膽管癌中TWIST蛋白、Kiss-1蛋白和上皮黏附素的表達及臨床意義

安 陽 邱寶安 趙文超

解放軍海軍總醫(yī)院肝膽外科，北京 100048

浸潤和轉(zhuǎn)移是膽管癌病變進展中的重要生物學行為，也是患者死亡的重要原因。Kiss-1和上皮黏附素（E-cadherin）高表達對細胞的惡變及轉(zhuǎn)移有抑制作用[1]。TWIST能通過抑制E-cadherin的表達來調(diào)節(jié)腫瘤細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而促進腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移[2]。本實驗應用免疫組織化學技術檢測膽管癌中TWIST、Kiss-1和E-cadherin的表達情況，探討TWIST、Kiss-1和E-cadherin與膽管癌臨床病理特征的關系，旨在為揭示腫瘤的發(fā)生發(fā)展提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

選擇膽管癌根治術切除后留取的蠟塊組織109例作為觀察組，均符合WHO中關于膽管癌的診斷標準，并由病理主治醫(yī)師閱片再次確認。本組患者年齡為46～76歲，平均（55.4±2.5）歲，其中男 58例，女 51例，術前均未進行放化療，同時選取病理證實為正常膽管黏膜組織70例作為對照組，年齡為 46～75 歲，平均（55.1±3.7）歲，其中男 35 例，女35例。兩組在性別、年齡等一般資料上比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白表達的檢測

TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白均購自武漢博士德生物工程有限公司，檢測應用免疫組化SP法，應用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，由病理科主管技師進行操作，并在顯微鏡下進行顯色，嚴格質(zhì)量控制，減少人為誤差。

1.3 結(jié)果判定方法

結(jié)果的判斷均由兩位病理主治醫(yī)師共同閱片得出。Kiss-1和E-cadherin陽性染色均位于細胞膜和細胞質(zhì)，E-cadherin蛋白陽性染色位于細胞膜，呈棕黃色為陽性細胞，合并計算高倍鏡下（400×）隨機選擇的10個視野中陽性細胞占全部計數(shù)腫瘤細胞的百分率，平均每個視野呈陽性反應的細胞數(shù)≥10%為陽性，無明顯陽性反應或陽性反應的細胞數(shù)＜10%為陰性。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)應用SAS 6.12進行統(tǒng)計分析，兩組間比較采用χ2檢驗，并進行線性相關分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白在膽管癌及正常膽管黏膜組織中的表達

TWIST在膽管癌組織中的陽性表達明顯高于對照組，而Kiss-1和E-cadherin在膽管癌組織中的陽性表達明顯低于對照組。見表1。

2.2 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白的表達與膽管癌臨床病理特征的關系

TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白在膽管癌不同分化程度、浸潤深度及不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達差異有統(tǒng)計學意義，見表2。

2.3 膽管癌中TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白表達的相關性

應用SAS軟件進行線性相關分析顯示，觀察組中TWIST和 Kiss-1（r=-0.45，P=0.0198）、TWIST 和 E-cadherin（r=-0.48，P=0.0095）的表達具有負相關性，而Kiss-1和 E-cadherin 的表達具有正相關性（r=0.44，P=0.0130）。

3 討論

腫瘤進展過程中出現(xiàn)基因和蛋白表達的異常，其中抑癌基因的失活是導致腫瘤增殖失控性增生、浸潤和遠處轉(zhuǎn)移的基礎。TWIST基因是一種高度保守的堿性螺旋轉(zhuǎn)錄因子，最初在果蠅中發(fā)現(xiàn)，是HLH超家族的成員，參與機體的多種調(diào)節(jié)過程[3-4]。尤其是中胚層發(fā)育及形態(tài)形成過程及誘導細胞移動及組織塑形中起重要作用[5-6]。E-cadherin是鈣依賴的黏附素家族的一個經(jīng)典成員。在腫瘤的浸潤生長和轉(zhuǎn)移過程中，黏附起到重要作用。近年來，有關緊密連接蛋白及黏附分子功能的研究日趨增多，并證實了其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的重要作用[7]。Kiss-1是一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，也是應用微細胞介導技術在黑色素細胞株中提取并分離的，Kiss-1定位于染色體1q32，包括4個外顯子，編碼產(chǎn)生54個氨基酸。正常情況下Kiss-1在正常黏膜中高表達，對抑制腫瘤向周圍組織浸潤有重要作用，而當其表達下降時，Kiss-1對腫瘤增生及浸潤的抑制作用下降，引發(fā)腫瘤惡性生長的生物學行為。

本實驗通過免疫組織化學技術檢測膽管癌中TWIST、Kiss-1和E-cadherin的表達，結(jié)果顯示TWIST在膽管癌組織中高表達，Kiss-1和E-cadherin在膽管癌組織中低表達，提示三種蛋白均與膽管癌細胞的惡變有關。結(jié)果顯示TWIST、Kiss-1和E-cadherin在不同分化、不同浸潤深度、不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達有明顯的差異，提示三種蛋白可能參與了腫瘤的進展，即TWIST、Kiss-1和E-cadherin異常表達后參與了腫瘤的分化過程及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程，使腫瘤遷移能力增強。TWIST、Kiss-1和E-cadherin參與了腫瘤的分化，由于腫瘤的分化是腫瘤發(fā)生過程中最重要的階段，也說明了TWIST、Kiss-1和E-cadherin對腫瘤的分化起核心作用。由于分化、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均與患者的預后相關，因此，三種蛋白可能與預后有一定關系。實驗結(jié)果顯示TWIST、Kiss-1和E-cadherin具有相關性，提示三種蛋白具有協(xié)同作用，即TWIST不僅具有調(diào)節(jié)以E-cadherin為主的黏附作用[8-9]，還具有調(diào)節(jié)Kiss-1的作用，使腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能增強[10]。惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的先決條件是癌細胞脫離原發(fā)灶，而在此過程中起作用是的異常表達的E-cadherin[11-13]，當TWIST對其調(diào)節(jié)作用下降時，使腫瘤細胞間的黏附作用下降，腫瘤細胞易于離開原發(fā)灶，在遠隔器官進行定植，形成轉(zhuǎn)移癌[14-15]。在此過程中TWIST調(diào)節(jié)的Kiss-1也可以改變細胞外基質(zhì)和基底膜的完整性。因此Kiss-1和E-cadherin的表達缺失以及TWIST的表達增加是促進腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的重要因素，使腫瘤抑制基因與細胞外基質(zhì)降解形成了一個協(xié)同的過程，共同參與腫瘤的發(fā)展。

總之，TWIST、Kiss-1和E-cadherin異常表達在膽管癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，三者具有協(xié)同效應，共同促進腫瘤的進展。

表1 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白在膽管癌及正常膽管黏膜組織中的表達[n（%）]

表2 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白的表達與膽管癌臨床病理特征的關系[n（%）]

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