預處理對靜脈血抗環瓜氨酸肽抗體膠體金層析法檢測結果的影響

瞿國英（上海市濰坊社區衛生服務中心，上海 200122）

類風濕關節炎（RA）患者外周血中存在的抗環瓜氨酸多肽（CCP）抗體已列入2009年美國風濕病學會（ACR）和歐洲抗風濕病聯盟（EULAR）提出的RA分類標準和評分系統中［1-2］。抗CCP抗體檢測方法主要包括酶聯免疫吸附法（ELISA）、化學發光法（CIA）和膠體金免疫層析法（GICA）等。其中GICA檢測方法簡單、快速，可滿足抗CCP抗體即時檢驗的需求［3］。但GICA檢測通常采用原倍血清標本，檢測結果受實驗條件和標本處理的影響較大［4］。本文探討了不同采血管和標本放置時間對血清抗CCP抗體GICA檢測結果的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本衛生服務中心門診患者及體檢者178例，女95例、男83例，年齡18～76歲，平均43歲。

1.2 試劑 普通真空采血管和含促凝分離膠采血管（江蘇康健）；抗CCP抗體GICA及ELISA檢測試劑盒（上海科新）。

1.3 方法 于肘正中靜脈采血12mL，分別注入3支普通真空采血管和2支含促凝分離膠采血管各3mL，普通真空采血管標本室溫靜置2、4h后以全血標本或以3 000r／min離心5 min后血清標本，采用GICA法進行抗CCP抗體檢測。同時以普通真空采血管3 000r／min離心5min血清標本進行ELISA檢測。所有檢測步驟嚴格按試劑盒說明書要求操作。

1.4 統計學處理 使用SPSS17.0軟件進行數據分析；計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；顯著性檢驗水準為α＝0.05，P＜0.05為比較差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 標本靜置時間對檢測結果的影響 普通采血管標本靜置2h后，全血GICA檢測抗CCP抗體陽性率為14.0%（25／178），25例GICA檢測陽性標本，ELISA檢出陽性19例、陰性6例，153例GICA檢測陰性標本ELISA檢測均為陰性，2種方法檢測結果比較差異有統計學意義（P＜0.05）。25例GICA檢測陽性全血標本經離心后的血清標本GICA檢出陰性2例；靜置4h后，全血標本檢出陰性陽性5例，陽性率為11.2%（20／178例），與靜置2h全血標本檢測結果比較差異有統計學意義（P＜0.05）。靜置4h后，全血、血清標本檢測陽性率比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 不同采血管對檢測結果的影響 分離膠采血管標本靜置2h后，全血標本及血清標本血清標本GICA檢測陽性率均為11.2%（20／178），與相同靜置時間、相同類型標本檢測結果比較差異有統計學意義（P＜0.05）。靜置4h后普通采血管與分離膠采血管全血與血清標本檢測結果比較差異無統計學意義（P＞0.05）。靜置2h后普通采血管血清標本ELISA檢測陽性率為10.7%（19／178），與GICA法檢測結果比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同靜置時間及處理方式標本抗CCP抗體檢測陽性率［%（n）］

3 討 論

GICA檢測具有操作簡單、耗時短、特異、靈敏、無需輔助試劑和儀器、結果可長期保存等特點，是目前較為常用的免疫學檢測技術之一，特別適用于社區醫院、野外作業，尤其適用于急診檢驗和人群普查。

影響GICA檢測結果因素較多，試劑因素包括膠體金顆粒大小、膠體金標記抗體量、包被抗原濃度和硝酸纖維素膜的質量等，實驗操作因素包括反應溫度、判讀時間和加樣量等，除此之外，標本預處理對于檢測結果的影響也較大［5］。本研究顯示，靜脈血標本采集后靜置2h內檢測，易出現假陽性結果，其原因可能在于血液凝固不完全，存在大量纖維蛋白原，影響層析速度和均一性，抗原抗體出現非特異性結合而導致假陽性結果；在此時進行高速離心，并不能改善結果。延長標本靜置時間或使用含促凝分離膠采血管，可有效降低假陽性比例。本研究結果顯示，GICA和ELISA檢測結果符合率達99.4%。

抗CCP抗體GICA檢測試劑盒以其快速、準確等特點，已成為RA早期診斷的有力工具，并廣泛應用于基層醫療單位［6］。在使用過程中，應規范標本預處理、實驗操作和試劑儲存，避免因操作不當引起的實驗誤差。

［1］中華醫學會風濕病學分會.類風濕關節炎診斷及治療指南［J］.中華風濕病學雜志，2010，14（4）：265-270.

［2］唐福林.應規范類風濕關節炎的診斷與治療［J］.中華醫學雜志，2004，84（12）：971-973.

［3］穆銀玉，吳巧萍，鄔露丹.膠體金檢測抗環瓜氨酸肽抗體性能評價［J］.中國現代醫生，2011，32（1）：84-85.

［4］叢玉隆，張海鵬，任珍群.血液學檢驗分析前質量控制的重要因素-標本的采集及其控制［J］.中華檢驗醫學雜志，1998，21（1）：52-55.

［5］李永勤，楊瑞馥.以膜為固相載體的免疫膠體金快速試驗［J］.微生物學免疫學進展，2003，31（1）：74-78.

［6］張清，劉彧，徐滬濟.類風濕關節炎抗環瓜氨酸肽（CCP）抗體的快速篩查［D］.北京：全國第八屆中西醫結合風濕病學術會議，2010.