清熱藥體外抗菌作用的文獻(xiàn)再評價

張 涓，張晶晶，程江雪，張恩戶

(陜西中醫(yī)學(xué)院藥理教研室，陜西咸陽 712046)

近年來，國內(nèi)外對大量的中草藥進(jìn)行了抑菌作用的篩選，在實驗和臨床研究中都有很大進(jìn)展。但研究較多的仍是真菌。而對一些藥敏性低的耐藥細(xì)菌，目前多應(yīng)用抗生素，而中藥方面的研究較少。全國高等中醫(yī)院校教材《中藥藥理學(xué)》中清熱藥一章記載了黃連、黃芩、苦參、青蒿等常用藥，以清熱解毒藥和清熱燥濕藥有抗菌作用的藥物居多［1］。本文對其中有體外抗菌作用的藥物進(jìn)行總結(jié)，通過查閱、歸納、整理有關(guān)文獻(xiàn)，根據(jù)藥物藥理作用的評價原則和中藥抗菌作用的評定標(biāo)準(zhǔn)，對各味藥的抗菌作用進(jìn)行文獻(xiàn)再評價。

1 資料與方法

1.1 資料

以全國高等中醫(yī)院校教材《中藥藥理學(xué)》中清熱藥章節(jié)記載有抗菌作用的藥物為對象，查閱有關(guān)實驗性研究文獻(xiàn)，以讀秀duxiu.com學(xué)術(shù)搜索、中國知網(wǎng) http://www.cnki.net文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(1994年-)、萬方 WANFANG DATA數(shù)據(jù)庫為主(1998年-)，其他數(shù)據(jù)庫為輔進(jìn)行檢索、查閱。以“抗菌作用”或“抑菌作用”為關(guān)鍵詞檢索，查閱1994年至2012年間國內(nèi)公開發(fā)表的相關(guān)清熱藥單味中藥(不包括提取物或有效成分，以傳統(tǒng)劑型水煎劑為主)體外抗菌作用的實驗研究期刊文獻(xiàn)。

1.2 方法

1.2.1 試驗選用細(xì)菌 體外抗菌試驗初篩選用的臨床常見細(xì)菌約分為以下幾種:①需氧菌:a.革蘭氏陽性細(xì)菌:金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、鏈球菌、糞球菌等。b.革蘭氏陰性菌:大腸桿菌、變形桿菌、銅綠假單胞菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、淋球菌、腦膜炎球菌等。②真菌:白色念珠菌。

1.2.2 中藥抗菌作用的評價方法 抗菌試驗有體外法和體內(nèi)法兩種。一般先進(jìn)行體外實驗，有陽性結(jié)果再進(jìn)行體內(nèi)試驗。體外抗菌試驗觀察藥物抗病原體作用的敏感譜及最低有效濃度，優(yōu)點(diǎn)是:方法簡便，用藥量少，實驗條件容易控制，需時短，藥物也可以定量，用于測定藥物對細(xì)菌固有的敏感性。

最常用的分為稀釋法和固體擴(kuò)散法兩大類。稀釋法有試管連續(xù)稀釋法、瓊脂稀釋法及微孔稀釋法。試管法即連續(xù)稀釋試驗(2倍稀釋法):實驗在試管內(nèi)進(jìn)行，用肉湯將中藥制劑稀釋成各種濃度，然后在各管內(nèi)接種等量的供試菌，置37℃孵箱培養(yǎng)18、24 h，觀察各管內(nèi)細(xì)菌生長情況，以判斷該藥的抑菌強(qiáng)度;瓊脂稀釋法是將不同劑量的抗菌藥物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH瓊脂中，制成含不同遞減濃度抗菌藥物的平板，接種受試菌，孵育后觀察細(xì)菌生長情況，以抑制細(xì)菌生長的瓊脂平板所含最低藥物濃度為MIC。瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法均可測定最小抑菌濃度(MIC)，觀察藥物對細(xì)菌生長繁殖的影響，以MIC判斷藥物抗菌作用的強(qiáng)弱?？咕幬锏捏w外藥敏實驗結(jié)果影響因素較多，測定MIC值是探討抗菌藥物的敏感性和決定應(yīng)用方案的有效方法。測定最低殺菌濃度(MBC)方法是，利用測定最低抑菌濃度(MIC)以上各試驗管培養(yǎng)物，分別吸取0.1 mL，移種在不含藥物的瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)孵育過夜，活菌計數(shù)法計數(shù)菌落，其菌落數(shù)少于5個的藥物濃度即為MBC。測定MIC和MBC一般認(rèn)為是定量抑菌實驗方法。

擴(kuò)散法是將抗菌藥物加至接種試驗菌的平板表面，抗菌藥物在瓊脂膠內(nèi)向四周自由擴(kuò)散，其濃度隨擴(kuò)散距離增大而降低，在藥物一定的擴(kuò)散距離內(nèi)，由于藥物的抗菌效應(yīng)，試驗菌不能生長，此無菌生長的范圍稱為抑菌圈，抑菌圈直徑大小與藥物抑菌濃度成正比。以抑菌圈的大小等判斷藥物抗菌作用的強(qiáng)弱。具體方法有紙片法、瓊脂平皿打孔(打洞)法、管碟法或杯管法(牛津杯法、鋼管法)、生物檢定法、泡沫海綿栓子法、挖溝法等方法。以及活菌計數(shù)法、直接接觸法(噻唑蘭MTT比色法)、微量量熱法等其它的藥物敏感試驗方法。擴(kuò)散法一般認(rèn)為是定性的抑菌實驗方法。

1.2.3 文獻(xiàn)整理 制作清熱藥體外抗菌作用文獻(xiàn)再評價信息表，內(nèi)容包括供試藥制備、實驗方法、實驗結(jié)果與結(jié)論、文獻(xiàn)題目、作者及工作單位，刊物與發(fā)表年代等信息。研讀文獻(xiàn)，摘錄相關(guān)信息并填入表格，進(jìn)行分析，文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)為:相關(guān)清熱藥單味中藥(不包括提取物或有效成分)體外抗菌作用實驗研究的文獻(xiàn)為有效文獻(xiàn)納入研究，其他為無效文獻(xiàn)排除，結(jié)果見表1。

1.2.4 清熱藥抗菌作用文獻(xiàn)再評價的評定標(biāo)準(zhǔn)抗菌作用實驗結(jié)果的判定指標(biāo)分別有抑菌圈直徑、最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。評價中藥體外抑菌作用的方法較多，而且一種抑菌方法只能反映感染發(fā)生的某一側(cè)面，抗菌作用易受到多種因素的干擾，特別是中草藥粗提物中雜質(zhì)較多，除了可能存在特異的抗菌成分外，鞣質(zhì)、藥液的pH、滲透壓等可通過非特異性理化等因素抑制細(xì)菌的生長，因而體外篩選陽性的藥物，還必須通過動物體內(nèi)實驗治療加以肯定。所以中藥藥理作用的評價應(yīng)符合綜合評價和重復(fù)性等原則。根據(jù)上述原則，確定評定標(biāo)準(zhǔn)為:應(yīng)采用2種以上(包括2種)不同類型的體外抑菌試驗，文獻(xiàn)實驗結(jié)果對研究的細(xì)菌確有抗菌作用，每種實驗方法應(yīng)進(jìn)行不少于3次的重復(fù)性實驗。

2 結(jié)果

從表1可看出黃連、黃芩、金銀花、連翹均采用2種以上(包括2種)體外抗菌實驗方法，每種實驗方法重復(fù)3次以上(包括3次)，且黃連、黃芩、金銀花、連翹、穿心蓮、夏枯草的相關(guān)文獻(xiàn)超過 5篇［2-38］。根據(jù)上述制定的藥抗菌作用文獻(xiàn)再評價評定標(biāo)準(zhǔn)，黃連、黃芩、金銀花、連翹這些中藥體外抗菌作用確切;穿心蓮、夏枯草雖然確有抗菌作用的研究文獻(xiàn)超過5篇，但穿心蓮只有紙片法重復(fù)3次，其它方法重復(fù)沒有達(dá)到3次。夏枯草只有瓊脂稀釋法重復(fù)3次，其它方法重復(fù)沒有達(dá)到3次。所以穿心蓮、夏枯草體外抗菌作用實驗依據(jù)不足。板藍(lán)根、苦參、知母、青蒿、牡丹皮相關(guān)文獻(xiàn)太少，或體外抗菌作 用不明顯，尚需進(jìn)一步系統(tǒng)研究［39-49］。

表1 清熱藥體外抗菌作用實驗研究文獻(xiàn)一覽表

3 討論

在清熱藥抗菌作用的實驗中采用的方法多為體外抗菌實驗法，如試管倍比稀釋法，瓊脂擴(kuò)散法等。實驗方法比較單一，有些文獻(xiàn)憑一兩種實驗就下結(jié)論，缺乏重復(fù)性的研究。清熱藥是一類清瀉里熱為主要作用的藥物，主要用于高熱、熱痢、癰腫瘡瘍以及陰虛內(nèi)熱等所呈現(xiàn)的各種里熱證候。清熱藥的抗菌作用以清熱解毒藥與清熱燥濕藥較為突出，部分清熱瀉火、涼血藥也有一定的抗菌作用。通過文獻(xiàn)查閱、整理和文獻(xiàn)再評價可以發(fā)現(xiàn)，黃連、黃芩、金銀花、連翹水煎劑具有明顯的體外抗菌作用，對革蘭陽性球菌、革蘭陰性桿菌和真菌均有較好的抑菌活性。對金黃色葡萄球菌、變形桿菌、肺炎球菌、大腸埃希菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、痢疾桿菌、鏈球菌、銅綠假單胞菌、枯草桿菌、白色念珠菌等均有不同程度抑制作用。此外黃連、黃芩對沙門氏菌、表皮葡萄球菌、淋球菌、腦膜炎球菌、腸球菌體外均有明顯抗菌作用。連翹對白色葡萄球菌、卡他球菌也有明顯抑菌作用。

綜上，可以看出憑借體外抗菌實驗來篩選清熱藥中具有抗菌作用的藥具有一定的局限性，因為每味中藥都有多種作用，在使用過程中往往是多種作用相互影響產(chǎn)生結(jié)果;如果要明確評價某一味藥的作用應(yīng)該建立相關(guān)多種體內(nèi)外實驗方法而不僅僅是套用固定的實驗?zāi)Ｊ?。對具有抗菌功效的中藥進(jìn)行抗菌作用評價時，要根據(jù)該藥主治病癥、細(xì)菌類型藥效學(xué)(PD)、藥動學(xué)(PK)以及二者相結(jié)合(PK/PD)等方面全面進(jìn)行綜合評價。

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