海南野生靈芝培養基配方優化

陳 友 ，胡佳娟 ，陳忠蔭，陳勇敢

(1 瓊州學院生物科學與技術學院，海南 三亞 572022;2 三亞市第二中學，海南 三亞 572000)

海南是我國野生靈芝資源最非富的分布地［3］，在野生靈芝資源的利用中占據著舉足輕重的地位，而野生靈芝的馴化研究是資源利用中不可或缺的一環.因此，選擇兩種尖峰嶺野生靈芝，黃邊靈芝(Ganoderma luteomarhinatum)和咖啡網孢芝(Humphreya coffeatum)作為材料，以瓊州學院栽培靈芝培養基為基礎，對其一級、二級、三級種的培養基配方進行優化.

1 材料與方法

1.1 實驗材料 供試材料是兩株生長于海南省尖峰嶺地區不同原生境的野生靈芝.實驗將黃邊靈芝(Ganoderma luteomarhinatum)編號4-3，將咖啡網孢芝(Humphreya coffeatum)4-5，文中都將以編號表示.

1.2 實驗方法

1.2.1 一級種(又稱母種)培養 按照實驗要求準備該實驗所需材料.具體配方見表1.其中1/2MS、1/4MS 和1/10MS 培養基是分別將標準MS 培養基稀釋至2 倍、4 倍和10 倍后加入培養基中.

首先配制培養基:按表1 配方稱量PDA 各原料的1/10，加水、溶解、定溶、滅菌、分平板，其次接種:最后對生長速度進行測量計算，通過數據的相關統計分析，確定兩種靈芝各自最佳的生長配方.最后以最佳者為一級種接種到二級培養基上進行培養.

1.2.2 二級種的培養 按照實驗要求做好前期準備，根據表1 的配方配制好所需培養基(Y1004、Y1005、Y1006、Y1008).裝袋、滅菌，待溫度降至室溫后接種.然后對生長速度進行測量計算:將培養瓶置于25.C 的培養房內培養并適時記錄菌絲的生長高度.長滿后，分別以時間、高度作為依據計算各靈芝種在不同培養基下的生長速度，分析、比較，取其最佳者選之.最后，以最佳者菌種為二級種接種到三級培養基.

1.2.3 靈芝三級種的制種與培養 三級種的步驟基本同二級種，培養基配方編號分別為Y3101、Y3102，具體培養基配方詳見表1，本次采用袋裝培養法，三級種接種于育種袋內.

2 結果與分析

2.1 不同培養基對靈芝一級種生長的影響 由表2 可知，菌種編號為4-3 的靈芝其一級種在培養基PDA+1/4MS 上的生長速度最佳，即PDA+1/4MS 為4-3 一級種最優培養基配方，而編號4-5 中培養基PDA+1/2MS 和PDA+1/4MS 上的菌絲生都很好.綜合4-3 和4-5 的一級種菌絲生長情況，可以得出配方為PDA+1/4MS 培養基為一級種的最優培養基配方.

表1 靈芝一、二、三的培養基配方

表2 不同培養基對靈芝一級種生長的影響

圖1 不同培養基中靈芝一級種菌絲生長狀況

2.2 不同二級種培養基對所選靈芝生長的影響 由表3 可知，菌種編號為4-3、4-5 的靈芝其二級種均在培養基Y1005 上具有最佳生長速度，且相對于其他培養基它所產生的菌絲密度大、長勢佳.綜合比較菌絲密度、長勢.Y1005 為該種的二級種最佳培養基配方.所以，均以Y1005 培養基上的菌落作為菌種接種到三級種培養基上.

表3 不同培養基對靈芝二級種生長的影響

圖2 不同培養基中靈芝二級種菌絲生長情況

2.3 不同三級種培養基對所選靈芝生長的影響 由表4 可知，菌種編號為4-3、4-5 的靈芝其三級種均在培養基Y3102 上具有最佳生長速度，參照圖3，可見其菌絲濃密，長勢良好;在培養基Y3101 上前期長勢良好，后出現生長停滯現象，黃化現象明顯.所以三級種的最優培養基配方為Y3102.

表4 不同培養基對靈芝二級種生長的影響

圖3 不同培養基中靈芝二級種菌絲生長情況

2.4 結果分析

2.4.1 根據以上三點結果顯示，一級種最優培養基為PDA+1/4MS(具體配方見論文中)，其4-3 的菌絲生長速度為1.7036 mm/d、4-5 的菌絲的生長速度為2.5298mm/d.篩選出二級種的最優培養基為Y1005(具體配方見論文中)，其4-3 的菌絲生長速度為4.3750 mm/d、4-5 的菌絲生長度為4.0000 mm/d.篩選出三級種的最優培養基為Y3102(具體配方見論文中)，其4-3 的菌絲生長4.3478 mm/d、4-5 的菌絲生長速度為4.0293 mm/d，

2.4.2 實驗結果表明，菌種編號為4-3 和4-5 的靈芝其一級種在培養基PDA+1/4MS 上的生長速度都很好，此配方既適合不同的野生種，因此，這種配方可以作為其它野生靈芝一級種的首選配方.而根據編號為4-5 靈芝其一級種在培養基PDA +1/2MS 上具有最佳生長速度，這即說明不同種質的野生靈芝一級種的配方可能還不相同，可以在此種配方的基礎下再進行優化.

2.4.3 所選兩種靈芝均在Y1005 培養基上的具有最佳長勢，綜合考慮其經濟成本，Y1005 在實際生產中可采納應用.

2.4.4 主料中添加麥麩等含氮量高的輔料會明顯提高靈芝產量，且麥麩添加量為20 %時產量最高［7］.4-3、4-5 靈芝均在Y3102 黃豆粒培養基中生長速度快、菌絲濃密，這是由于黃豆粒較松散，菌絲生長速度快，故滿瓶時間短、長勢佳.

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