廣東省東莞市2 628例婦科患者人乳頭狀病毒感染調查分析

高宇琳

廣東省東莞市婦幼保健院，廣東東莞 523120

人乳頭狀病毒（human papilloma virus，HPV）是一種具有嚴格宿主范圍和嗜上皮性的DNA 病毒，分子流行病學研究證實HPV 是引起宮頸癌變的主要致病因素[1]，90%以上的宮頸癌標本中有HPV-DNA 的存在[2]。臨床上開展HPV基因檢測是早期宮頸癌篩查的主要方法之一，目前已發現的HPV 亞型約100多種，能感染女性生殖系統的HPV分為低危型和高危型HPV，高危型HPV 持續感染及多重感染是引起宮頸癌變的重要原因之一。本研究對東莞地區2 628例婦女HPV 感染的流行病學進行回顧性分析，以期了解本地區HPV 感染現狀，為宮頸癌的防治提供有價值的參考資料。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2010年1月～2011年2月來我院婦科門診就診患者2 628例，年齡18～68歲，中位年齡32歲。2 628例患者為初次在婦科門診進行HPV 核酸檢測，均無宮頸疾病治療與抗HPV 藥物治療史。

1.2 儀器與試劑

HPV 基因分型檢測試劑購于中山大學達安基因公司，配有試劑盒Ⅰ和試劑盒Ⅱ，試劑盒Ⅰ主要為PCR 反應液，試劑盒Ⅱ為HPV 各亞型雜交膜條、雜交液、TMB 等。PCR儀為ABI 9700，雜交儀為電熱恒溫振蕩水槽（上海精宏）。

1.3 實驗方法

1.3.1 標本采集 宮頸脫落細胞：在無菌條件下，將棉拭子伸入宮頸內，旋轉數周并停留片刻后取出，標本密封保存于 2～8℃備用。

1.3.2 核酸提取 向標本中加入1 mL 滅菌生理鹽水，充分震蕩搖勻，擠干棉拭子；吸取全部液體轉至1.5 mL 離心管中，12 000 r/min 離心 5 min；去上清，沉淀加入 50 μL DNA提取液充分混勻，恒溫處理（10±1）min；12 000 r/min 離心5 min，備用。

1.3.3 PCR 擴增HPV DNA 取5 μL DNA 提取物加入HPV核酸PCR 擴增體系組份，擴增條件：93℃ 3 min；93℃ 40 s，55℃ 40 s，72℃ 40 s，40個循環；72℃延伸 7 min。

1.3.4 雜交及分析過程 雜交、洗膜與顯色均嚴格接照說明書進行，雜交膜條上顯示藍色斑點為陽性，多個斑點為多重感染。統計HPV 感染率及基因型分布。

1.4 統計學方法

應用SPSS 12.0 統計軟件處理數據。計數資料以率表示，采用 χ2檢驗。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV 感染情況

2 628例患者中463例HPV 檢測陽性，陽性率為17.6%，其中單一感染368例，雙重及多重感染95例，感染率分別為14.0%和3.6%。從年齡分布上分析，>50歲年齡段的患者HPV 感染率最高，為29.1%（25/86），其次為20～40歲的患者，感染率為17.8%（381/2 140），各年齡組HPV總體感染率有統計學意義（P<0.05）。各年齡段患者HPV感染情況見表1。

表1 2 628例標本各年齡組HPV感染率情況

2.2 HPV 單一感染情況

368例單一感染患者主要以HPV16、52 和51型感染為主，分別為 115例（31.2%）、68例（18.4%）和 44例（9.8%）。其中低危型（HPV6、11 型）感染 12例（12/368，3.26%），高危 型 感 染 （HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、亞型 CP8304 型）356例（356/368，96.74%）。

2.3 HPV 雙重及多重感染情況

95例雙重及多重感染中，雙重感染71例（71/95，74.7%），三重及三重以上感染24例（24/95，25.3%），感染類型主要以HPV16、58、11、53、51 為主，分別為 37例（38.9%）、16例（16.8%）、16例（16.8%）、14例（14.7%）、14例（14.7%），在各種亞型感染中，HPV59、45、39、33、16、11 主要以復合感染為主。HPV 各型感染分布見表2。

3 討論

宮頸癌是全球婦女第二大常見惡性腫瘤，據世界范圍內統計，每年有50 萬左右的新發病例，其發病呈年青化和上升化趨勢，嚴重威脅婦女的健康和生命。已知HPV 持續感染和多重感染是導致宮頸癌和癌前病變的主要因素之一，從HPV 感染發展到宮頸癌需經歷長期過程，如早期治療的宮頸癌患者生存率高達90%，故建立有效的HPV 篩查方法對宮頸癌的防治具有極其重要意義。

基因芯片技術是近年來發展起來檢測基因的新技術，其具有高通量性在臨床上得到廣泛應用[3]。本研究采用HPV-DNA-反向斑點膜雜交技術（RDB 方法）對2 628例婦科門診患者進行HPV 核酸檢測和基因分型，結果發現463例患者HPV 陽性，其陽性率為17.6%，與Munoz 等[4]報道較為接近。為了進一步了解HPV 在女性宮頸感染情況，本研究將門診患者按年齡分為不同組，研究發現50歲以上組HPV 感染陽性率顯著高于20～40歲組與41～50歲組HPV 陽性率，其中20～40歲組陽性率高于41～50歲組陽性率，結果提示HPV 感染雖有年青化趨勢，但50歲以上組HPV 感染陽性率顯著高于低年齡組，因此對50歲以上女性進行HPV 基因檢測與分型是宮頸癌防治的關鍵。

目前研究表明HPV 感染分型分布的研究在宮頸篩查及癌前病變病情隨防監測中有重要的意義[5]，本研究對463例HPV 陽性患者HPV 基因分型結果顯示，有368例屬于HPV 亞型單一感染，95例屬于雙重及多重感染。單一感染患者主要以HPV16、52 和51型感染為主，多重感染類型主要以HPV16、58、11、53、51 為主，但 Clifford 等[6]報道全世界HPV 感染的主要類型是HPV16/18，其次是45、31、33型，本研究與國內其他地區的報道亦不相同[7]，可能是研究病例數不同之外，還可能是我國不同地區、區域存在差異。本研究中雙重及多重感染例數占總例數的20.5%（95/463），提示本地區人群多重感染率較高，這一點應引起高度重視。

表2 463例HPV陽性婦女HPV感染分布

宮頸HPV 早發現、早預防是阻斷宮頸癌病變的關鍵，許多國家已將HPV 檢測納入篩查計劃。目前我院已成立了宮頸癌防治指導中心，對育齡婦女及宮頸癌高危人群定期進行HPV 核酸檢測及基因分型篩查，預防宮頸癌的發生及了解HPV 感染的轉歸，將為本地區婦女的健康提供有利保障。

[1]Roden R，Wu TC.How will HPV vaccines affect cervical cancer[J].Nat Rev Cancer，2006，6（10）：753-763.

[2]Stoler MH.Human papillomavirus and cervial neoplasia：a model for carcinogenesis[J].Int J Gynecol Pathol，2000，19（1）：16.

[3]馬卿蓮，肖長認，葉紅，等.分子生物學技術在HPV分型方面的應用進展[J].現代腫瘤醫學，2009，17（1）：144-147.

[4]Munoz N，Bosch FX，de Sanjose S，et al.Epidemiologic classification of human papillomavirus type associated with cervical cancer[J].N Engl J Med，2003，348（6）：518-527.

[5]Guyot A，Karim S，Kyi MS，et al.Evaluation of adjunction HPV testing by hybrid capturell in woman with minor cytological abnormalities for CIN2/3 and cost comparisos with coloscopy[J].BMC Infect Dis，2003，3：23.

[6]Cliffeord GM，Smith JS，Plummer M，et al.Human papillomavirus types in invasive cervical cancer wordwide：a meta-analysis[J].Br J Cancer，2003，88（1）：63-73.

[7]劉永林，張麗，陳益民，等.浙江地區1088例婦科就診患者HPV 感染狀況調查[J].中華臨床感染病志，2011，4（2）：106-108.