血管抑素與32P-膠體治療肝癌的療效評(píng)價(jià)

郝大林

肝癌是指發(fā)生于肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的癌變，是我國(guó)常見惡性腫瘤之一。基因治療是近年來(lái)醫(yī)療技術(shù)發(fā)展中的重要成果，對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的抑制具有良好的效果。本研究以血管抑素基因聯(lián)合放射性藥物32P-膠體治療大鼠肝癌的研究，對(duì)治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試劑與器材 TUNEL熒光試劑盒（北京中昊時(shí)代生物有限公司），總RNA提取試劑盒（上海拜力生物科技有限公司），顯微鏡為奧林巴斯FV500激光顯微鏡，CT機(jī)為GE公司生產(chǎn)的螺旋CT機(jī)，32P-膠體購(gòu)自原子高科股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血管抑素基因的構(gòu)建 以試劑盒提取總RNA，血管抑素基因下游引物為5’-TTATGAGCACCGCTTCAGGTTGC AGTAT-3’，上有引物為5’-CGAAGCTTGGATCCATGGAC CATAAGGAAGTAA-3’。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法擴(kuò)增RT-PCR，將擴(kuò)增之后增加的物質(zhì)接入pMD18T克隆載體，進(jìn)行血管抑素基因的重組構(gòu)建，進(jìn)行鑒定測(cè)序后再次擴(kuò)增并進(jìn)行質(zhì)粒提取。

1.2.2 模型制備與分組 選取購(gòu)自省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的健康Wistar雄性大鼠（吉檢證字2002A044），大鼠體重在140～150g。以中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供的Walker-256腫瘤細(xì)胞0.05mL在大鼠肝葉位置接種，進(jìn)行肝癌的動(dòng)物模型建立。7d后進(jìn)行腫瘤大小檢查。將大鼠隨機(jī)分為3組，分別為基因治療組、聯(lián)合治療組、對(duì)照組，3組大鼠均為30只。將大鼠行開腹暴露肝臟部分與腫瘤組織，分3個(gè)點(diǎn)進(jìn)行腫瘤注射，主要藥物量為20mL，基因治療組注射20μg血管抑素基因質(zhì)粒，聯(lián)合治療組注射20μg血管抑素基因質(zhì)粒與32P-膠體，對(duì)照組注入0.2mL生理鹽水。

1.3 評(píng)價(jià)方法[1]分別在治療前、治療后7、14、21d行CT檢查，測(cè)量腫瘤體積，計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)率。治療21d后處死大鼠，取腫瘤組織并固定、切片，進(jìn)行顯微鏡檢查，以免疫組化的方法進(jìn)行腫瘤微血管密度（MVD）測(cè)量，以TUNEL方法進(jìn)行細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，計(jì)量資料以(±s)表示，組間進(jìn)行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠治療后的腫瘤生長(zhǎng)率檢測(cè)結(jié)果比較 基因治療組與聯(lián)合治療組治療后7、14、21d腫瘤生長(zhǎng)率均顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），聯(lián)合治療組治療后7、14、21d腫瘤生長(zhǎng)率均顯著低于基因治療組（P＜0.01）。見表1。

表1 3組大鼠治療后的腫瘤生長(zhǎng)率檢測(cè)結(jié)果比較（±s，%）

表1 3組大鼠治療后的腫瘤生長(zhǎng)率檢測(cè)結(jié)果比較（±s，%）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.01；與基因治療組比較，bP＜0.01

組別 例數(shù) 7d 14d 21d基因治療組 30 5.87±1.88a 15.79±2.43a 23.93±4.98a聯(lián)合治療組 30 2.71±1.39ab 4.77±1.85ab 6.82±2.55ab對(duì)照組 30 8.53±1.42 24.89±5.21 45.32±8.83

2.2 3組大鼠治療后MVD與AI檢測(cè)結(jié)果比較 治療21d后，基因治療組與聯(lián)合治療組MVD與對(duì)照組相比均顯著降低（P＜0.01），AI與對(duì)照組相比均顯著升高（P＜0.01）。基因治療組MVD與聯(lián)合治療組相比均明顯增加（P＜0.05），基因治療組AI與聯(lián)合治療組相比明顯降低（P＜0.05）。見表2。

表2 3組大鼠治療后MVD與AI檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

表2 3組大鼠治療后MVD與AI檢測(cè)結(jié)果比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.01；與治療組相比bP＜0.05

組別 例數(shù) MVD(n) AI(%)基因治療組 30 46.02±7.71ab 15.64±3.53ab聯(lián)合治療組 30 30.02±3.38a 24.95±4.04a對(duì)照組 30 61.78±10.67b 5.51±1.49b

3 討論

血管抑素和重組的血管抑素蛋白直接注射于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)，能明顯抑制腫瘤原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶的血管生成。基因工程的迅速發(fā)展為血管抑素的基因治療提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。血管抑素和內(nèi)皮抑素血管抑素是人纖溶酶原的片斷。血管抑素在體外表現(xiàn)出抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管形成，而在體內(nèi)則表現(xiàn)為抑制血管形成和轉(zhuǎn)移[2]。考慮到血管抑素需要大劑量多次注射以及長(zhǎng)期治療，這使其失去臨床試驗(yàn)的吸引力。血管抑素更具潛力的是它和體外放療的聯(lián)合應(yīng)用。本研究實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，在不增加毒性作用下聯(lián)合離子放射和血管抑素，能提高腫瘤的清除。這暗示血管抑素與其他治療聯(lián)合應(yīng)用時(shí)更加有效，而不應(yīng)只是作為基礎(chǔ)治療。由于抗腫瘤血管生成基因治療不受腫瘤細(xì)胞周期的影響，故而是化療、放療和其他基因治療方案的良好補(bǔ)充。血管抑素的抗血管治療與傳統(tǒng)的抗腫瘤細(xì)胞治療的聯(lián)合應(yīng)用，能更有效地治療腫瘤。本次研究中腫瘤體積、MVD、AI的變化證明血管抑素能夠抑制腫瘤生長(zhǎng)，而聯(lián)合放射性藥物32P-膠體相比血管抑素單一作用更為明顯，可以通過(guò)抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)與發(fā)展遷移而抑制腫瘤生長(zhǎng)，能夠有效控制肝癌病情、改善治療效果。

[1]劉志廣.AD-AS-ES(血管抑素/內(nèi)皮抑素雙基因腺病毒表達(dá)載體)體外對(duì)肺癌A549細(xì)胞作用的初步研究[D].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)，2010.

[2]馬鐸，于峰，高慧棋，等.血管抑素基因聯(lián)合32P-膠體治療大鼠肝癌的療效[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2011，31(21):4202-4204.