奶牛隱性乳房炎診斷方法的對比試驗

文 / 周慶民 馮萬宇 侯美如 徐 馨 秦 博 黃 健

（黑龍江省獸醫科學研究所）

奶牛隱性乳房炎是奶牛生產中最常見、最多發的疾病之一，給牧場帶來的經濟損失巨大。奶牛發生隱性乳房炎時，從外觀上不能診斷，但乳汁中體細胞數量增多，因此，檢測牛乳中的體細胞數是判斷奶牛隱性乳房炎發生的主要依據。本試驗分別采用凝乳試驗反應法和體細胞自動計數儀檢測法對牛乳體細胞數量進行檢測，并以體細胞自動計數儀檢測的牛乳體細胞數為基準，用凝乳試驗反應法檢測的牛乳體細胞數與其對比，確定凝乳試驗反應法檢測牛乳體細胞數的準確性。

1 材料與方法

1.1 試驗牛只

黑龍江省齊齊哈爾市郊區一大型奶牛場，選擇496 頭無乳房炎臨床癥狀的中國荷斯坦泌乳牛，年齡、胎次、體重、泌乳月、產奶量等不限，時間為2010年8月23日。

1.2 診斷液及體細胞自動計數儀

凝乳試驗反應法診斷液由本研究室研制。體細胞自動計數儀為FossMatic 5000。

1.3 日糧與飼養管理

一切按原生產管理方法和飼養方式進行。

1.4 試驗設計與方法

取每頭牛的混合奶樣，同時用凝乳試驗反應法和體細胞自動計數儀進行檢測，然后統計、對比檢測結果。

1.4.1 奶樣的采集

擦洗乳房后，每個乳頭棄去頭二把奶，然后各擠出5 mL奶，混合均勻，每頭牛的奶樣為20 mL，檢測之前低溫保存。

1.4.2 凝乳試驗反應法

取混合奶樣2 mL放入檢驗盤中，加入2 mL診斷液（用定量加液器或刻度吸管），輕輕旋轉檢驗盤，隨著搖動進行判定（在奶與診斷液混合10～25 s內判定），記錄判定結果。

判定標準如下：“－”，混合物呈液狀，杯底無沉淀物可見；“±”，混合物呈液狀，杯底可出現微量沉淀，繼續搖晃即消失。“+”，杯底出現少量粘性沉淀，但不成膠狀，流動性大，搖動時，沉淀物散布于杯底，并有一定的粘附性。“++”，杯底出現較多粘稠沉淀，呈膠狀，傾斜檢驗杯時，沉淀物有明顯粘附于杯底面，并難以流動，旋轉檢驗盤時，膠狀物有聚中心傾向。“+++”，混合物幾乎完全形成膠狀物，并粘附于杯底、旋轉檢驗盤時難以散開。“++++”，混合物立即呈膠狀物，牛奶尚未與診斷液完全混合就已凝成膠狀，牛奶出現夾心現象。

1.4.3 體細胞自動計數儀檢測法

按照FossMatic 5000體細胞自動計數儀檢測方法分別對每份奶樣進行體細胞數檢測，記錄檢測結果。

2 結果與分析

2.1 FossMatic 5000檢測情況

從表1可以看出，在檢測的496 頭奶牛中，體細胞數在50 萬個/mL以上的有167 頭，占33.67%。

2.2 凝乳試驗反應法檢測情況

從表2可以看出，在檢測的496頭奶牛中，體細胞數在“+”以上的176 頭，占35.48%。

2.3 凝乳試驗反應法檢測與FossMatic 5000檢測結果的比較

從表3可以看出，在FossMatic 5000檢測體細胞數0～49 萬個/mL的329 頭奶牛中，凝乳試驗反應法檢測“-”或“±”的奶牛為317 頭，相符率為96.35%；FossMatic 5000檢測體細胞數在50 萬個/mL以上的167 頭奶牛中，凝乳試驗反應法檢測一個“+”以上的奶牛為161 頭，相符率為96.41%。

從表4可以看出，體細胞數在29 萬個/mL以上，凝乳試驗無反應，可判斷為“-”；體細胞數在30 萬～49 萬個/mL，凝乳試驗略有變化，可判斷為“±”；體細胞數在50 萬～79 萬個/mL，凝乳試驗反應輕微，反應緩慢，可判斷為“+”；體細胞數在80 萬～149 萬個/mL，凝乳試驗反應明顯，反應速度較快，可判斷為“++”；體細胞數在150 萬～499 萬個/mL，凝乳試驗反應較重，反應速度快，可判斷為“+++”；體細胞數在500 萬個/mL以上，凝乳試驗反應嚴重，反應瞬間完成，可判斷為“++++”。

表1 FossMatic 5000檢測牛乳體細胞數情況

表2 凝乳試驗反應法檢測牛乳體細胞數情況

表3 凝乳試驗反應法與FossMatic 5000檢測結果對比

3 討論與結論

3.1 牛奶中體細胞的主要成分是白細胞，健康乳腺奶中不同類型的體細胞百分比不同，其中巨噬細胞占60%，淋巴細胞占25%，嗜中性或多型核嗜中性白細胞占15%，國際上通常用每毫升奶中體細胞數（SCC/mL）來表示。奶牛的免疫系統通過釋放中性粒細胞吞噬和破壞細菌，幫助修復由于感染而受損的乳腺分泌組織，乳房感染發炎后，大量白細胞進入乳腺，部分上皮細胞脫落，使乳汁中體細胞數顯著升高，因此，在被感染的乳腺中體細胞的數量增多。本次試驗中隨著乳中體細胞數量的增加，凝乳試驗反應程度增強，表明凝乳試驗判斷隱性乳房炎的可靠性、準確性和可行性。

3.2 正常情況下，牛奶中含體細胞數為2 萬～20 萬個/mL，國際上將每毫升50 萬個體細胞數定為乳房炎的基準。根據本試驗結果，采用FossMatic 5000檢測法，得到的隱性乳房炎診斷率是33.67%，凝乳試驗反應法診斷率是35.48 %，兩種方法診斷率接近，差異不顯著，而且體細胞數量的變化與凝乳試驗反應法的奶樣變化程度基本相符，都能準確地反映出奶牛隱性乳房炎的發病率。其數據的差異可能是凝乳試驗反應法存在眼觀判斷誤差造成的。

3.3 以FossMatic 5000檢測的體細胞數為基準，凝乳試驗反應法隱性乳房炎陰性診斷相符率為96.35%，隱性乳房炎陽性診斷相符率為96.41%，由此可以確定凝乳試驗反應法診斷準確率在96%以上。