半乳糖凝集素1和層粘連蛋白在新疆維吾爾族子宮頸癌中作用的相關性研究

劉迎嘉 楊波 張晨

新疆地區維吾爾族是宮頸癌的高發人群，初查患病率高達459/10萬～590/10萬，高于同一生活環境下的其他民族，且發病年齡早［1］，因此研究維吾爾族宮頸癌發病機制，以期早期阻斷宮頸癌的發生是非常必要的。Galectin-1是半乳糖凝集素家族的一員，在細胞的黏附、增殖、凋亡、免疫及腫瘤發生、發展、遷移中發揮重要作用［2］。層粘連蛋白(Laminin，LN)是細胞外基質和基底膜的主要成分，對維持細胞外基質和基底膜的完整結構起著重要作用，大量的研究表明LN與惡性腫瘤的生長、浸潤、轉移及預后有關［3］。二者在維族宮頸癌中的相互作用機制鮮見報道。我們采用免疫組化方法檢測Galectin-1，LN在維族宮頸癌中的表達，以探討與維族宮頸癌發生發展的關系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年1月至2011年12月在新疆醫科大學五附院病理科存檔的石蠟標本100例，患者均為維吾爾族，其中浸潤性宮頸鱗癌40例，CINⅡ-Ⅲ20例，CINⅠ20例，慢性宮頸炎20例。所有病例術前均未行放化療等特殊治療。

1.2 試劑與方法 濃縮型鼠抗人單克隆Galectin-1抗體購自Novocasta生物公司(克隆號:25 c1)，濃縮型兔抗人多克隆抗體LN、VEGF均購自北京中杉金橋生物公司。

標本均經10%的中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm厚度連續切片，其中1張做HE染色再次確診。采用免疫組化S-P法。石蠟切片脫蠟、水化，Galectin-1和VEGF經抗原高壓修復，LN經胃酶修復。滴加過氧化物酶阻斷溶液，以阻斷內源性過氧化物酶活性。PBS沖洗后，滴加非免疫性動物血清。PBS沖洗后，滴加一抗，一抗濃度:Galectin-1、VEGF、LN均 1∶100，4℃過夜。滴加生物素標記的二抗，PBS沖洗后，加鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液，37℃孵育;DAB顯色，用已知的陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗做陰性對照。

1.3 結果判斷 顯微鏡圖像采集系統采集免疫組化染色切片圖像，在相同條件下隨機拍攝5個100倍視野，使用圖像分析軟件Image ProPlus5.1對免疫組化進行定量分析，以積分吸光度值作為分析指標，取其平均值。

1.4 統計學方法 采用SPSS 16.0統計學軟件進行數據分析，結果以均數±標準差表示，采用方差分析，統計分析前進行正態分布檢驗和方差齊性檢驗(經檢驗本組資料呈正態分布且方差齊)，相關分析采用pearson線性相關，α=﹤0.05。

2 結果

2.1 Galectin-1在慢性宮頸炎組、CIN組表達于宮頸組織細胞外基質的胞漿，在宮頸癌組陽性表達于癌細胞胞漿及癌細胞外基質，陽性細胞胞漿著棕黃色顆粒。宮頸癌組和炎癥組比較有統計學意義(P＜0.05)。在慢性宮頸炎組、CIN組、宮頸癌組表達陽性率和陽性強度依次增強(P＜0.05)。見圖1，表1。

2.2 LN主要表達于細胞外基質中，陽性細胞胞漿著棕黃色顆粒。宮頸癌組和炎癥組比較有統計學意義(P＜0.05)。在慢性宮頸炎組織、CIN組、宮頸癌表達陽性率和陽性強度依次減弱(P＜0.05)。見表1。

2.3 宮頸癌組織中Galectin-1、LN的相關性 宮頸癌組織Galectin-1表達與LN表達呈負相關，r=0.482，P＜0.05。

表1 Galectin-1、LN在宮頸慢性炎癥組、CIN組和宮頸癌組的表達(±s)

表1 Galectin-1、LN在宮頸慢性炎癥組、CIN組和宮頸癌組的表達(±s)

注;r=0.482，P ＜0.05

分組 例數 Galectin-1 F值 P值 LN F值 P值20 51.23±21.36 ＜0.05 13472.±9381.27 CINⅠ 20 24357.12±9538.74 5.43 ＜0.05 8523.7±5432.炎癥40 58964.46±1847.44 ＜0.05 1648.33±549.94 33 4.94 ＜0.05 CINⅡ-Ⅲ 20 37148.36±11359.41 ＜0.05 4936.4±2737.36宮頸癌

3 討論

宮頸癌的發生發展是一個多因素、多階段的復雜過程，在致癌過程中可能與維吾爾族婦女衛生條件差、早婚、多婚、早育、多育、遺傳易感因素等有一定的關系，還可能與細胞的免疫逃逸、基底膜的破壞、血管新生和細胞粘附能力的改變等有關。

研究證明，Galectin-1在許多腫瘤中的表達水平上調，如神經膠質母細胞瘤、口腔鱗狀細胞癌、胰腺導管腺癌、甲狀腺癌、肝癌等，并與其侵襲能力及惡性程度密切相關［4-9］。

Kloog等發現Galectin-1通過與癌基因H-Ras相互作用，為其提供膜錨定位點，增強Ras介導的信號轉導過程，從而促進細胞向腫瘤細胞表型轉化［10］。Galectin-1可以增加卵巢癌細胞與細胞外基質間的粘附能力［11］。本實驗結果為Galectin-1在癌組織和炎癥組比較表達陽性率和陽性強度顯著增強，結果有統計學意義;CIN組間表達陽性率和陽性強度亦增強，在宮頸慢性炎癥、CIN、癌組織中表達呈陽性率和陽性強度依次增強的規律，這與上述文獻報道結果一致。提示Galectin-1參與了維族宮頸癌的發生發展過程，在維族宮頸癌的發展中可能起著重要作用。

LN是基膜中大分子非膠原糖蛋白，它有促進細胞的黏著、鋪展、有絲分裂、加速神經軸突生長及細胞移動，并誘導細胞分化，還與形態發生及腫瘤轉移有關等多種生物學作用。LN促進甲狀腺癌、前列腺癌細胞的增殖、分化，并作為侵襲抑制因素，在結腸腺瘤、卵巢癌及乳腺癌的進展中發揮作用［12］。本實驗顯示炎癥組中LN陽性表達明顯，宮頸癌組陽性表達減弱，兩組表達相比有統計學意義。CINⅡ-Ⅲ組與CINⅠ組比較LN表達減弱，結果有統計學意義。LN在慢性宮頸炎組、CIN組、宮頸癌組中的陽性強度依次減弱，說明從正常宮頸組織→CIN→宮頸癌的轉化過程中，LN發揮了重要作用。

研究發現由于同β-半乳糖苷的親和性，Galectin-l可首先與糖復合物結合。在自然產生的糖復合物中，LN是被公認的Galectin-1的天然配體。本實驗結果顯示宮頸慢性炎癥組、CIN組、宮頸癌組中Galectin-1與LN的表達呈負相關(r=0.482，P＜0.05)。提示二者在維族宮頸癌的發生發展中協同發揮作用，但具體機制有待于進一步研究。

綜上所述，Galectin-l與LN均參與維族宮頸癌發生發展的過程，可作為判斷維族宮頸癌發生發展的良好指標。但目前Galectin-l和LN與維族宮頸癌相互作用的研究幾乎沒有，其相關分子生物學機制尚未完全揭示，有待進一步研究，為其臨床診治提供新的靶點。

［1］ 古麗娜·庫爾班，阿依努爾·買買提，古扎麗努爾·阿不力孜.人類乳頭瘤病毒及其亞型在新疆南部地區維吾爾族婦女宮頸癌組織中的分布．腫瘤，2002，14(2):405-408．

［2］ Isabelle Camby2，3，Marie Le Mercier2，Florence Lefranc2，4 galectin-1:a small protein with major functions．Glycobiologyvol.16 no.11 pp.137R-157R，2006．

［3］ Vitolo D，Ciocci L，Deriu G，et al.Laminin alpha2 Chain-Positive Vessels and Epidermal Growth Factor in Lung Nearoendocrine Carcinoma:A Model of a Novel Cooperative Role of Laminin-2 and Epidermal Growth Factor in Vessel Neoplastic Invasion and Metastasis．Am J Pathol，2006，168(3):1991-1003．

［4］ Chiang WF，Liu SY，Fang LY，et al.Overexpression 0f gahctin-1 at the tumor invasion front is associated with poor prognosis in earlystage oral squamous cell carcinoma.Oral Oncol，2008，44(4):325-334．

［5］ Jung TY，Jung S，Ryu HH，et al.Role of galectin-1 in migratiotn and invasion of human glioblastoma multiforme cell lines.J Neurosurg，2008，109(2):273-284．

［6］ Le Mercier M，Lefrance F，Mijatovic T，et al.Evidence 0f galectin-1 involvement in glioma chemoresistance.Toxicol Appl Pharmacol，2008，229(2):172-183．

［7］ Oda O，Ortiz-Zapater E，Martinez-Bosch N，et al.Galectin-1 is a novel functional receptor for tissue plasminogen activator in pancreaticcancer. Gastroenterology，2009，136(4):1379-1390，e1371-1375．

［8］ Saussez S，Glinoer D，Chantrain G，et al.Serum galectin-1 and galec tin-3 levels in benign and malignant nodular thyroid disease.Thyroid，2008，18(7):705-712．

［9］ Spano D，Russo R，Di Maso V，et al.Galectin-1 and its involvement in hepatocellular carcinoma aggressiveness.Mol Med，2010，16(3-4):102-115．

［10］ Paz A，Haklai R，Klong Y，et al.Galectin-1 binds oncogenic HRas to mediate Ras membrane anchorage and cell transformation．Oncogene 2001，20(51):7486-7493．

［11］ Salani R，Neuberger I，Kurman IJ，et al.Expression of extracellular martrics proteins in ovarian serous tumors．Int J GyneCol Pathol，2007，26(2):141-146．

［12］ Laurich C，Wheeler MA，lida J，et al.Hyaluronan mediates adhesion 0f metastatic colon carcinoma cells．J Surg Ros，2004，122(1):70-74．