珍珠水解液脂質體的制備＊

王秀珍，王園園

(1.紹興文理學院，浙江 紹興 312000;2.浙江美諾華藥物化學有限公司 浙江 上虞 312369)

珍珠美容由來已久，我國珍珠產量不斷提高，急需新產品開發和產品升級。不同珍珠產品對皮膚抗衰老作用效果尚無對比研究，珍珠養顏對皮膚作用機理在國內也尚無研究，其藥用療效無現代研究方法證實及量化，對珍珠的基礎研究不足限制了其產業的發展。珍珠養殖是紹興的支柱產業，利用現代藥劑學新成果開發珍珠新產品，有利于產業升級。脂質體化妝品具有普通化妝品不可比擬的效果[1]，可直接為表皮細胞提供營養和補充細胞間質，其特有性能和優異的美容效果來源于脂質體的特有結構。目前，尚無有關珍珠類脂質體的研究。因此，本試驗中根據近年文獻報道的脂質體制備方面方法，先把珍珠粉酸解使成珍珠液，再用旋轉蒸發－冷凍干燥法制備珍珠脂質體，利用電鏡觀察珍珠類脂質體形態并測定其粒徑分布，現報道如下。

1 儀器與試藥

電子恒溫不銹鋼水浴鍋(HHS－4S，上海南洋儀器有限公司);電子恒速攪拌器(GS12－2，上海醫械專機廠);電子精密天平(PB303－N);臺式高速離心機(LG10－24A);電子萬用爐(浙江省上虞市道墟立明化驗儀器廠);攝影生物顯微鏡(XS－212－303);透射電子顯微鏡(JEOL－1011日本電子)。珍珠(直徑3～8 mm，紹興諸暨山下湖產);無水氯化鈣(上?；瘜W試劑有限公司)、氯化鉀(上海化學試劑公司)、硝酸鉀(北京紅星化工廠)、硝酸鈉(西安化學試劑廠)均為化學純;茚三酮(上海劑劑三廠)為分析純;甘氨酸(上海康達氨基酸廠)為生化試劑;司盤60 150 g，膽固醇100 g，聚乙二醇 6000(PEG6000)22.5 g，無水乙醇適量，0.1 mol pH=6.8 的磷酸鹽緩沖溶液 677.5 g。

2 方法與結果

2.1 珍珠水解液制備[2－3]

取珍珠洗凈烘干，在潔凈環境中砸開，去除母核，置球磨機內反復粉碎;精密稱取10 g珍珠粉，置250mL燒杯內，加6mol/L鹽酸溶液40 mL，磁力攪拌12 h，抽濾、水洗，抽濾液減壓蒸餾出鹽酸溶液約20mL后，定容至100mL，將再生好的陰離子樹脂裝柱，柱高約33 cm，將上述溶液過陰離子樹脂除去Cl－，再過陽離子樹脂除去Ca2+，濃縮定溶至100mL;測定其pH并用氨基酸自動分析儀定性定量分析氨基酸。結果珍珠水解液的Cl－的質量濃度為0.84%。氨基酸自動化分析儀分析表明，樣品中含有門冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、酰氨酸、纈氨酸、脯氨酸等。

2.2 珍珠類脂質體制備[4－6]

處方:珍珠水解液 100 mL，司盤 60 150 g，膽固醇 100 g，PEG6000 22.5 g，無水乙醇適量，0.1mol pH=6.8 的磷酸鹽緩沖溶液 677.5 g。

制備方法:稱取司盤 60 150 g、膽固醇 100 g和 PEG6000 22.5 g等固體輔料于西林瓶中，加無水乙醇，60℃水浴加熱并電磁攪拌使溶解完全;60～65℃旋轉蒸發形成薄膜，加入0.1mol pH=6.8的磷酸鹽緩沖溶液，60℃水浴攪拌15min，再室溫攪拌5min，后取出，邊冷卻邊攪拌，即形成泡囊。加入珍珠水解液30mL，混合均勻，真空凍干24 h，室溫放置，緩慢融化，溶解于500mL磷酸鹽緩沖溶液中，即成脂質體分散液。

2.3 珍珠脂質體分散液電鏡觀察

取泡囊1mL，加pH=6.8的磷酸鹽緩沖溶液至100mL，搖勻，取1滴點樣于有碳膜的銅網上，用 pH=6.5 的磷鎢酸染色，透射電鏡8～10萬倍下觀察類脂質體大小、粒徑分布。結果脂質體在電鏡下為多囊脂質體，形態為不規則圓形，粒徑分布10～500 nm，差異較大，見圖1 A。將泡囊置冰箱5℃冷藏48 h，重新觀察。結果脂質體的形態較為豐滿，呈規則圓形，粒徑分布無明顯變化，見圖1B。

圖1 脂質體分散液電鏡下形態

2.4 納米珍珠粉類脂質體包封率測定[7]

取制備的珍珠脂質體溶液2 g，加0.1mol pH=6.8的磷酸鹽緩沖溶液至20 g，混勻，置專用高速離心管中，配對后放入離心機中離心，轉速為 15 000 r/min，分別離心 20，30，40min，觀察游離珍珠水液與脂質體分離情況。結果30，40 min離心時無外觀差異。分離液體，測出游離珍珠水解液質量為1.365 g。計算包封率(QW)=(W總－W游)/W總×100%，結果包封率為(2－1.365)/2 ×100%=31.75%。

3 討論

珍珠水解液為澄清液體。在珍珠粉水解過程中，除使用鹽酸外，沒使用任何別的有害物質，因此只要將Cl－降低到一定程度，就可保證珍珠水解液的安全使用。本試驗中過陰離子樹脂后，珍珠水解液內Cl－質量濃度為0.84%，pH為6.2。

由于珍珠水解液為混合物而非單組分藥物，所以珍珠水解液與脂質體膜相互作用更復雜，其所形成的脂質體在電鏡下觀察為多囊脂質體[8]，脂層由許多同心囊泡構成，由于珍珠水解液中各成分的油水分配系數不同，故親脂性強的組分分散于泡囊的脂質雙分子層中，親水性強的組分可在泡囊的水相中，在水相與膜內部的交界磷脂中包有兩性化合物。因此，電鏡下的脂質體形態為不規則圓形，粒徑分布10～500 nm，差異較大。

冷凍過程中，由于冰晶的形成使脂質體膜破裂，形成冰晶與破碎的脂膜同時存在的不穩定狀態;然后在融化時暴露的脂膜會互相融合重新形成脂質體。此方法最大的優點是不需要加入機溶劑，而且在2.1項下操作中，經過陽離子樹脂除去Ca2+時的同時除去了其他高強度的離子，所以凍融過程不僅增加了脂質體的穩定性[5]，而且提高了脂溶性藥物的包封率[6]。這是制備包囊蛋白質、多肽微粒制劑的主要方法。本試驗電鏡下觀察到，該脂質體的形態為較豐滿、呈規則圓形，粒徑分布無明顯變化，穩定性增加。

[1]陳懷穎，王詠梅，常 首，等.納米脂質體化妝品的質量研究[J].中國化妝品，2008(6):92－94.

[2]劉其城，唐良榮，毛小輝，等.淡水珍珠水解液的制備研究[J].食品與機械，1999，74(6):21 －22.

[3]吳紅棉，蔣志紅，雷曉凌.傳統“珍珠水解液”的工藝改進研究[J].湛江水產學院學報，1994，14(2):57－60.

[4]孫 蕓，許漢林.中藥脂質體制備的研究進展[J].中華醫學研究雜志，2004，4(7):619－621.

[5]敬思群，迪里努爾·阿布都熱合曼，米熱班古·本太力甫.高寒香菊花黃酮固體脂質體制備工藝優化[J].中國釀造，2011(11):50－54.

[6]李志平，梁 慶，劉文彬，等.哈西奈德脂質體制備方法的選擇及其含量與包封率的測定[J].今日藥學，2011，21(6):332－334.

[7]李唐棣，郝麗梅，梅興國.脂質體包封率的研究進展[J].國外醫學:藥學分冊，2006，33(3):224 －227.

[8]王曉梅，唐 星，何梅冰.多囊脂質體的研究進展[J].中國新藥雜志，2006，15(15):1 243 －1 246.