“切脾”，“保脾”對門脈高壓癥大鼠胃底黏膜上皮細胞凋亡的影響

侯 杰 羅 蘭 劉偉新 曲義坤 (佳木斯大學附屬第一醫院普外二科，黑龍江 佳木斯 154002)

細胞凋亡是由體內外因素觸發細胞內預存的死亡程序而導致的基因控制的細胞自殺過程〔1〕。Bcl-2基因編碼26 kD的Bcl-2蛋白，Bax基因編碼21 kD的Bax蛋白，當受到細胞內外的各種刺激后，二者之間的動態平衡決定著細胞的存活，Bcl-2蛋白表達增高，Bcl-2/Bax比例增加，抑制細胞凋亡;Bax蛋白表達增高，Bcl-2/Bax比例下降，則促進細胞凋亡〔2〕。手術、應激、非甾體抗炎藥(NSAIDs)、乙醇、幽門螺桿菌(HP)感染等侵襲因素均可使胃黏膜細胞凋亡增加，導致黏膜損傷〔3〕。因此，采用何種術式更能減輕對胃腸道黏膜的損傷顯得尤為重要。本文擬從分子生物學水平觀察脾臟切除和保留正常脾臟1/3的脾次全切除術對胃底黏膜上皮細胞凋亡的影響及Bax、Bcl-2表達的變化，選擇一種對胃底黏膜上皮細胞損傷相對較小的術式，以期盡量減輕或減少PHG壓性胃病的發生，降低嘔血的發生率。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇健康雄性Wistar大鼠110只，約5～6月齡，體重200～300 g，采用四氯化碳(CCl4)試劑誘導制造肝硬化門脈高壓癥(PHT)大鼠模型，將肝硬化PHT大鼠重新分籠、編號。

1.2 方法 隨機分組:①正常對照組;②假手術組;③保留約正常脾臟1/3大小的脾次全切除術組;④全脾切除術組。采用末端轉移酶(TdT)介導的X-dUTP缺口末端標記法(TUNEL)檢測細胞凋亡，電鏡下觀察凋亡細胞形態，免疫組化法檢測Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表達。

1.3 統計學方法 應用SPSS13.0軟件分析，數據資料以±s表示，組間比較用獨立樣本的t檢驗，組內比較用方差分析。

2 結果

本實驗采用CCl4造成大鼠肝硬化PHT模型，動態觀測大鼠“切脾”、“保脾”術后(1 w，2 w，3 w)肝臟細胞凋亡指數，Bcl-2、Bax等指標的變化。經觀察發現，假手術組術后4 w內死亡3只，存活27只;全脾切除術組死亡15只，存活15只;脾次全切除術組死亡8只，存活22只。見表1～表3。

表1 各組胃底黏膜細胞凋亡細胞率的比較(±s)

表1 各組胃底黏膜細胞凋亡細胞率的比較(±s)

與正常對照組比較:1)P＜0.05;與假手術組及脾次全切除術組比較:2)P＜0.01;下表同

組別 n 20 3.713±0.545 3.713±0.545 3.713±0.545假手術組 27 4.671±0.4491) 4.903±0.8041) 5.232±0.7331)脾次全切除術組22 4.989±0.7331) 5.674±1.0841) 6.074±0.7701)全脾切除組 15 5.648±0.9221)2)7.037±1.1771)2)7.767±1.0081)2)1 w 2 w 3 w正常對照組

表2 免疫組化法檢測Bax蛋白的表達(±s)

表2 免疫組化法檢測Bax蛋白的表達(±s)

組別 n 20 1.259±0.174 1.259±0.174 1.259±0.174假手術組 27 6.424±0.8772) 6.866±0.8222) 7.342±0.7391)脾次全切除術組22 6.692±0.7322) 7.156±0.8012) 7.502±0.7252)全脾切除術組 15 7.584±1.4612) 8.011±1.3251) 8.700±1.1052)1 w 2 w 3 w正常對照組

表3 免疫組化法檢測Bcl-2蛋白的表達(±s)

表3 免疫組化法檢測Bcl-2蛋白的表達(±s)

組別 n 20 2.980±3.580 2.980±3.580 2.980±3.580假手術組 27 7.918±0.5322)7.312±0.4942)6.995±0.5422)脾次全切除術組 22 7.839±0.4402)7.200±0.4872)6.865±0.5352)全脾切除術組 15 6.281±0.6292)5.845±0.5762)5.845±0.5762)1 w 2 w 3 w正常對照組

3 討論

本研究證實了不同術式可以影響細胞凋亡的調節基因，從而進一步引發細胞凋亡的發生。實驗結果表明，“切脾”術后，胃底黏膜細胞凋亡指數、Bcl-2、Bax表達與“保脾”術后比較有顯著性差異(P＜0.05)。保留約正常脾臟1/3大小的脾次全切除術更能減低胃底黏膜細胞的凋亡，減輕對胃底黏膜細胞的損害。減輕或減少PHG的發生，降低嘔血的發生率，具有重大意義，可以推廣到臨床。本實驗以肝硬化PHT大鼠為研究對象，以脾次全切除、脾切除為處理因素，與臨床研究相比有明顯優點:①避免了臨床研究中出現的肝硬化程度不一。②排除人體其他基礎疾病對實驗的干擾。③避免了人為的一些客觀因素，如治療措施、情緒、不同環境的干擾。④手術操作相對簡單，出血量少。既往的研究發現，脾次全切除術既能降低肝硬化后的門靜脈高壓，改善脾亢癥狀，又能保留脾臟的免疫功能，且保留的殘脾沒有加重肝纖維化。因此，臨床開展脾次全切除術治療肝硬化巨脾對病人是有益無害的。

1 Kerr JF，Wyllie AH，Currie AR.Apoptosis:a basic biological phenomenon with wide-ranging implication in tissue kinetics〔J〕.Br J Cancer，1972;26(4):239-57.

2 Yang E，Zha J，Jockel J，et al.Bad，a heterrodimeric partner for Bcl-xl and Bcl-2，displaces Bax and promotes cell death〔J〕.Cell，1995;80(2):285-9.

3 Maity P，Biswas K，Roy S，et al.Smoking and the pathogenesis of gastroduodenal ulcer-recent mechanistic update〔J〕.Mol Cell Biochem，2003;253(1-2):329-38.