HPLC-ELSD測定舒筋通絡顆粒中黃芪甲苷含量

陳光輝，趙志強，張久勝，陳進錢，彭新華

(神威藥業有限公司，河北 石家莊 051430)

HPLC-ELSD測定舒筋通絡顆粒中黃芪甲苷含量

陳光輝，趙志強*，張久勝，陳進錢，彭新華

(神威藥業有限公司，河北 石家莊 051430)

目的：建立舒筋通絡顆粒中黃芪甲苷的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜-蒸發光散射檢測器法(HPLC-ELSD)，色譜柱為DIONEX C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為乙腈-水(38∶62)，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為30 ℃，載氣流速為2.5 L·min-1，漂移管溫度為105 ℃。結果：黃芪甲苷的線性范圍為0.968 8～9.688 μg，平均回收率為98.9%，RSD=1.2%。結論：該方法重現性好、靈敏、準確，可作為舒絡通絡顆粒的質量控制方法。

HPLC-ELSD；舒筋通絡顆粒；黃芪甲苷；含量測定

舒筋通絡顆粒是由牛膝、骨碎補、川芎、天麻、黃芪、葛根、威靈仙等9味中藥組成，具有補肝益腎、活血舒筋功效[1]，是神威藥業集團研制的國家二類中藥保護品種。現代藥理學研究表明，舒筋通絡顆粒組方中的黃芪，主要含皂苷類、黃酮類、多糖類及氨基酸類成分等，黃芪總皂苷(AST)具有免疫調節、護肝作用[2]，其中黃芪甲苷(AST-Ⅳ)為活性指標成分。現行的舒筋通絡顆粒標準[3]要求測定骨碎補的含量，未對其他成分進行定量測定。為了更好地控制本品質量，保證臨床療效，筆者研究建立并驗證了HPLC-ELSD檢測黃芪甲苷含量的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DIONEX Ultimate 3000高效液相色譜系統(Ultimate 3000四元泵，Ultimate 3000自動進樣器，變色龍色譜工作站)，Alltech 2000 ES蒸發光散射檢測器。

1.2 試藥

黃芪甲苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110781-200613)；舒筋通絡顆粒(神威藥業集團有限公司，規格：12g/袋，批號：12010501，12042501，12061501，12092101，12092201，12092301，12092401，12092501，12092801，12100701，12100601)。

乙腈(Fisher Scientific，色譜純)；正丁醇、甲醇、氫氧化鈉(天津化學試劑一廠，分析純)；D101型大孔吸附樹脂(天津市光復精細化工研究所)；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DIONEX C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水(38∶62)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；ELSD的漂移管溫度：105 ℃，載氣流速：2.5 L·min-1。

在上述色譜條件下，黃芪甲苷的典型保留時間為1.07 min，理論板數以黃芪甲苷計為8 765。

2.2 溶液制備和進樣

2.2.1 對照品溶液 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，用甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取本品內容物研細，取約10 g，精密稱定，加氫氧化鈉1 g，精密加入甲醇100 mL，稱定重量，加熱回流提取1 h，放涼，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，濾過，精密量取續濾液50 mL，蒸干，加熱水10 mL分次使溶解，置分液漏斗中，放冷，用水飽和過的正丁醇萃取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加水5 mL加熱使溶解，放涼，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑1.5 cm，長12 cm)，以水80 mL洗脫，棄去水液，再用40%的乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%的乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉移至5 mL量瓶內，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液 取處方中缺黃芪的其他藥味，按制法制成陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.2.4 進樣 分別精密量取對照品溶液4，6，8 μL和供試品溶液8 μL進樣。

2.3 方法專屬性考察

分別精密吸取陰性對照溶液、對照品溶液以及舒筋通絡顆粒供試品溶液各8 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。結果顯示在該色譜條件下，其他成分不干擾黃芪甲苷的測定，可與其他成分達到基線分離。

A.陰性對照品 B.黃芪甲苷對照品 C.供試品圖1 舒筋通絡顆粒及對照品HPLC圖

2.4 線性關系考察

精密稱取黃芪甲苷對照品48.44 mg，置50 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。依次精密吸取對照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10 μL，注入高效液相色譜儀測定峰面積。以進樣量的常用對數為橫坐標(X)，峰面積的常用對數為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，得黃芪甲苷線性回歸方程分別為Y=1.663 4X+0.882(r=0.999 5，n=6)。結果表明，黃芪甲苷的進樣量在0.968 8～9.688 μg的對數值與各自峰面積的對數值呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取0.968 8 mg·mL-1的黃芪甲苷對照品溶液6 μL，重復進樣6次，測定其峰面積分別為141.80，143.20，143.07，141.99，143.39，142.25，結果得RSD=0.48%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

取同一批樣品(批號：12010501)，平行制備6份供試品溶液并測定含量。結果6份樣品中黃芪甲苷含量的RSD=1.7%(n=6)，表明方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗

新制備一供試品溶液(批號:12010501)，室溫放置，經第0，2，4，6，8，10，16，24 h測定，結果峰面積的RSD=1.1%(n=8)，表明供試品溶液在室溫放置24 h內穩定。

2.8 回收率試驗

稱取舒筋通絡顆粒細粉約5 g(批號：12010501，含量：0.671 mg·g-1)，精密稱定，平行做9份，分成3組，每組分別精密加入黃芪甲苷對照品溶液(0.968 8 mg·mL-1)3.0，3.5，4.0 mL，然后按上述方法制備供試品溶液，并測定其含量，計算回收率，結果見表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收率試驗

2.9 樣品含量的測定

取舒筋通絡顆粒10批，依法測定，計算樣品中黃芪甲苷含量，測定結果見表2。

表2 舒筋通絡顆粒中黃芪甲苷含量測定結果

3 討論

由于舒筋通絡顆粒為復方制劑，成分復雜，曾按《中國藥典》2010年版一部黃芪含量測定項下供試品溶液處理方法[4]，分別用甲醇超聲提取與加熱回流提取后，再用水飽和的正丁醇振搖提取，試對比超聲處理及加熱回流提取方法提取黃芪甲苷，結果加熱回流提取含量較高，故選擇加熱回流提取。分別用甲醇、1%和2%氫氧化鈉甲醇溶液加熱回流提取[5]后，再用水飽和的正丁醇振搖提取，結果氫氧化鈉甲醇溶液加熱回流提取含量相同，高于甲醇回流提取含量，故選擇1%氫氧化鈉甲醇溶液加熱回流提取。

根據10批樣品含量測定結果，結合《中國藥典》2010年版一部黃芪中黃芪甲苷的含量限度及其制劑有效成分的轉移率，考慮大生產的實際情況，筆者認為，本品每袋(12 g/袋，相當于黃芪生藥0.423×12 g)含黃芪以黃芪甲苷計不得少于2.5 mg為宜。

采用HPLC測定舒筋通絡顆粒中黃芪甲苷的含量，處理方法簡單，所測結果重現性好、精密度好，適用于多種中藥配伍使用的黃芪甲苷的定量分析。

[1] 雒曉東，梁德，劉金文，等.舒筋通絡顆粒治療神經根型和椎動脈型頸椎病2期臨床研究[J].中國中醫骨傷科雜志，2006，14(4)：48-50.

[2] 黃可兒，趙敏，王建華.黃芪總苷的藥理研究進展[J].中藥新藥與臨床藥理，2005，16(6)：461-463.

[3] 國家食品藥品監督管理局.舒筋通絡顆粒標準[S].YBZ23662005-2009Z.

[4] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：283-284.

[5] 夏廣萍，劉鵬.不同處理方法和不同產地黃芪藥材中黃芪甲苷的含量測定[J].中藥材，2008，31(3)：385-387.

AstragalosideⅣinShujintongluoGranulesDeterminationbyHPLC-ELSD

CHEN Guang-hui，ZHAO Zhi-qiang*，ZHANG Jiu-sheng，CHEN Jin-qian，PENG xin-hua

(ShinewayPharmaceuticalCo.，Ltd.，Shijiazhuang051430，China)

Objective：To establish a method for determining astragaloside Ⅳ in Shujintongluo Granules.Methods：The sample was separated on DIONEX C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)with acetonitrile-water(38∶62)as mobile phase，flow rate 1.0 mL·min-1，column temperature 30 ℃，the gas flow rate 2.5 L·min-1and drift tube temperature 105 ℃.Results：The linear range of astragaloside Ⅳwas 0.968 8～9.688 μg(r=0.999 5).The average recovery was 98.9%(RSD=1.2%).Conclusion：The method is sensitive，accurate，and has good repeatability.It can be used for Shujintongluo granules quality control.

HPLC-ELSD；Shujintongluo granules；Astragaloside Ⅳ；Determination

2013-04-27)

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趙志強，工程師，研究方向：藥品質量控制；E-mail：13613304779@163.com