HPLC 法測定不同產(chǎn)地硫熏和烘干金銀花中綠原酸含量

邢志霞 崔燕兵 劉 偉

1.漯河醫(yī)學高等專科學校，河南漯河 462002；2.河南中醫(yī)學院分析測試中心，河南鄭州 450008

金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花[1]，主要分布在山東、湖南、廣東、河南、安徽、四川、陜西、貴州等地。味甘、性寒，為臨床常用藥，金銀花具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤、增強免疫、解熱抗炎、利膽保肝等多種藥理作用。臨床用于癰腫癤瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風熱感冒、溫病熱等癥。主要成分為綠原酸、木樨草苷、揮發(fā)油等。關(guān)于金銀花的產(chǎn)地加工，多數(shù)本草著作均在采后陰干。現(xiàn)代研究報道有硫磺熏曬法[2]、蒸曬、烘干，強制通風裝置干燥[3-4]，微波干燥等。目前，關(guān)于金銀花硫磺熏蒸及烘干以后有效成分定量分析報道不多，本次試驗測定了硫磺熏蒸和烘干后金銀花中綠原酸的含量，為產(chǎn)地加工后金銀花藥材的質(zhì)量評價提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

DIONEX Summit 系統(tǒng)高效液相色譜儀，METTLER AE 240 十萬分之一天平，F(xiàn)A2004A萬分之一天平；所用乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純；綠原酸對照品（批號：110753-200212，中國藥品生物制品檢定所）；木犀草苷對照品（批號：111720-200603，中國藥品生物制品檢定所）；所用金銀花藥材由河南中醫(yī)學院藥學院董誠明教授鑒定為金銀花（Lonicera japonica Thunb.）。烘干金銀花采用40℃烘干5 h，再55℃，烘干10 h；硫磺熏蒸樣品硫磺用量100 g/m3，熏蒸1次，熏蒸2 h，然后照上述方法烘干。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗[5-8]

AichromBond-AQ C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）； 流動相：0.4%磷酸溶液-乙腈=87∶13；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：327 nm；進樣量 10 μL；理論塔板數(shù)不低于1 000。

2.2 對照品溶液的制備

分別取綠原酸、木犀草苷對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，分別加50%的甲醇制成1 mL 含40 μg的溶液，即得（10℃以下保存）。

2.3 供試品溶液的制備

取金銀花粉末（過四號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%的甲醇溶液50 mL，稱定重量，超聲處理功率（250 W，頻率 35 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加50%的甲醇溶液至刻度，搖勻，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關(guān)系的考察 精密量取“2.2”項下綠原酸對照品溶液 2、4、6、8 mL，用 50%的甲醇定容至 10 mL，搖勻，得到5個濃度的綠原酸對照品溶液。按上述色譜條件各進樣10 μL，以峰面積（Y）為縱坐標，對照品的量（X）為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程：Y=6.028 6X-5.211 9，r=0.999 9，綠原酸在0.083 6～0.418 0 μg 范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。色譜見圖1。

2.4.2 精密度試驗 精密吸取同一綠原酸對照品溶液5 μL，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，其RSD=0.10%。提示儀器精密度良好。

2.4.3 重復性試驗 取同一批金銀花樣品0.5 g 共6份，精密稱定，照“2.3”項下的方法制備供試品溶液，測定綠原酸含量，其RSD值為1.34%。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗 分別精密吸取供試品溶液10 μL，分別于0、2、4、8、10、12、24 h 注入高效液相色譜儀，記錄綠原酸峰面積，其RSD 為0.87%，表明樣品中綠原酸在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗 取已知含量的金銀花樣品6份，每份約0.25 g，精密稱定，分別加入定量綠原酸對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，測定回收率，結(jié)果見表1。

2.4.6 樣品含量測定 精密吸取各批次供試品溶液10 μL按“2.1”項下色譜條件進樣，以外標法計算各樣品溶液中的綠原酸的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 關(guān)于硫磺熏蒸炮制方法的應用

硫磺熏蒸法作為一個傳統(tǒng)的加工養(yǎng)護方法，一直在一些醫(yī)院、生產(chǎn)企業(yè)和民間沿用。硫熏使中藥材或中藥飲片干燥快，不變質(zhì)，不發(fā)霉，不蟲蝕。該方法不僅改變藥材外觀，而且影響藥材化學成分的變化，從而使藥材的質(zhì)量發(fā)生變化。在控制硫熏后二氧化硫殘留量符合國家現(xiàn)行標準的情況下，該法作為新鮮金銀花的加工方法有一定存在價值。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

表2 金銀花中綠原酸含量測定結(jié)果（mg/g）

3.2 金銀花不同炮制品中綠原酸的含量比較[9]

金銀花含量測定結(jié)果可以看出，硫磺熏蒸后金銀花中綠原酸的含量普遍比烘干品高，這可能是硫熏后金銀花內(nèi)部化學成分之間發(fā)生相互作用的結(jié)果，有待進一步研究。同一炮制方法中不同產(chǎn)地之間的差異較大，其中鄭州產(chǎn)地金銀花中綠原酸含量較低，封丘、山東兩地含量較高，這可能與當?shù)氐耐寥馈夂虻拳h(huán)境因素密切相關(guān)。各個產(chǎn)地金銀花經(jīng)兩種方法炮制后，含量均在1.5%以上，符合《中國藥典》2010年版規(guī)定。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：205.

[2]楊俊杰，豆成林，李娟，等.河南金銀花產(chǎn)地深加工的探討[J].時珍國醫(yī)國藥，2011，22（11）：2739-2740.

[3]辛華，豐杰，程若敏，等.HPLC 測定不同產(chǎn)地金銀花中綠原酸和木犀草苷[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（2）：60-63.

[4]趙四清，曾嶸，雷鵬，等.熏硫加工對天麻飲湯劑質(zhì)量的影響[J].湖南中醫(yī)學院學報，2005，25（2）：25，37.

[5]孟曉巖，丁勇.高效液相色譜法同時對金銀花中5 種有效成分的含量測定[J].實用藥物與臨床，2012，15（2）：93-94.

[6]楊蓓蓓，劉超，王素娟，等.高效液相色譜法測定金銀花藥材中3 種成分的含量[J].藥物分析雜志，2006，26（2）：168-171．

[7]陳鋼，侯世祥，胡平，等.金銀花提取物中綠原酸的穩(wěn)定性研究[J]中國中藥雜志，2003，28（3）：223-225.

[8]時軍波，徐娜，劉長安，等.金銀花不同部位中綠原酸和木犀草苷含量的測定[J]化學分析計量，2010，19（6）：45-47.

[9]馬曉青，蔡皓，劉曉，等.硫磺熏蒸前后金銀花的HPLC 指紋圖譜比較和聚類分析[J].中國新藥雜志，2012，21（1）：92-95.