Th17細胞相關因子與尋常型銀屑病的相關性研究＊

葉 萍，黃偉林，鄭 力

（深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院：1.皮膚科；2.藥劑科，廣東深圳518001）

根據(jù)產生細胞因子和生物功能的不同，傳統(tǒng)上將CD4＋T細胞分為Th1和Th2細胞亞群。Th1細胞介導細胞免疫，Th2細胞介導體液免疫。最近的研究發(fā)現(xiàn)一類不同于Th1和Th2的新型的CD4＋T細胞亞群，此亞群細胞產生白細胞介素（IL）－17、IL－6和腫瘤壞死因子－α（tumor necrosis factor－alpha，TNF－α），被稱為 Th17細胞［1－2］。近年來，Th17細胞及其相關的細胞因子的作用越來越受到人們的關注。本研究中，采用雙抗體夾心親和素－生物素過氧化物酶復合物酶聯(lián)免疫吸附試驗（ABC－ELISA）對不同病情嚴重程度的銀屑病患者血清中Th17細 胞 相 關 因 子IL－17、IL－23、IL－6 和 轉 化 生 長 因 子－β（transforming growth factor beta，TGF－β）的水平進行檢測，以探討Th17細胞相關因子在銀屑病發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年10月至2010年3月在本院及協(xié)作醫(yī)院皮膚科門診就診的尋常性銀屑病患者30例（銀屑病組），其中男20例，女10例，年齡16～65歲，病程2周至20年，按病情分為兩組：靜止期組11例，進行期組19例。入選標準：（1）臨床確診為尋常性銀屑病；（2）2個月內未使用維A酸類藥物、糖皮質激素及免疫抑制劑等系統(tǒng)治療，2周內無外用藥物治療；（3）入選病例簽署知情同意書。排除標準：（1）合并嚴重心、肝、腎疾患；（2）合并嚴重感染、惡性腫瘤和其他自身免疫性疾病；（3）關節(jié)型、膿皰型和紅皮病型銀屑病。所有銀屑病

表1 各組受檢者4種Th17細胞相關因子水平比較（±s，ng／L）

表1 各組受檢者4種Th17細胞相關因子水平比較（±s，ng／L）

＊：P＜0.05，＊＊：P＜0.01，與對照組比較。

組別 n IL－17 IL－23 IL－6 TGF－β進行期組 19 13.62±2.43 3 246.39±480.34＊ 7.40±1.25＊＊ 2 682.25±415.41＊靜止期組 11 13.82±2.49 3 111.61±737.20＊ 7.55±1.22＊＊ 2 463.34±653.95對照組 10 14.19±2.11 2 572.32±351.12 5.61±1.02 2 071.17±358.20

患者均行銀屑病皮損面積和嚴重程度指數(shù)（PASI）評分。對照組10例，男4例，女6例；年齡23～35歲，均為來本院體檢的健康成年人。3組受檢者年齡、性別差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 主 要 試 劑 IL－17、IL－23、IL－6 和 TGF－β 的 ABCELISA檢測試劑盒均為美國R＆D Systems生物試劑公司產品。

1.2.2 Th17細胞相關因子的檢測 采集所有受檢者靜脈血4mL，室溫血液自然凝固10～20min后，離心20min（3 000r／min），收集上清液（如有沉淀形成，應再次離心），血清樣本于－70℃凍存。應用ELISA方法檢測外周血血清IL－17、IL－23、IL－6和TGF－β的水平，實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。每個樣本和標準品均設2個復孔，同時設置空白對照和陰性對照，以保證檢測結果的可靠性。采用酶標儀測定450nm處吸光值，根據(jù)標準曲線讀取樣品濃度。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料以±s表示。兩組間均數(shù)比較采用t檢驗；相關性分析采用Sperman相關性檢驗，均為雙側檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各組間4種Th17細胞相關因子水平比較 銀屑病患者進行期、靜止期組血清IL－23和IL－6水平均明顯高于對照組（P＜0.05）；進行期組 TGF－β水平高于對照組（P＜0.05），靜止期組TGF－β水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；銀屑病患者血清IL－17水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。銀屑病患者組間，血清IL－17、IL－23、IL－6和TGF－β水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

2.2 銀屑病患者4種細胞因子水平與PASI的相關性 銀屑病患者血清IL－23水平為（3 196.97±578.77）ng／L，與PASI評分呈正相關（r＝0.424，P＜0.05）；而血清IL－17水平為（13.69±2.41）ng／L、IL－6水平為（7.46±1.22）ng／L、TGF－β水平為（2601.98±515.83）ng／L，與 PASI均無相關性（r＝－0.118、r＝－0.043、r＝－0.203，P＞0.05）。

3 討 論

銀屑病是一種多基因遺傳背景下的自身免疫性皮膚病，淋巴細胞和單核細胞浸潤，特別是T淋巴細胞真皮浸潤為其重要的病理特征，這表明免疫系統(tǒng)在該病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，但具體發(fā)病機制至今尚不明確。近年來，關于銀屑病中Th17細胞及其相關細胞因子的高表達成為了人們的研究熱點，提示Th17細胞在銀屑病免疫發(fā)病機制中可能起關鍵性作用。

Th17細胞產生的最重要的效應因子是IL－17，其受體在體內廣泛表達［3－4］。IL－17的主要生物學功能是促進炎癥反應，與銀屑病的發(fā)生密切相關［5－6］。有研究對銀屑病皮損和外周血中Th17細胞及IL－17進行了檢測，結果發(fā)現(xiàn)：Th17細胞主要出現(xiàn)在銀屑病皮損的真皮層，IL－17mRNA水平高表達，且隨著疾病嚴重程度的增加而升高；經(jīng)環(huán)孢素治療后，IL－17的表達恢復正常［7－8］。從而證實了Th17細胞是銀屑病皮膚炎癥過程中重要的調節(jié)因子，也是值得關注的一個銀屑病治療的靶因子。但在本研究中并未發(fā)現(xiàn)銀屑病患者（無論進行期組和靜止期組）血清IL－17水平的升高，且IL－17水平與PASI之間也無明顯相關性，這與目前的文獻報道結果不一致，是否與本組資料例數(shù)較少、銀屑病組PASI評分較低有關，有待進一步的大樣本研究證實。

TGF－β和IL－6參與了Th17細胞的早期分化，IL－23則在分化后期維持 Th17穩(wěn)定分化成熟［5，9］。IL－23、TGF－β和IL－6在完整有效的Th17細胞保護性免疫應答過程中都是必不可少的。有研究顯示，銀屑病中，角質形成細胞和樹突狀細胞過度表達IL－23，IL－23刺激Th17細胞在真皮中產生IL－17和IL－22，而針對這些細胞因子的治療則有利于銀屑病癥狀的改善［10］。陳旭娥等［11］的研究發(fā)現(xiàn)，IL－23 和IL－17在銀屑病皮損組織中高表達，認為IL－23可能通過誘導幼稚CD4＋T細胞分化為Th17細胞，使其分泌IL－17、IL－6等細胞因子，從而介入銀屑病的發(fā)病機制和炎癥反應過程。本研究中，無論進行期組還是靜止期組，IL－23、IL－6和 TGF－β水平均明顯高于對照組（P＜0.05），在進行期組和靜止期組組間比較，IL－23、IL－6和TGF－β水平差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），說明這些Th17細胞相關因子可能參與了銀屑病的免疫發(fā)病機制，但與銀屑病的病情分期似乎無明顯相關。另外，本組資料相關性分析發(fā)現(xiàn)IL－23水平與PASI之間具有相關性，而IL－17、IL－6、TGF－β水平與PASI評分均無相關性。

綜合IL－23、IL－6及TGF－β的變化，說明銀屑病患者的免疫細胞功能存在整體異常，由此導致了免疫分子表達水平的整體失衡，反映了銀屑病整個復雜免疫反應異常的一個環(huán)節(jié)，尤其是IL－23水平的失調有可能在銀屑病復雜的致病機制中發(fā)揮了重要的作用［12－13］，這在本研究中似乎也證實了這一點，最近，有學者在基因水平上的研究也證實了IL－23R與銀屑病的相關性［14－15］，可見，IL－23／IL－23R 通路很可能是銀屑病一個重要的干預治療靶向。目前Th17相關因子與銀屑病關系的研究尚在起步階段，很多機制尚不十分清楚，仍需要今后更多的研究和發(fā)現(xiàn)。

［1］ Park H，Li Z，Yang XO，et al.A distinct lineage of CD4T cells regulates tissue inflammation by producing interleukin 17［J］.Nat Immunol，2005，6（11）：1133－1141.

［2］ Annunziato F，Cosmi L，Santarlasci V，et al.Phenotypic and functional features of human Th17cells［J］.J Exp Med，2007，204（8）：1849－1861.

［3］ Li J，Chen X，Liu Z，et al.Expression of Th17cytokines in skin lesions of patients with psoriasis［J］.J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci，2007，27（3）：330－332.

［4］ Blauvelt A.T－h(huán)elper 17cells in psoriatic plaques and additional genetic links between IL－23and psoriasis［J］.J Invest Dermatol，2008，128（5）：1064－1067.

［5］ 常樹霞，陳永鋒.Th17細胞與銀屑病［J］.皮膚性病診療學雜志，2010，17（1）：71－74.

［6］殷筱舒，馮永山.Th17細胞與銀屑病關系的研究進展［J］.黑龍江醫(yī)藥，2009，22（4）：461－463.

［7］ Lowes MA，Kikuchi T，F(xiàn)uentes－Duculan J，et al.Psoriasis vulgaris lesions contain discrete populations of Th1and Th17Tcells［J］.J Invest Dermatol，2008，128（5）：1207－1211.

［8］ Kagami S，Rizzo HL，Lee JJ，et al.Circulating Th17，Th22，and Th1cells are increased in psoriasis［J］.J Invest Dermatol，2010，130（5）：1373－1383.

［9］ Li MO，Wan YY，F(xiàn)lavell RA.T cell－produced transforming growth factor－beta1controls T cell tolerance and regulates Th1－and Th17－cell differentiation［J］.Immunity，2007，26（5）：579－591.

［10］Fitch E，Harper E，Skorcheva I，et al.Pathophysiology of psoriasis：recent advances on IL－23and Th17cytokines［J］.Curr Rheumatol Rep，2007，9（6）：461－467.

［11］陳旭娥，劉志香，吳艷，等.尋常型銀屑病皮損中Th17細胞相關因子的表達［J］.中國麻風皮膚病雜志，2008，24（3）：176－178.

［12］Capon F，Di Meglio P，Szaub J，et al.Sequence variants in the genes for the interleukin－23receptor（IL23R）and its ligand （IL12B）confer protection against psoriasis［J］.Hum Genet，2007，122（2）：201－206.

［13］Tonel G，Conrad C，Laggner U，et al.Cutting edge：A critical functional role for IL－23in psoriasis［J］.J Immunol，2010，185（10）：5688－5691.

［14］Johnson－Huang LM，Lowes MA，Krueger JG.Putting together the psoriasis puzzle：an update on developing targeted therapies［J］.Dis Model Mech，2012，5（4）：423－433.

［15］Capon F，Burden AD，Trembath RC，et al.Psoriasis and other complex trait dermatoses：from Loci to functional pathways［J］.J Invest Dermatol，2012，132（3Pt 2）：915－922.