利培酮和消幻湯合并使用對谷氨酸功能低下致小鼠高活動性與偏好行為的影響

張 燕 楊春娟 劉飛虎 肖 凡 袁 方

1.西安市精神衛生中心，陜西西安 710061；2.西安醫學院，陜西西安 710068；3.陜西中醫學院，陜西咸陽 712000

研究報道谷氨酸功能障礙可能參與了精神分裂癥的發病機制，許多學者證明谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（N-me thy-l D-aspartate，NMDA）受體的拮抗劑地卓西平馬來酸（MK-801）能引起擬精神分裂癥的癥狀和認知功能損害[1-2]。因而MK-801已成為許多研究者建立精神分裂癥動物模型的工具藥[3-4]。精神分裂癥是臨床最常見的社會危害性大，治愈率低的精神疾病[5]。雖然非典型抗精神病藥如利培酮可以明顯改變精神分裂癥精神癥狀，但其不良反應較多較常見，使患者服藥的依從性下降，故降低了療效[6]。隨著研究的深入，中西藥物合并使用治療精神分裂癥已顯示出明顯的優勢及前景[7]。西安市精神衛生中心將消幻湯（又名：清幻靈）主要用于肝膽濕熱引起的幻聽，情緒不穩，脈玄舌尖紅，苔薄黃的患者，臨床應用已四十余年。而且經過文獻查閱和前期研究表明，消幻湯中主要組成成分的龍膽草、磁石、酸棗仁、柴胡等對中樞神經系統均有明顯的調節作用[8-10]。所以本實驗研究利培酮和消幻湯合并使用對于MK-801誘導谷氨酸低下精神分裂癥小鼠模型的作用，為中西藥物合并使用治療精神分裂癥提供更多基礎研究資料。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

70只健康昆明種小鼠雌雄各半，體質量為（20±2）g，清潔級，購自西安交通大學醫學院實驗動物中心。標準嚙齒類飼料飼養且自由飲食，維持室溫（22±1）℃。適應3 d后開始實驗。

1.2 藥物與試劑

MK-801（購自美國Sigma公司）溶于生理鹽水。利培酮（購自西安市楊森制藥有限公司，批號：H2001 0309）研成粉末以蒸餾水溶解。消幻湯方劑藥材（購自陜西省老百姓大藥房），將磁石加入水中煮沸10 min，后加其余藥物煮沸40 min，過濾取汁，二煎30 min，兩次濾液合并濃縮成每毫升含生藥0.799 g的藥液。

1.3 主要儀器

BA-200避暗儀、DT-200跳臺儀、ZZ-6自主活動儀均購自成都泰盟科技有限公司。

1.4 分組與造模

昆明種小鼠70只隨機分為五組，每組14只，適應3 d，其中一組作為空白組腹腔注射給予生理鹽水，其余四組連續腹腔注射 MK-801[（0.072 mg/mL，5 mL/（kg·d）]2 周。

1.5 給藥情況

造模后給藥，隨機編為模型組、利培酮組、消幻湯組、利培酮和消幻湯合并使用組（簡稱合并組）。其中空白組、模型組灌胃給予蒸餾水，利培酮組、消幻湯組、合并組，分別給與利培酮[0.121 mg/mL，10 mL/（kg·d）]、消幻湯[（0.799 g/mL，10 mL/（kg·d）]、利培酮[（0.242 mg/kg，5 mL/（kg·d）]和消幻湯[（1.598 g/mL，5 mL/（kg·d）]。

1.6 方法

1.6.1 自主活動實驗 自主活動儀由可分離反應箱和微電腦控制器組成，同時對6只小鼠進行自主測試實驗。實驗前，各組小鼠均為健康活潑的小鼠，輕捉拿小鼠，放入活動箱內先適應3 min后開始測定5 min小鼠站立和活動次數。 每次實驗均在 8∶00～10∶00 和 16∶00～18∶00進行測驗，記錄每組小鼠站立和活動次數。

1.6.2 避暗法實驗[11]被動回避條件反射箱大小為36 cm×12 cm×12 cm。分明暗兩間，明間頂蓋上方置有小臺燈，暗間底部安銅柵，通以33 V、50 Hz伏電流，明暗兩室之間有一直徑為3 cm的洞口，反射連接一記時器，記錄動物從明間通過洞口進入暗間的潛伏期。實驗前將避暗潛伏期大于180 s的小鼠棄去不用。實驗時將小白鼠頭部背著洞口放入明間，小鼠一進入暗間立即受到電擊，而記時器則同時停止記時，取出小鼠，記錄每組小鼠進入暗間的平均潛伏期。

1.6.3 跳臺法實驗[11]實驗裝置為（10 cm×10 cm×60 cm）被動回避條件反射箱，用不透明黑色塑料板分隔成6間，箱底有銅柵，通以32 V電流，每間置一橡皮墊（高和直徑均為4.5 cm）作為動物回避電擊，動物的正常反應是跳回橡皮墊上，為此訓練10 min并紀錄2 min的潛伏時間。

1.7 統計學方法

采用軟件SPSS 10.0進行統計學分處理。計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩獨立樣本的計量資料采用t檢驗；多組間的比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 預篩及造模結果

通過避暗法訓練實驗之后，空白組、模型組、利培酮組、消幻湯組和合并組篩選后只數分別為10、11、10、10、11只。造模結束后，以上各組的平均體重分別為 24.54、24.10、24.01、24.27、24.42 g， 組間小鼠只數和體重差異無統計學意義（P＞0.05）。

由表1可知，在造模結束時，模型組動物活動次數明顯增加，第2、6周模型組的小鼠站立次數約比空白組多10次。而在隨后的4周安慰劑干預下，模型組隨著時間推移，高活動性有所下降，但平均活動次數仍比空白組多5次。造模2周末，模型組避藥潛伏時間較空白組延長約30 s，但模型組的跳臺潛伏期卻縮短了3 s。

表1 空白組與模型組測試項目結果（±s）

表1 空白組與模型組測試項目結果（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05

第2周末第6周末空白組模型組空白組模型組10 11 10 11 48.8±11.9 54.3±14.0 46.5±11.3 56.3±7.6 11.3±14.5 36.8±16.2*11.6±11.3 17.4±7.6 230.0±34.8 260.2±6.9 241.2±7.8 255.9±23.5 98.5±34.3 95.5±45.6 117.0±9.4 104.3±28.5測試時間 組別 只數 站立次數（次）活動次數（次）避暗潛伏期（s）跳臺潛伏期（s）

2.2 利培酮和消幻湯合并使用對自主探究活動的影響

給藥后，利培酮組、利培酮及消幻湯合并使用組站立次數分別為38.5、36.6次，均低于模型組約20次。給藥后，利培酮組、合并組活動次數分別為9.0、8.6次，均低于模型組約9次。結果見表2。

2.3 利培酮和消幻湯合并使用對小鼠偏好行為的影響

用避暗儀測小鼠嗜黑暗偏好行為的變化，給藥4周后，模型組潛伏期縮短4.4 s，利培酮組、消幻湯組、合并組分別延長13.9、15.0、34.1 s；與模型組比較，合并組潛伏期延長35.5 s（P＜ 0.05），見表3。

表2 小鼠自主探究活動的結果（次，±s）

表2 小鼠自主探究活動的結果（次，±s）

模型組利培酮組消幻湯組合并組11 10 10 11 56.3±7.6 38.5±26.4 53.4±6.7 36.6±23.9 17.4±7.6 9.0±26.4 15.3±3.1 8.6±23.9組別 只數 站立次數 活動次數

表3 小鼠嗜黑暗偏好行為的觀察結果（s，±s）

表3 小鼠嗜黑暗偏好行為的觀察結果（s，±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05

模型組利培酮組消幻湯組合并組11 10 10 11 260.2±6.9 257.6±24.5 254.9±40.0 259.6±25.1 255.9±23.5 271.6±4.5 270.0±23.7 293.8±6.4-4.4 13.9 15.0 34.1*組別 只數 造模潛伏期 給藥潛伏期 潛伏期延長時間

用跳臺儀測小鼠嗜角落偏好行為的變化，給藥4周后，模型組、利培酮組、消幻湯組、合并組平均潛伏期分別延長 8.8、16.8、18.1、20.2 s。 其中，模型組延長時間要比上述3組短近10 s，見表4。

表4 小鼠嗜角落偏好行為的觀察結果（s，±s）

表4 小鼠嗜角落偏好行為的觀察結果（s，±s）

造模組利培酮組消幻湯組合并組11 10 10 11 95.5±45.6 96.6±33.9 98.0±40.2 96.3±36.3 104.3±28.5 113.5±19.3 114.4±14.8 118.4±7.7 8.8 16.8 18.1 20.2組別 只數 造模潛伏期 給藥潛伏期 潛伏期延長時間（s）

3 討論

精神分裂癥在傳統醫學中屬“癲病”和“狂病”范疇，病位在神機，與肝膽心脾有關，主要是由于氣滯、痰結、血瘀等因素導致臟氣不平、陰陽失調、神機逆亂而出現情志失調[12-13]。根據該病特點，消幻湯主要針對肝膽實熱所引起的神志失常、情志失調、虛妄見聞等癥狀所設，通過疏肝瀉熱，清心活血，安神定志之功效，而調理氣血陰陽，達到治療疾病的目的。由于大部分精神分裂癥患者缺乏自知力，治療初期需盡快控制癥狀以減少危險情況的發生，臨床上采用中西藥結合的治療方法，可減輕治療中的不良反應[14-16]。

本實驗自主活動儀實驗證實，連續腹腔注射MK-801（0.072 mg/mL）兩周造模誘導，空白組，模型組，合并組自主活動明顯增加，其探究活動較空白組相比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。蘇允愛等[4]結果也表明，MK-801誘導谷氨酸功能低下精神分裂癥模型小鼠的自主性活動增多。給藥后，消幻湯組探究活動減少次數不明顯，則說明消幻湯單獨使用對中樞沒有抑制作用，僅起到調節作用，利培酮對中樞有明顯抑制作用，而消幻湯和利培酮合并使用對小鼠中樞有一定的溫和抑制作用。李光華等[5]結果也表明消幻湯成份中的磁石對小鼠的中樞有調節作用。

避暗儀和跳臺儀實驗證實，消幻湯組避暗潛伏期和跳臺潛伏期延長時間均高于利培酮組，則消幻湯的酸棗仁和柴胡等成份可能對小鼠的并對損害學習記憶有保護作用。侯建平等[6]的結果也表明，消幻湯成份酸棗仁能增強學習記憶能力的作用。季吉等[17]研究適當劑量的柴胡注射液在一定時間內具有提高小鼠學習記憶能力的功效，該作用可能與伴隨的腦組織抗氧化能力提高和NO含量改變有關。合并組小鼠的學習記憶能力增強促使小鼠遠離黑暗和角落的電擊傷害。

本研究提示，利培酮藥效雖強，但對中樞系統明顯抑制作用，而消幻湯藥效溫和，僅對中樞系統起調節作用，消幻湯對小鼠學習記憶的保護作用強于利培酮。利培酮和消幻湯兩種藥物合并使用療效優于利培酮或消幻湯單獨使用療效。利培酮和消幻湯合并使用充分驗證中西藥結合治療可以揚各自之長，避各自之短，中西藥合用的臨床療效可能優于單純中藥或單純西藥治療，這對于應用合適藥物治療精神分裂癥有十分重要的意義。

[1]Stefanovic A，Brandner B，Klaassen E，et al.Acute and chronic effects of ketamine on semantic priming：modeling schizophrenia[J].J Clin Psychopharmacol，2009，29（2）：124-133.

[2]Manahan-Vaughan D，von Haebler D，Winter C，et al.A single application of MK-801 causes symptoms of acute psychosis， deficits in spatial memory，and impairment of synaptic plasticity in rats[J].Hippocampus，2008，18（2）：125-134.

[3]DallI'gna OP， Da Silva AL， Dietrich MO，et al.Chronic treatment with caffeine blunts the hyperlocomotor but not cognitive effects of the N-methy-lD-aspartate receptor antagonist MK-801 in mice[J].Psychopharmacology（Berl），2003，166：258-263.

[4]蘇允愛，司天梅，郭春梅，等.氟哌啶醇對MK-801致小鼠高活動性與前脈沖抑制損害的作用[J].中國神經精神疾病雜志，2011，37（1）：24-28.

[5]李光華，周旭，賀弋.龍骨、磁石對小鼠鎮靜催眠作用的研究[J].寧夏醫學院學報，2001，23（2）：82-83.

[6]侯建平，張恩戶，胡悅，等.酸棗仁對小鼠學習記憶能力的影響[J].廣西中醫學院學報，2002，5（3）：11-13.

[7]丁小兵，黃建飛.利培酮對女性精神分裂癥患者肝功能的影響[J].精神病學雜志，2011，24（5）：384-385.

[8]劉文娟，張虹，高蕭楓.柴胡對大鼠中樞神經遞質作用的實驗研究[J].中華中醫藥雜志，2007，（增刊）：302-304.

[9]張淑芳，高新立.配合中藥治療精神分裂癥的療效觀察[J].中外健康文摘，2010，7（31）：6-7.

[10]劉濤，才謙，付玉芹.中藥龍膽的研究進展[J].遼寧中醫雜志，2004，31（1）：85-86.

[11]廖偉堅.用跳臺法和避暗法觀察藥物對學習和記憶獲得的影響[J].福建醫藥雜志，1988，20（4）：117-118.

[12]周小寧.近10年來精神分裂癥的中醫研究進展[J].中國中醫基礎醫學雜志，1998，4（7）：53-56.

[13]蘇晶，郝麗莉.精神分裂癥的中醫藥研究及展望[J].中醫藥信息，1994，1（5）：5-7.

[14]黃青松，王秋菊.中西醫結合治療難治性精神分裂癥100例臨床觀察[J].四川中醫，2007，25（10）：63-64.

[15]溫益雄，甘記興，黃英民，等.蓮子清心糖合并氯氮平治療精神分裂癥臨床療效分析[J].中國民康醫學，2008，20（1）：30-31.

[16]王立志.中西醫結合治療精神分裂癥30例對照研究[J].中國民康醫學，2008，20（11）：1027-1208.

[17]季吉，董榕.柴胡注射液對小鼠學習記憶功能的影響[J].南京醫科大學學報：自然科學版，2006，12（26）：1183-1186.