VG染色在慢性肝病組織中的應(yīng)用

姜晶 王彩芹

慢性肝病包括慢性肝炎和肝硬化，最基本的病理特征之一為肝內(nèi)纖維結(jié)締組織彌漫性增生，纖維間隔的形成。本研究應(yīng)用VG（Van Gieson）染色方法，探討由慢性肝炎到肝硬化過程中肝內(nèi)膠原纖維的增生，分布變化，以鑒別不同類型的慢性肝炎和肝硬化，探討慢性肝病組織中膠原纖維可能起源，為肝硬化的早期診斷及其防治提供組織病理學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般材料 選自北華大學(xué)附屬醫(yī)院和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院的尸檢，活檢材料，共40例，其中慢性肝炎9例，均為肝穿刺標(biāo)本，在31例肝硬化標(biāo)本中，外科切除20例，尸體解剖11例。標(biāo)本均用10%中性福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，制片，厚5μm，待做HE及VG染色。

1.2 方法 常規(guī)HE染色 石蠟切片脫蠟水洗，蘇木精將組織切片適當(dāng)過染，水洗后經(jīng)鹽酸酒精分化，弱氨水顯藍(lán)，使細(xì)胞核呈鮮明藍(lán)色，胞質(zhì)背景無色，再經(jīng)水洗后用伊紅將胞質(zhì)等染成粉紅色至紅色，脫水、透明、封固。光鏡觀察，確定病理診斷及病理類型。做VG染色：切片按常規(guī)脫蠟水洗，用Weiger氏鐵蘇木精染核15min,自來水充分沖洗，用顯微鏡觀察細(xì)胞核著色程度，用蒸餾水洗后以VG染液染5min，直接用新的95%酒精急速分化兼脫水，約需8s,無水酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

2 結(jié)果

2.1 HE染色 根據(jù)肝組織損傷程度確定慢性肝炎和肝硬化的病變類型。9例慢性肝炎中：輕型慢性肝炎2例，中度慢性肝炎4例，重度慢性肝炎3例；31例肝硬化中，不完全分割3例，細(xì)節(jié)結(jié)型17例（圖1），粗結(jié)節(jié)型11例。

2.2 VG染色 經(jīng)VG染色顯示慢性肝病組織內(nèi)膠原纖維增生及分布狀況。VG染色后將膠原纖維染成深粉紅色，肝細(xì)胞質(zhì)染成黃色，而核呈棕黑色。

圖1 HE染色，200倍視野下，細(xì)節(jié)結(jié)型肝硬化形成的假小葉較小，其周邊的纖維間隔內(nèi)有大量炎細(xì)胞浸潤。

圖2 VG染色，200倍視野下，假小葉周邊的纖維間隔呈深粉紅色。

2.2.1 膠原纖維在慢性肝炎組織中的分布 (1)輕型慢性肝炎：肝小葉結(jié)構(gòu)無破壞，僅在匯管區(qū)及其周邊組織內(nèi)有少量膠原纖維分布；（2）中度慢性肝炎：肝小葉結(jié)構(gòu)大部分得以保存，僅在肝小葉內(nèi)形成少許條索狀纖維間隔；（3）重度慢性肝炎：增生的膠原纖維形成纖維間隔，并分割肝小葉，新生的膠原纖維條索由匯管區(qū)或肝細(xì)胞壞死灶向肝小葉內(nèi)延伸，分割肝小葉結(jié)構(gòu)。匯管區(qū)明顯增寬，膠原纖維成寬帶狀，結(jié)構(gòu)疏松深染。

2.2.2 膠原纖維在肝硬化組織中的分布 （1）不完全分割型肝硬化（早期肝硬化）：膠原纖維間隔不完整，且間隔較薄，可見不完整或盲端的纖維間隔向小葉內(nèi)伸延，假小葉結(jié)構(gòu)尚未完全形成；（2）細(xì)節(jié)結(jié)型肝硬化：形成的假小葉較小，其周邊的膠原纖維間隔較薄，較均勻（圖2）；（3）粗結(jié)節(jié)性肝硬化：形成的假小葉較大，其周邊的纖維間隔不規(guī)則，寬窄不均，間隔較寬處膠原纖維融合成束，并形成編織狀，甚至發(fā)生玻變。

3 討論

肝纖維是肝臟對各種原因所致肝損傷的代償修復(fù)反應(yīng)，表現(xiàn)為肝內(nèi)纖維結(jié)締組織增生與沉積，是多種慢性肝病共同的病理過程[1]。VG染色表明，輕型慢性肝炎僅有少量膠原纖維分布在匯管區(qū)及其周圍。中度慢性肝炎在肝實(shí)質(zhì)內(nèi)也能見到纖維條索。重型慢性肝炎膠原纖維起源于碎片狀，橋接壞死灶，并形成纖維間隔分割肝實(shí)質(zhì)。在肝硬化病變中，粗結(jié)節(jié)型其周圍纖維間隔較寬，而細(xì)節(jié)結(jié)型其間隔較窄。纖維結(jié)締組織間隔較寬表明與壞死灶內(nèi)網(wǎng)狀支架塌陷、膠原化有關(guān)，而較細(xì)間隔與肝內(nèi)炎灶細(xì)胞活化有關(guān)。在肝臟受到損害時(shí)，肝星狀細(xì)胞（HSC）被激活，表達(dá)多種細(xì)胞因子及受體，大量增殖合成細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）[2]。纖維間隔內(nèi)增生的纖維組織也與Kupffer氏細(xì)胞與激活的活化的HSC密切相關(guān)[3-4]。激活的HSC分化為肌纖維母細(xì)胞和成纖維樣細(xì)胞，并分泌產(chǎn)生膠原纖維分割肝實(shí)質(zhì)。Kim等[4]報(bào)道，慢性肝炎損傷后，活化的HSC和肝成纖維細(xì)胞是肝細(xì)胞生長因子作用靶點(diǎn)。此處多種損傷肝的因素，如慢性肝炎、酒精性肝病、藥物損害、肝外膽道阻塞以及維生素A過多等均使貯脂細(xì)胞數(shù)目增多，其周圍可見明星的膠原纖維增生。

肝纖維化是多種肝病的共同病理過程，是由不同原因引起的慢性肝損傷，激活HSC促進(jìn)以膠原為主的ECM合成和分泌增多，降解減少或代償不足，從而使ECM在肝內(nèi)異常沉積而引起肝的纖維化病變，肝纖維化系由肝結(jié)締組織彌漫性增生所致，大多數(shù)慢性肝病向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)階段，其病變特點(diǎn)為肝內(nèi)彌漫性纖維增生，但無假小葉和再生結(jié)形成。已證實(shí)肝纖維化是可逆病變[5]，因此能否阻止或逆轉(zhuǎn)肝纖維化是慢性肝病對病因治療之外的重要環(huán)節(jié)。Tomiya等[6]報(bào)道，支鏈氨基酸可以作用肝臟，通過誘導(dǎo)肝臟產(chǎn)生HGF而達(dá)到治療肝纖維化的目的。應(yīng)用VG染色顯示膠原纖維在肝組織內(nèi)分布，對探討慢性肝病肝纖維化的形成機(jī)制有重要實(shí)用價(jià)值，臨床上在治療肝損傷同時(shí)，也考慮抗纖維化治療，可能對肝纖維化的防治具有指導(dǎo)意義，值得深入探索。

[1]張孝盈，李菲.慢性乙型肝炎纖維化治療中肝纖維化指數(shù)的臨床意義[J].江蘇醫(yī)藥，2011，37（11）:1285-1287.

[2]黃強(qiáng).銀杏葉提取物對大鼠纖維化肝臟NF-κB活性的抑制作用[J].中國中醫(yī)急癥，2010，19(12):2102-2103.

[3]Bhunchet E,Eishi Y,Wake K.Contribution of immune response to the hepatic fibrosis induced by porcine serum[J].Hepatology,1996,23(4):811-817.

[4]Kim WH,Matsumoto K,Bessho K,et al.Growth inhibition and apoptosis in liver myofibroblasts promoted by hepatocyte growth factor leads to resolution from liver cirrhosis[J].Am patho1,2005,166(4):1017-1028.

[5]Pinzani M,Rombouts K.Liver fibrosis from the bench to clinical targets[J].Dig liver Dis,2004,36(4):231-242.

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