自擬康腎口服液對水負(fù)荷大鼠模型的影響

易偉國，趙京生，張正臣

腎臟病多數(shù)屬“水腫、腰痛”等病范疇。病因多端，是由于風(fēng)邪外襲，或飲食所傷，或勞逸失衡，久居濕地等所致。不論外感或內(nèi)傷，均為肺脾腎三臟水液代謝失常所致，尤以脾腎所傷為主，治療宜益氣溫陽，固本澀精，活血通絡(luò)?？的I口服液方中以人參、黃芪為君藥，兩藥為辛、溫之品，入脾腎二經(jīng)，補(bǔ)腎健脾，固本澀精；山藥、白術(shù)等健脾生精化源為臣藥，重在補(bǔ)后天之本，以助先天之本；淫羊藿、芡實(shí)、金櫻子溫陽固本升清，澀精，以不致精微外泄；地龍、紅花化瘀血通經(jīng)絡(luò)，共為佐藥，使脾腎之絡(luò)氣通暢，又能升輕而降濁；甘草調(diào)和諸藥，又能緩和諸藥陽熱過甚，兼有氣血雙補(bǔ)之功；以上諸藥密切配合，重點(diǎn)旨在補(bǔ)腎健脾，兼而活血，使正氣自復(fù)，瘀血自除，腎病得愈。為探究療效原理筆者對康腎口服液對水負(fù)荷大鼠模型的影響進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品 康腎口服液，由人參、生黃芪、白術(shù)、茯苓、淫羊藿、懷山藥、地龍、紅花、金櫻子、芡實(shí)、甘草等組成，具有益氣溫陽，固本澀精，活血通絡(luò)之功，用于慢性腎炎、腎病綜合征、陽痿早泄等作用，由解放軍第371醫(yī)院制劑室提供，批號20110425；尿毒清顆粒，康辰藥業(yè)（內(nèi)蒙古）有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號20110114；呋塞米，天津力生制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號1101008；氯化鈉注射液，河南太龍藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號11082465；血清鉀測試盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號20120104；氯化物測定試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號20120104；鈉測定試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號20120104。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠，清潔級，河北省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供（合格證號1112130）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 UV－2000紫外可見分光光度計(jì)，尤尼柯(上海)儀器有限公司；TGL-16G臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；可調(diào)式移液器，上海雷勃分析儀器有限公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 取清潔級體重180～200 g大鼠，Wistar，雄性；實(shí)驗(yàn)前先篩選大鼠泌尿作用，大鼠禁食不禁水12 h，灌服25 ml/kg的生理鹽水，2 h內(nèi)收集的尿量達(dá)到所灌入量的40%以上的大鼠可用于利尿?qū)嶒?yàn)。取篩選合格的大鼠72只，隨機(jī)分為6組，12只/組，分別灌服大、中、小劑量康腎口服液（20 ml原藥液/kg、10 ml原藥液/kg、5 ml原藥液/kg，原藥液、生理鹽水稀釋1倍、生理鹽水稀釋2倍，2 ml/100 g）、尿毒清顆?；鞈乙海?.2 g/kg，用生理鹽水配成0.21 g/ml，2 ml/100 g）、呋塞米片混懸液 （6.6 mg/kg，用生理鹽水配成 0.33 mg/ml，2 ml/100 g）和同體積的生理鹽水（2 ml/100 g）；給藥 1次/d，連續(xù)給藥7 d。于第6天晚上大鼠禁食不禁水，第7天禁食不禁水16 h，給各組大鼠灌服生理鹽水25 ml/kg，并輕壓下腹部使膀胱排空；30 min后各組灌服相應(yīng)藥物，立即將大鼠放入代謝籠內(nèi)（每籠1只），量計(jì)尿量1次/h，共計(jì)5 h，收集給藥后 5 h 總尿量，測尿液中 Na+、K+、Cl-的濃度。

1.5 含量測定

1.5.1 血清K+的測定 （比濁法） 樣本前處理：取血清0.1 ml加蛋白沉淀劑0.9 ml，3500 r/min離心5 min，取上清0.5 ml，進(jìn)行鉀的測定。定值血清必須同樣進(jìn)行蛋白沉淀。

計(jì)算：血清鉀含量（mmol/L）=測定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×標(biāo)準(zhǔn)濃度×樣本測試前稀釋倍數(shù)（10）

1.5.2 鈉的測定 計(jì)算公式：C樣=A樣/A標(biāo)×C標(biāo)

1.5.3 氯化物的測定 （手工試劑） 計(jì)算公式：氯離子含量（mmol/L）=測定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×100 mmol/L

與生理鹽水組比，在第1小時(shí)，小劑量康腎口服液組和呋塞米片組可顯著增加大鼠尿液量 （P<0.01）；在第2小時(shí)，各給藥組均有增加大鼠尿液量的趨勢；在第3小時(shí)，大劑量康腎口服液組可顯著增加大鼠尿液量（P<0.01），中劑量康腎口服液組和尿毒清顆粒組可明顯增加大鼠尿液量 （P<0.05）；在第3、4小時(shí)，各給藥組增加大鼠尿液量不明顯；中、小劑量康腎口服液組、尿毒清顆粒組和呋塞米片組均可顯著增加大鼠5 h總尿量（P<0.01），大劑量康腎口服液組僅有增加大鼠5 h總尿量的趨勢 （P>0.05）；以中、小劑量康腎口服液組對水負(fù)荷大鼠模型5 h尿量增加作用為好。見表1。

與生理鹽水組比，大、中、小劑量康腎口服液組、尿毒清顆粒組和呋塞米片組均可顯著增加尿液中尿氯離子含量（P<0.01）；大、中劑量康腎口服液組、尿毒清顆粒組和呋塞米片組均可顯著增加尿液中尿鈉離子含量（P<0.01），小劑量康腎口服液組僅有增加尿液中尿鈉離子含量的趨勢（P>0.05）；尿毒清顆粒組可顯著增加尿液中尿鉀離子含量 （P<0.01），大、中、小劑量康腎口服液組和呋塞米片組僅有增加尿液中鉀離子含量的趨勢（P>0.05）。見表2。

3 討 論

康腎口服液對水負(fù)荷大鼠模型的影響中與對照組比，康腎口服液各組和呋塞米片組可顯著增加大鼠尿液量（P<0.01）；康腎口服液和尿毒清顆粒可明顯增加大鼠尿液量（P<0.05）；康腎口服液、尿毒清顆粒和呋塞米片均可顯著增加大鼠5 h總尿量 （P<0.01），但以中、小劑量康腎口服液組對水負(fù)荷大鼠模型5 h尿量增加作用為好?？的I口服液、尿毒清顆粒和呋塞米片均可顯著增加尿液中尿氯離子含量 （P<0.01）；均可顯著增加尿液中尿鈉離子含量（P<0.01）；尿毒清顆粒可顯著增加尿液中尿鉀離子含量（P<0.01），康腎口服液和呋塞米片僅有增加尿液中尿鉀離子含量的趨勢（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)提示：康腎口服液有較好的利尿作用。

表1 各組大鼠各時(shí)點(diǎn)尿量（±s，ml）

表1 各組大鼠各時(shí)點(diǎn)尿量（±s，ml）

注：與生理鹽水組比，*P<0.05，#P<0.01

組別 n生理鹽水組 12呋塞米片組 12尿毒清顆粒組 12大劑量康腎口服液組 12中劑量康腎口服液組 12小劑量康腎口服液組 12劑量（ml原藥液/kg） 1 h 2 h 3 h 4 h 5 h 5 h總尿量2.3±1.3 0.9±0.4 0.6±0.3 0.3±0.3 0.3±0.3 4.3±1.2 6.6 mg 5.3±1.7# 1.2±0.5 0.4±0.2 0.2±0.2 0.2±0.3 7.3±1.5#4.2 g 1.8±1.5 1.6±0.8 1.0±0.4* 0.3±0.4 0.4±0.2 5.2±1.1#20 1.3±1.4 1.3±0.6 1.2±0.6# 0.4±0.4 0.4±0.4 4.6±1.6 10 2.0±0.7 1.6±0.8 0.9±0.4* 0.5±0.4 0.3±0.3 5.2±0.9#5 2.9±0.7# 1.1±0.8 0.7±0.5 0.4±0.3 0.3±0.3 5.3±1.2#

表2 各組大鼠尿中 Na+、K+、Cl-含量（±s，mmol/L）

表2 各組大鼠尿中 Na+、K+、Cl-含量（±s，mmol/L）

注：與生理鹽水組比，*P<0.05，#P<0.01

組別 n生理鹽水組 12呋塞米片組 12尿毒清顆粒組 12大劑量康腎口服液組 12中劑量康腎口服液組 12小劑量康腎口服液組 12劑量 尿Cl- 尿Na+ 尿K+37.40±14.07 60.00±5.78 32.76±6.65 6.6 mg 62.33±13.90# 73.20±9.20# 33.24±5.59 4.2 g 68.93±16.52# 69.53±5.03# 40.69±8.55*20 ml原藥液/kg 73.62±16.99# 81.73±13.34# 36.51±7.27 10 ml原藥液/kg 67.97±18.76# 70.86±11.37# 38.43±6.60 5 ml原藥液/kg 57.24±19.13# 67.57±11.84 35.01±6.05

志謝 本實(shí)驗(yàn)在河南中醫(yī)學(xué)院苗明三教授指導(dǎo)下完成，特此致謝

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