米托蒽醌長循環脂質體的制備及特性

王翠艷 李占山 張錦 王林

(河北聯合大學附屬醫院藥劑科，063000)

米托蒽醌長循環脂質體的制備及特性

王翠艷 李占山 張錦 王林

(河北聯合大學附屬醫院藥劑科，063000)

目的 通過對米托蒽醌長循環脂質體的制備，達到一種高效的抗癌治療作用。方法 采用逆相蒸發法以DSPC DSPE-34HCSI膽固醇為原料，制備了米托蒽醌空間穩定多相脂質體。并對其粒徑、分布、載藥量、包封率及在小鼠體內分布進行了測定。結果 米托蒽醌長循環脂質體在體內循環時間延長，肝、肺臟分布增高。結論 對增強其抗癌效果和降低毒副作用具有一定意義。

米托蒽醌；逆相蒸發法；長循環脂質體

訊作者：李占山

米托蒽醌(mitoxantrone，DHAQ)是合成的蒽環類抗癌藥，臨床及基礎研究證明，米托蒽醌對白血病、乳腺癌、何杰金氏病和原發性肝癌有較好的療效。但仍有較為嚴重的骨髓抑制、胃腸道反應和心臟毒性。目前臨床使用為米托蒽醌的粉針劑型。本文通過國內外研究較多的長循環脂質體技術，采用逆相蒸發法制備了米托蒽醌長循環脂質體，目的是為了研究更好的新劑型，進一步提高米托蒽醌的抗癌效果和降低全身毒副作用。

1 儀器與試藥

S-450型電子掃描顯微鏡；日本島津UV-3000型分光光度計；NICOMP-370型particle sizing system；JP-3305 Sintilation Counter，81-2型恒溫磁力攪拌器；L8-80M超速低溫離心機；SHZ-88-1型臺式水浴恒溫振蕩器。昆明種小鼠，雌雄各半，由河北醫科大學實驗動物中心提供。米托蒽醌質量符合部頒標準，水為重蒸餾水，試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 米托蒽醌長循環脂質體的制備 采用逆相蒸發法制備[1]，用3只小試管分別精密稱取6.6mgDSPC，3.3mgCH和2.0mgDSPE34-HCSI加入振蕩器中，再加入CHCL600μL和600μLdisopropylether進行超聲振蕩使藥物充分溶解，然后加入Tris緩沖液(pH8.0)600μL進行超聲乳化15min，60℃水浴中氮氣流揮干有機溶媒，獲得乳白色混懸液，再加入緩沖液200μL，用NICOMP-370型particle sizing system經過2張重疊的200 nm polycarbonate filters壓濾10次，即得。

2.2 米托蒽醌長循環脂質體的粒徑及分布 采用Volume-weighted Gaussian Distribution Analysis測定米托蒽醌長循環脂質體的粒徑及其分布[2-3]，結果表明最大粒徑為199nm，最小粒徑為83nm，平均粒徑為167.8nm(CV＝0.320)。

2.3 米托蒽醌長循環脂質體的載藥性能 根據文獻[4]可知，米托蒽醌在610 nm處有較強的吸收峰，而其他輔料在此波長并無吸收峰存在，所以采用分光光度法測定包封率和載藥量[5]。從而得到標準曲線方程為：A＝0.0073＋0.4246C(C＝mg/100mL)r＝0.999 7。用空白長循環脂質體加入米托蒽醌，再加入乙酸乙酯進行溶解，溶解后分別測定高、中、低3個濃度的回收率，算出平均值為99.32%。樣品測定，精密稱取米托蒽醌長循環脂質體，加入定量生理鹽水溶解后，超速低溫離心，分離出上清液，再同樣洗滌兩次后，合并兩次的上清液，在λ＝610 nm處進行其吸收度的測定，根據測定結果計算出包封率，結果(表1)。

2.4 米托蒽醌長循環脂質體在荷瘤小白鼠體內的分布取colon26腫瘤細胞3次轉代培養液(4×105)注入小白鼠背部的皮下組織，等待腫瘤長到直徑約0.5cm左右時，即可用作組織器官分布及腫瘤靶向性的測定。采用液體閃爍記數技術測定米托蒽醌長循環脂質體在動物體內的含量[6]及組織器官分布[7]。即取3H-inulin33μL，加入到600μL磷酸鹽緩沖溶液中，米托蒽醌長循環脂質體的制備過程同前。取colon26荷瘤小白鼠12只，于試驗前12h內禁食，每6只分成一組，共分二組，通過頸靜脈注射包封3H-inulin的米托蒽醌長循環脂質體100μL，分別在2h和6h經心臟穿刺抽血100μL(肝素抗凝)，然后斷頸處死這些動物，剖取它們的組織器官，精取定量，加入Soluble組織溶解液1mL，進行研碎、超聲溶解乳化后，再加入30%過氧化氫300μL進行脫色。加入Atomlight閃爍測定液10mL，充分振蕩、搖勻。于JP-3305 Sintilation Counter自動計數，然后計算單位重量DPM百分率。結果(圖1)。

表1 米托蒽醌長循環脂質體的包封率

圖1 米托蒽醌長循環脂質體在動物體內的分布(±s，n＝6)

3 討論

研究證明，表面含有聚乙二醇類脂衍生物(如PEG-DSPE)的第二代脂質體能夠顯著延長它在體循環中的駐留時間，并且能夠增加在靶部位的吸收，稱為長循環脂質體(long circulating liposome)。此外，它與特異性抗體結合后能在體內特異性地與靶部位相結合而發揮更好的治療作用，從而實現體內抗體介導靶向，即所謂的主動靶向[8]。本實驗采用逆相蒸發法，用DSPC、PEG-DSPE、CH制成米托蒽醌長循環脂質體，結果表明米托蒽醌長循環脂質體具有良好的包封率，在動物體內循環時間長，肝臟、肺臟分布率增高等優點，為進一步研究米托蒽醌長循環脂質體的抗癌效果奠定基礎。

[1]Schder A，Huwyler J.Drug transport to brain with targeted liposomes[J].Neuro Rx，2005，2(1)：99-107.

[2]Kim NH，Park HM，Chung SY，et al.Immunoliposomes carrying plasmid DNA：preparation and characterization[J].Arch Pharm，Res，2004，27(12)：1263.

[3]Zhang Y，Calon F，Zhu C，et al.Intravenous nonviral gene therapy causes normalization ofstriataltyrosine hydroxylase and reversal of motor impairment in experimental parkinsonism[J].Hum Gene Ther，2003，14(1)：1-12.

[4]張志榮，廖工鐵.米托蒽醌聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒的研究[J].藥學學報，1994，29(7)：544.

[5]Tsutomu Y，Kazuo M，Motoharu I，et al.Prolongation of Liposome Circulation Time by Various Drivatives of Polyethyleneglycols[J].Biol Pharm Bull，1996，19(10)：1347.

[6]Check E.Gene-therapy trials to restart following cancer risk review[J].Nature，2005，434(7030)：127.

[7]Zhao H，Wang R，Wang F，et al.Preparation of brain targeted immunoliposomes[J].Acta Pharm Sin，2009，44(11)：1285-129.

[8]Naoto Ok，Yoshihiro T，Chieko K，et al.Liposomal Arg-Gly-Asp analogs effectively inhibit metastic B16 melanoma colonization in murine lungs[J].Life sciences，1996，58(24)：2263.

1005-619X(2013)04-0363-02

2013-03-23)