黨參多糖口服液對小鼠免疫功能的影響

晏永新，張 麗，賈海芳，江潤蓓，方學鋒，舒文林

(1．江西新世紀民星動物保健品有限公司，南昌 330096;2．江西出入境檢驗檢疫局綜合技術中心，南昌 330002)

黨參具有補中益氣，健脾益肺之功效，動物臨床常用于畜禽脾胃虛弱，少食腹瀉，肺虛咳喘，體倦無力，氣虛垂脫。研究表明，黨參多糖是黨參的主要有效成分，具有免疫調節、消除自由基、造血、抗疲勞及提高動物生產性能等作用［1－2］。本公司以黨參多糖為研究對象，開發了動物免疫增強劑黨參多糖口服液，并通過測定小鼠免疫臟器指數、網狀內皮系統吞噬功能、半數溶血值等指標的變化評價其對免疫系統的作用，為黨參多糖口服液的生產和臨床提供理論依據。

1 材料與方法

1．1 材料 試驗動物:昆明種小鼠，雌雄兼備，體重18～22 g，由江西中醫學院實驗動物中心提供。試驗藥品:黨參多糖口服液:由黨參藥材經過多糖提取濃縮等工藝制得，規格:100 mL/瓶，2 g生藥，江西新世紀民星動物保健品有限公司提供，批號:20100501，試驗前根據給藥量適當濃縮;人參口服液，吉林省通化博祥藥業有限公司，國藥準字Z20075112，批號:20091201。試驗器材:4號針頭、723分光光度計、離心機(TLG－16型，江蘇省金壇市醫療儀器廠)。試劑:印度墨汁，1%明膠液，0．1%Na2CO3;Alsever溶液(葡萄糖 2．05 g、檸檬酸鈉 0．80 g、氯化鈉0．42 g、蒸餾水100 mL，無菌過濾濾過);都氏試劑(碳酸氫鈉 1．0 g、氰化鉀 0．05 g、高鐵氰化鉀0．2 g、蒸餾水1000 mL);環磷酰胺;豚鼠血清(－20℃保存，臨用時生理鹽水1∶10稀釋)。

1．2 方法

1．2．1 黨參多糖口服液對小鼠網狀內皮系統對血流中惰性炭粒的吞噬廓清能力的影響 參照文獻［3］進行試驗。

1．2．1．1 印度墨汁的配制 取印度墨汁，反復振搖至均勻，用1%明膠液稀釋4倍供試驗用。

1．2．1．2 試驗分組及處理 取雄性小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，即空白對照組，陽性藥物對照組(人參口服液5 g生藥/kg)，黨參多糖口服液高、中、低劑量組(分別為 9 g、7 g、5 g 生藥/kg)。按0．2 mL/10 g體重灌胃給藥，空白組給予等容量的生理鹽水，每日1次，連續4 d，末次給藥后24 h，于鼠尾靜脈注入稀釋的印度墨汁0．1 mL/10 g。于注入墨汁后30 s和6 min用特制取血吸管從小鼠眼眶后靜脈叢取血 0．025 mL，立刻吹入 0．1%Na2CO3液2 mL中，吸管于該液中吸入、吹出數次，以充分洗出吸管壁附著之血液;取血完畢，以0．025 mL正常小鼠血溶于2mL 0．1%Na2CO3液校零，分光光度計(675 nm)測定吸光度。小鼠分別稱體重后斷頭處死，摘出胸腺及脾稱重，計算胸腺或脾指數、吞噬指數K及吞噬系數α。

式中:C為血中炭粒濃度，T為時間，W為體重，WLS為肝脾合重。

1．2．2 黨參多糖口服液對綿羊紅細胞所致小鼠溶血素抗體生成的影響 參照文獻［3］進行試驗。

1．2．2．1 綿羊紅細胞(SRBC)懸液的制備 在無菌條件下，從健康成年綿羊外頸靜脈取血，置于內盛有玻璃珠的滅菌錐形瓶中，搖動10min以除去纖維蛋白，加入相當于羊血體積2倍的Alsever溶液搖勻，置于4℃冰箱內保存備用。臨用時取上述保存的羊紅細胞，用生理鹽水洗滌3次，每次1000～2000 r/min離心5 min，棄去上清液，用生理鹽水以3∶5(V/V)稀釋，使紅細胞濃度為每毫升約20億個。

1．2．2．2 免疫及給藥 小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只，即空白組，陽性藥物對照組(人參口服液5 g生藥/kg)，黨參多糖口服液高(9 g生藥/kg)、中(7 g生藥/kg)、低(5 g生藥/kg)劑量組，各給藥組灌胃給藥，空白組給予相應體積量的生理鹽水，每日1次，0．2 mL/10 g，連續8 d。各給藥組于給藥2 d后腹腔注射 SRBC懸液，0．2 mL/鼠，對照組同法用 SRBC免疫，于免疫后6日，眼眶取血進行溶血素測定。

1．2．2．3 溶血素測定 眼眶取血于離心管內，放置約1 h后，用長針將凝固血與管壁剝離，使血清充分滲出，2000 r/min－離心10 min，取血清，生理鹽水稀釋500倍后按表1設計進行實驗，然后于37℃水浴中保溫10 min，冰浴終止反應后2000 r/min離心10 min。取上清液1 mL、都氏試劑3 mL于試管內，同時取綿羊紅細胞稀釋液0．25 mL、都氏試劑4 mL于另一支試管內，充分搖勻，放置10 min，于540 nm處以對照管作空白，分別測定各管吸收度，按公式計算每只小鼠樣品的半數溶血值HC50。

表1 溶血素測定方法

2 結果與分析

2．1 黨參多糖口服液對小鼠網狀內皮系統對血流中惰性炭粒的吞噬廓清能力的影響

2．1．1 黨參多糖口服液對小鼠免疫器官指數的影響 從表2試驗結果可以看出，黨參多糖口服液各劑量組與空白組相比，胸腺指數無顯著差異(P ＞0．05)，脾指數顯著升高(P ＜0．05);與人參口服液組相比，胸腺指數沒有顯著差異，脾指數升高程度不及人參口服液。

表2 黨參多糖口服液對小鼠免疫器官重量的影響(n=10)

2．1．2 黨參多糖口服液對小鼠內皮系統吞噬功能的影響 結果見表3。參多糖口服液給藥組與空白組相比，K值及α值均見顯著增高，黨參多糖口服液中劑量組的效果與陽性對照相當，說明黨參多糖口服液可增強小鼠網狀內皮系統吞噬功能。

表3 黨參多糖口服液對小鼠網狀內皮系統吞噬功能的影響(n=10)

2．2 黨參多糖口服液對綿羊紅細胞所致小鼠溶血素抗體生成的影響 從表4試驗結果可以看出，黨參多糖口服液各劑量組小鼠的HC50均顯著高于空白對照組(P＜0．01)，且隨劑量增加而升高。黨參多糖口服液低劑量組效果即與人參口服液組相當，說明黨參口服液能顯著增強小鼠溶血素的生成。

表4 黨參多糖口服液對小鼠溶血素水平的影響(n=10)

3 討論

黨參是我國傳統的補益類中藥，國內外對其都有研究，黨參多糖是黨參的主要有效成分之一。黨參多糖對免疫系統的影響作用，國內學者已經開展了廣泛的研究工作。楊光等［4］通過試驗發現灌服黨參多糖可以增強機體免疫應答，張曉軍等［5］也通過試驗證明黨參多糖有免疫促進作用，并能促進脾臟代償性造血功能。從本試驗的結果來看，黨參多糖口服液能顯著增強小鼠網狀內皮系統的吞噬功能，增加成年小鼠脾臟重量(P＜0．05);能顯著提高小鼠半數溶血值HC50，提高小鼠的血清溶血素抗體生成水平(P＜0．05)，與相關文獻報道基本相符。

根據研究和試驗結果，我們可以認為黨參多糖具有顯著的免疫調節的作用，其免疫調節機理可能是與增強網狀內皮系統吞噬功能，升高脾指數，以及增強溶血素的生成有關，需進一步深入研究。

［1］ 陳克克，王喆之．黨參多糖的研究進展［J］．現代生物醫學研究進展，2007，7(4):635 －637．

［2］ 許會軍，潘永全．中藥添加劑復方黨參多糖散在肉仔雞日糧中的應用效果［J］．中國飼料，1997，(4):17 －18．

［3］ 陳 奇．中藥藥理研究方法學［M］．第1版．北京:人民衛生出版社，1993:317．

［4］ 楊 光，李發勝，劉 輝，等．黨參多糖對小鼠免疫功能的影響［J］．中藥藥理與臨床，2005，21(4):39．

［5］ 張曉軍，胡 黎，賴小平，等．黨參多糖對小鼠免疫和造血功能的影響［J］．中藥新藥與臨床，2003，14(3):174 －176．