環介導等溫擴增技術及其在病原微生物檢測中的應用

肖維威，周琳華，鄭文嶺，馬文麗

(南方醫科大學基因工程研究所，廣東廣州510515)

隨著生物醫藥科學的迅猛發展，檢測技術越來越受到重視。核酸擴增是生命科學中最重要的檢測手段之一，目前已廣泛應用于臨床醫學診斷和傳染病病原體檢測等領域。核酸擴增技術主要分為以常規PCR為基礎的變溫擴增技術以及恒溫擴增技術兩大類。常規PCR包括單一PCR、多重PCR、巢式PCR和實時熒光定量PCR等，恒溫擴增技術包括核酸序列依賴擴增(nucleic acid sequence-based amplification，NABSA)、滾環DNA擴增(rolling circle DNA amplification，RCA)、指數式擴增反應(exponential amplification reaction，EXPAR)、連接酶鏈擴增反應(ligase chain reaction，LCR)、鏈置換擴增反應(strand displacement amplification，SDA)和環介導等溫擴增(loop mediated isothermal amplification，LAMP)技術等。因PCR的變溫過程使其對儀器精密度要求較高，操作時間相對較長，從而導致PCR無法推廣至基層。因此，恒溫擴增成為核酸擴增技術的一個研究熱點，環介導等溫擴增技術就是其中一種。

環介導等溫擴增技術又稱為環介導恒溫擴增技術，是由Notomi等［1］于2000年開發的一種新穎的恒溫核酸擴增方法。憑借其高效、快速、特異、低廉、易檢測、易操作等特點，從問世以來，短短十幾年，即在各種病原體、病毒快速檢測、動植物檢疫等方面嶄露頭角，尤其在傳染性疾病診斷中發揮了極大作用。隨著該技術體系的完善與發展，其在分子檢測領域的應用也必將越來越廣泛與深入。

1 LAMP技術的原理

1.1 LAMP的技術原理

LAMP技術針對靶序列的6個特異性區域設計2對引物，利用一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在等溫條件(65℃左右)保溫30～60 min，即可擴增出109拷貝靶序列，并且伴有肉眼可見的副產物白色焦磷酸鎂沉淀產生。……