，并對AQP1進行功能和機制研究，對闡明AQP1在結腸癌中的具體作用、促進結腸癌診治水平進步具有重要意義。

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