正交試驗法優選血管康袋泡茶的最佳服用方法*

陳耀章，張小華，李憲奎

(甘肅省中醫院藥劑科，甘肅蘭州730050)

血管康袋泡茶是以槐米為主要成分制備的中藥茶劑，具有降低血管脆性、恢復血管彈性、維持血管抵抗力、擴張冠狀動脈、增加冠脈流量、降血壓、降血脂、清除自由基的作用［1］，用于預防和治療動脈粥樣硬化、腦溢血、心腦血管疾病及高血壓等病。現為我院制劑并廣泛用于臨床，長期服用效果良好，無不良反應。本實驗以血管康袋泡茶不同用法的蘆丁體外溶出度為考察指標，測定其不同服用方法時的體外溶出情況，為選擇最佳的服用方法提供實驗依據。

1 藥品、試劑與儀器

血管康袋泡茶，為甘肅省中醫院院內制劑，批準文號為甘藥制字Z04000831，由甘肅省中醫院提供。蘆丁對照品，中國藥品生物制品檢定所提供，批號100080－200707；水為超純水；其余試劑均為分析純。LAMBDA35型紫外 －可見分光光譜儀，美國PerKin Elmer公司產品；METTLER AE240電子分析天平，賽多利斯公司產品；HS6150型超聲波清洗器，上海楚定分析儀器有限公司產品。

2 實驗方法與結果

2.1 方法學考察

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱定蘆丁對照品0.121 4g，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解后定容至刻度。精密量取10.0 mL標準溶液，移至100 mL容量瓶中，加蒸餾水定容到刻度，作為蘆丁對照品儲備液備用。

2.1.2 供試品溶液的制備

取袋泡茶10 g，加水煎煮后，濃縮至50 mL，精密量取供試液5.0 mL，轉移到50 mL容量瓶中，用蒸餾水定容到刻度，搖勻；精密量取 2.5 mL，置25 mL容量瓶中，加水至6 mL；加50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min；加100 g/L的硝酸鋁溶液 1 mL，搖勻，放置 6 min；加氫氧化鈉試液10 mL，加水至刻度，放置 15 min，備用［2］。

2.1.3 檢測波長的確定

參照文獻方法［3］，于200～800 nm波長范圍掃描吸收光譜，確定在500 nm波長處有最大吸收；同時參照2010版《中國藥典》一部，確定在500 nm測定吸收度。

2.1.4 標準曲線的繪制

精密量取 2.1.1 項下蘆丁儲備液 1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 mL，分別置于 25 mL 容量瓶中；各加水至6 mL；加50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置 6 min；100 g/L的硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min；加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min。按2010版《中國藥典》一部附錄VA紫外－可見分光光度法，在500 nm波長處測定吸光度(A)。以質量濃度為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=0.009 44+0.376 01X，(r=0.998 0)。見表1。

表1 不同對照品溶液所測吸收度

2.2 樣品體外溶出度的測定

2.2.1 不同用法樣品制備的正交試驗

根據血管康袋泡茶的服用方法，取10g袋泡茶進行實驗，根據表2的 L9(34)正交試驗條件煎煮后，將各供試液濃縮至50 mL，精密量取5.0 mL，按照2.1.2項下供試品溶液的制備和測定方法進行比色測定。對加水倍數(A)、煎煮次數(B)及煎煮時間(C)3個因素進行考察［4］，以主要成分蘆丁的體外溶出度作為評價指標，優選最佳服用方法。因素水平見表2。

表2 不同用法樣品制備的正交試驗表

2.2.2 正交試驗結果與分析

對結果進行分析，水提取正交試驗結果見表3，方差分析結果見表4。

表3 水提取工藝正交試驗結果

表4 正交試驗方差分析表

直觀分析表明：對蘆丁體外溶出影響因素程度為B＞A＞C，即影響程度最大的是煎煮次數，其次是加水倍數，再次是提取時間。由方差分析可得：以蘆丁體外溶出度為指標，提取次數對其有顯著影響，加水倍數和提取時間對觀察指標的影響較小。綜合分析，從實際出發，為了服用方便，同時節省人力物力，確定服用方法條件為：A1B3C1，即加8倍量水，煎煮3次，每次5 min。

2.3 驗證試驗

為驗證實驗的可靠性，在上述優選的條件下，對3 個批次(20120312，20120315，20120322，n=3)的樣品進行了試驗，蘆丁的平均含量分別為0.564，0.524，0.598 mg/g。驗證試驗表明該優選工藝穩定可行。

3 討論

蘆丁是一種具有廣泛生理活性的天然植物藥有效成分，可用于預防與治療心血管疾病。由于療效確切，蘆丁在國內外市場上的需求呈逐年上升的趨勢［5］。目前，蘆丁主要從槐米、苦蕎等含量豐富的植物中提取獲得。血管康袋泡茶是以槐米為主要原料精制而成的院內制劑。故本文將其主要成分蘆丁的體外溶出作為指標考察，實驗采用正交法對其最佳服用方法進行篩選。

本文采用正交試驗法優選出的血管康袋泡茶的服用方法，驗證試驗結果顯示，該方法合理、穩定可行。此為其優選最佳服用方法提供了理論依據。

［1］羅燕梅，李喜香.血管康袋泡茶抗氧化機理探討［J］.時珍國醫國藥，2006，17(1)：36.

［2］羅燕梅，焦正花.RP－HPLC法測定血管康袋泡茶中蘆丁的含量［J］.中國中醫藥信息雜志，2007，14(7)：52－53.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010，333.

［4］屈蓉.精制銀翹解毒片中對乙酰氨基酚的溶出度測定［J］.中國藥房，2012，23(7)：613 －615.

［5］顏軍，甘亞，茍小軍，等.星點設計－效應面法優化槐米中蘆丁提取工藝［J］.中藥材，2011，34(4)：628 －631.