苦蕎總黃酮提取工藝的比較研究

□李靜舒

(山西廣播電視大學，山西 太原 030027)

蕎麥是一種藥食同源作物，其藥用價值主要體現在黃酮類化合物，這是一種多酚類天然產物，主要包括蘆丁，槲皮素、蕓香苷、山奈酚等［1］。黃酮類化合物對降低血脂、血糖及抗心腦血管等疾病具有一定的輔助療效。隨著生活水平的提高，現代人們更加注重采用食療達到保健效果。所以蕎麥作為保健食品和藥品的生產原料，廣泛應用于食品和醫藥工業。

本文以晉蕎2號(苦蕎)為樣品，采用熱水浸提法、乙醇浸提法、超聲波輔助提取法、微波輔助提取法4種方法提取苦蕎中總黃酮類化合物，并對提取所得的黃酮類化合物進行定量測定。通過數據分析，比較這4種提取方法的總黃酮得率以及單因素影響程度，探討蕎麥總黃酮的最佳提取工藝，為更好地開發利用蕎麥資源提供一定的理論依據。

一、材料與方法

(一)實驗材料

晉蕎2號(苦蕎):山西省農科院提供。

(二)實驗試劑

蘆丁標準品:中國藥品生物制品檢驗所;亞硝酸鈉、硝酸鋁、乙醇、氫氧化鈉:均為分析純試劑，上海化學試劑公司。

(三)實驗儀器

烘箱:DGG－9030A，北京萊凱博儀器設備有限公司;粉碎機:FW－100，鶴壁市先烽儀器儀表有限公司;冰箱:BCD－186KB，青島海爾公司;紫外分光光度計:DR5000，北京宏昌科技有限公司;恒溫水浴鍋:SHA－C數顯恒溫水浴鍋，金壇市華城誠達實驗儀器廠;超聲清洗儀:HSCX－G，山東濟寧恒碩超聲機械有限公司;微波爐:P70D2OTL－D4，格蘭仕公司。

(四)實驗方法

1．樣品的處理。將蕎麥粒于80℃烘箱中烘干6h至恒重，冷卻。粉碎機粉碎，過60目篩，分袋包裝，密封備用。

2．測定波長的選擇和蘆丁標準方程曲線的繪制。配制濃度為0．4698mg/ml的蘆丁標準應用溶液，避光冷藏保存。準確量取蘆丁標準溶液2ml，置于10ml試管中。加5%亞硝酸鈉水溶液 0．6ml，靜置 5min，加10%硝酸鋁水溶液0．6ml，搖勻后靜置 5min，加 1．0mol/L 氫氧化鈉水溶液 5．0ml，靜置10min，最后加30%乙醇至刻度，靜置15min后，在分光光度計上于400－600nm范圍內進行吸光度掃描，發現在510nm處存在一個最大吸收峰，選定該波長作為測定波長［2］。

準確量取蘆丁標準溶液0．0、0．1、0．2、0．4、0．5、0．8、1．0、1．5ml，分別置于8只刻度10ml的試管中，按照上述方法顯色定容，510nm處測定吸光度。以溶液質量濃度ρ(mg/ml)為橫坐標，吸光度A為縱坐標，得線性方程:A=12．391ρ－0．022，R=0．997。

3．熱水浸提法。準確稱取9份苦蕎實驗樣品，每份重量為5g。在單因素實驗基礎上，確定浸提溫度、料液比、浸提時間為可變因素，進行正交實驗設計，如表1。浸提完畢后，將浸提液過濾處理，濃縮為10ml，再用乙醇溶液(30%)定容至100ml，混勻，樣品待測定［3］。

4．乙醇浸提法。準確稱取9份苦蕎實驗樣品，每份重量為5g。在單因素實驗的基礎上，確定浸提溫度、料液比、浸提時間、乙醇濃度為可變因素，進行正交實驗設計，如表2。浸提完畢后，將浸提液過濾處理，濃縮為10ml，再用乙醇溶液(30%)定容至100ml，混勻，樣品待測定［4］。

5．超聲波輔助提取法。準確稱取9份苦蕎實驗樣品，每份重量為5g。在單因素實驗的基礎上，確定超聲功率、超聲提取時間、料液比為可變因素，進行正交實驗設計，如表3。浸提完畢后，將浸提液過濾處理，濃縮至10ml，再用乙醇溶液(30%)定容至100ml，混勻，樣品待測定［5］。

6．微波輔助提取法。準確稱取9份苦蕎實驗樣品，每份重量為5g。在單因素實驗的基礎上，確定微波功率、微波提取時間、料液比為可變因素，進行正交實驗設計，如表4。浸提完畢后，將浸提液過濾處理，濃縮至10ml，再用乙醇溶液(30%)定容至100ml，混勻，樣品待測定。

7．提取的苦蕎黃酮類化合物的計算。將采用4種方法提取完畢并處理好的苦蕎黃酮類化合物待測液，分別準確量取2ml，加入到10ml的試管中，同實驗方法2定量測定提取所得總黃酮類化合物。將從實驗方法2得出的蘆丁標準曲線查出黃酮含量(mg/ml)記為ρ;樣品提取液的稀釋倍數記為n;樣品質量記為m(g);黃酮得率記為R(%)。黃酮得率計算公式為:R=(ρ×10×n)/(m×1000)×100%

二、實驗結果

(一)熱水浸提實驗結果

表1 熱水浸提取法正交實驗結果及分析

對表1中數據進行分析得結果:RB均比RA、RC大，所以在熱水浸提實驗中，料液比對得率的影響最大，浸提溫度次之，浸提時間對得率的影響最小。得率最高的實驗條件為第9 號:A3B3C2，即80℃、料液比1:30、浸提時間5h。

(二)乙醇浸提實驗結果

表2 乙醇浸提取法正交實驗結果及分析

對表2中數據進行分析得結果:RD均比RA、RB、RC大，所以在乙醇浸提實驗中，4種因素對得率效果影響的順序依次為:乙醇濃度、浸提時間、浸提溫度、料液比。得率最高的實驗條件為第9號:A3B3C2D1，即乙醇濃度70%、浸提溫度為80℃、料液比1∶30、浸提時間5h。

(三)超聲波輔助法提取實驗結果

表3 超聲波輔助提取法正交實驗結果及分析

對表3中數據進行分析得結果:RA均比RB、RC大，所以在超聲波輔助法提取實驗中，超聲功率對得率的影響最大，超聲時間次之，料液比對得率的影響最小。得率最高的實驗條件為第6號:A2B3C1，即超聲功率160W、料液比1:10、超聲時間80min。

(四)微波輔助法提取實驗結果

表4 微波輔助提取法正交實驗結果及分析

對表4中數據進行分析得結果:RA均比RB、RC大，所以在微波輔助法提取實驗中，微波功率對得率的影響最大，料液比次之，微波時間對得率的影響最小。得率最高的實驗條件為第5號:A2B2C3，即微波功率360W、微波時間5min、料液比1:40。

三、結論

比較這四種提取方法結果發現，熱水浸提法的總黃酮得率比較低，且耗時長，產生雜質多;乙醇浸提法和超聲波輔助法的總黃酮得率差異不明顯，但是乙醇浸提法同樣存在耗時長的問題，而超聲波輔助法相對提取時間短，產生雜質少。微波輔助提取法得率最高，提取得率高、提取速度快、可控性強，具有一定優勢。但是黃酮類化合物的熱穩定性相對較差，當溫度高到一定程度時，就會氧化分解，所以采用微波輔助法時還應注意提取的功率和時間要適當。

目前，國內外學者對苦蕎總黃酮類化合物提取方法的報道還有很多，比如薄層色譜法、毛細管電泳法、高效液相色譜法等。隨著化學分析儀器的水平不斷提高，在今后的實驗中，有待進一步研究污染更少，操作更簡便，提取率更高的總黃酮類化合物提取方法。

［1］王華，張雄，張國濤．蕎麥中黃酮類化合物的分析方法研究進展［J］．應用化工，2013，(7)．

［2］張素斌，廖燕婷．4種甜蕎麥黃酮提取方法的比較研究［J］．食品與機械，2012，(6)．

［3］閆斐艷，楊振煌．苦蕎種子總黃酮提取方法的比較研究［J］．食品與藥品，2010，(3)．

［4］張忠．苦蕎麥麥麩中槲皮素的提取［J］．江蘇農業科學，2013，(2)．

［5］許鋼．苦蕎麥黃酮提取最佳條件及抗氧化研究［J］．中國食品學報，2008，(6)．