鹽酸文拉法辛殘留溶劑檢測方法的建立

袁 斌，王以武

(1.川北醫(yī)學(xué)院藥物研究所，川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，四川南充 637000;2.重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，重慶 400016)

鹽酸文拉法辛(venlafaxine hydrochloride)，化學(xué)名為(±)-1-［2-(二甲胺基)-1-(4-甲氧苯基)乙基］-環(huán)已醇鹽酸鹽，是由Wyeth-Ayerst公司開發(fā)的、具有抑制去甲腎上腺素重吸收和拮抗5-HT雙重作用機制的苯乙胺類抗抑郁藥，其主要藥理機制為抑制神經(jīng)突觸前膜對5-HT及NE的再攝取，增強人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)5-HT和NE神經(jīng)遞質(zhì)的活性，發(fā)揮抗抑郁作用［1-3］。目前其原料在合成過程中，使用了多種溶劑，包括ICH規(guī)定的一類、二類和三類溶劑［4-6］。中國藥典對殘留溶劑測定做了相關(guān)規(guī)定［7］。為了更好控制鹽酸文拉法辛藥物質(zhì)量，我們建立了氣相色譜法用于其6種殘留溶劑(乙醚、四氫呋喃、乙酸乙酯、甲醇、異丙醇、甲苯)檢測，方法簡單，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試劑

美國安捷倫6890氣相色譜儀，配置FID檢測器。鹽酸文拉法辛原料藥(重慶康樂制藥有限公司產(chǎn)品)，乙腈、甲醇(Scharlau Chemie S.A.)，乙醚(迪馬公司)，異丙醇、乙酸乙酯、甲苯(重慶川東化工有限公司)，四氫呋喃(成都金山化學(xué)試劑廠)，以上試劑均為分析純。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Inowax(30 m ×0.32 mm ×0.25 μm);檢測器:FID(氫火焰離子化檢測器)，汽化室溫度:150℃，檢測器溫度:250℃，進樣量:1 μL;柱溫:程序升溫:起始柱溫40℃ ，保持7.5 min后，以50℃/min的升溫速率升至120℃，保持3.5 min;載氣采用高純度 N2，流速 1.5 mL/min，分流比為 10∶1。

2.2 溶液配置

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液的配制 稱取乙腈0.252 8 g，精密稱定，置250 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，備用。

2.2.2 空白溶液的配制 精密移取純化水1.0 mL置10 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，混勻即得。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制 分別稱取乙醚，甲醇，異丙醇，乙酸乙酯，甲苯，四氫呋喃各0.508 1 g，0.498 7 g，0.500 8 g，0.515 2 g，0.203 9 g，0.207 7 g，置于同一個25 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，混勻。再精密量取該溶液5.0 mL置50 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，混勻即得標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 分別精密移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液及內(nèi)標(biāo)溶液各1.0 mL，純化水1.0 mL置同一10 mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，混勻，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2.5 供試品溶液的配制 取供試品約1.0 g，平行稱樣兩份，分別置10 mL容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)液和純化水各1.0 mL，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，混勻。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

單獨進空白溶液，證明該溶液對溶劑測試無干擾;單獨分別進樣每一個需測定的溶劑及內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)品，記錄色譜圖，確定各溶劑的出峰順序及保留時間;配制殘留溶劑測定的標(biāo)準(zhǔn)溶液(包含所有待測溶劑的混合溶液)，進樣并計算分離度以確認所有溶劑間無干擾。將標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到樣品溶液中測試，確認可能出現(xiàn)的雜質(zhì)對溶劑測定無干擾。

結(jié)果如圖1所示，所有相鄰溶劑峰的分離度均大于1.5，符合規(guī)定，確定所需測定的六種溶劑及內(nèi)標(biāo)溶劑均可以很好的分離，并且不會受到來自溶媒及可能出現(xiàn)的雜質(zhì)干擾。

2.4 檢測方法的驗證

2.4.1 線性關(guān)系考察 按確認的各個殘留溶劑的含量范圍，配制6個不同濃度的溶液，每個濃度進樣2次，記錄色譜圖，求出各濃度與其對應(yīng)的主峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積響應(yīng)比值的平均值，以二次回歸得到回歸方程及相關(guān)系數(shù)(表1)。

表1 回歸方程和線性范圍試驗結(jié)果

2.4.2 最小檢測限測試 配制各溶劑的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，逐級稀釋該溶液，注入色譜儀，記錄色譜圖，直到符合S/N=3的標(biāo)準(zhǔn)，計算各溶劑的最小檢測限。乙醚、四氫呋喃、酸乙酯、甲醇、異丙醇、甲苯的最小檢測限分別為 0.120 5、0.205 0、0.355 3、0.443 2、0.365 0、0.483 6 μg/mL。

2.4.3 最小定量限測試 配制各溶劑的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，逐級稀釋該溶液，注入色譜儀，記錄色譜圖，直到符合S/N=10的標(biāo)準(zhǔn)，計算各溶劑的最小定量限。乙醚、四氫呋喃、酸乙酯、甲醇、異丙醇、甲苯的最小檢測限分別為 0.401 6、0.683 2、1.184 4、1.477 5、1.216 5、1.612 0 μg/mL。

2.4.4 精密度測試 連續(xù)進樣標(biāo)準(zhǔn)溶液6次，重復(fù)進樣各溶劑峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。結(jié)果表明重復(fù)進樣各溶劑峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值的RSD小于4%，精密度良好(表2)。

表2 精密度試驗結(jié)果(n=6)

2.4.5 回收率試驗 第一步，配制待測溶劑的3個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，3個濃度分別為:最小定量限濃度點(低濃度)、樣品溶液通常被檢出的濃度點(中濃度)、標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度點(高濃度)。第二步，定量稱取樣品12份，9份樣品溶液中分別定量添加第一步中3個濃度的溶液，每個溶液加3份，制成準(zhǔn)確度驗證溶液。另外3份作為空白對照。第三步，每個濃度點平行測定2次。計算每個濃度點每個溶劑的平均含量。第四步，計算每個濃度點的加樣回收率，結(jié)果為97.6～102.7，如表3所示。

表3 6種溶劑回收率測定結(jié)果(n=3)

3 討論

進樣方式的確定和溶劑、內(nèi)標(biāo)的選擇:為消除基質(zhì)效應(yīng)對殘留溶劑測定準(zhǔn)確性與精密度的影響，應(yīng)首選內(nèi)標(biāo)法。N，N-二甲基甲酰胺為理想的溶劑，且對6種被測溶劑均無干擾，故選用N，N-二甲基甲酰胺為溶解介質(zhì)。乙腈溶液濃度穩(wěn)定持久，是良好內(nèi)標(biāo)物;色譜柱的選擇:在其他柱色譜系統(tǒng)下，7種組分中往往有3～4個組分因分子極性較為相似而使色譜行為差異不夠明顯，而選用Inowax色譜柱，則能達到中國藥典2010年版二部附錄ⅧP“殘留溶劑測定法”的相關(guān)要求;色譜條件的確定:測定時，柱溫的選擇是關(guān)鍵，采用程序升溫的方法可以改變峰形和出峰速度。我們最終選擇先在柱溫40℃維持7.5 min后，使低沸點組分流出，逐漸升至120℃ ，維持3.5 min，加快高沸點組分流出，取得滿意的分離效果［8-10］。

本文所建方法色譜性能良好，各項方法學(xué)指標(biāo)的驗證結(jié)果均達到中國藥典2010年版二部附錄ⅧP“殘留溶劑測定法”的有關(guān)要求，可用于控制鹽酸文拉法辛原料藥中可能存在的各種殘留溶劑。

［1］ 逢曉云，貢沁燕.文拉法辛的藥理學(xué)與臨床應(yīng)用［J］.中國新藥與臨床雜志，2000，19(5):342-344

［2］ Ellingrod VL，Perry PL.Venlafaxine:A heterocyclic antidepressant［J］.Am J Hosp Pharm，1994，51(24):3033-3046

［3］ Rudolph RL，F(xiàn)abre LF，F(xiàn)eighner JP，et al.A randomized，placebo-controlled，dose-response trial of venlafaxine hydrochloride in the treatment of major depression［J］.J Clin Psychiatry 1998，59(3):116-122

［4］ Basappa，KavithaCV，RangappaKS.Simpleandanefficientmethod for the synthesis of 1-［2-dimethylamino-1-(4-methoxy-phenyl)-ethyl］-cyclohexanol hydrochloride:(+/-)venlafaxine racemic mixtures［J］.Bioorq Med Chem Lett，2004，14(12):3279 – 3281

［5］ Thomas PJ，Chrisantha H.Derivatives of(+)-venlafaxine and methods of preparation and using the same:US，6342533［P］.2002-01-29

［6］ Qian YF ，Yu HP.Synthesis of Venlafaxine Hydrochloride［J］.Chin J of Pharmaceuticals，2006，37(6):373-374

［7］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版二部［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.附錄ⅧP

［8］ 程奇蕾，張德瑞，李慧義.鹽酸西替利嗪中殘留溶劑檢查方法的研究［J］.藥物分析雜志，2008，28(8):1355-1358

［9］ 朱玲玲，陸小平，孫海勝.氣相色譜法測定雷替曲塞中的6種殘留溶劑［J］.藥學(xué)與臨床研究，2007，15(5):360-363

［10］陳 悅，馮 婧.鹽酸丁咯地爾原料藥中殘留溶劑檢測方法的研究［J］.藥物分析雜志，2008，28(3):486-489