介入性熱灌注聯合瘤體注射熱碘油對兔VX2肝癌模型的療效研究

何偉華，獨建庫，張明德，鄒 洋，馬小桔

肝癌的聯合治療已成為臨床研究的熱點，近年來熱療在肝癌的治療中逐漸受到重視。本研究通過兔VX2肝癌模型，比較介入性聯合灌注熱碘油與常溫碘油的療效，旨在探討經皮穿刺瘤內注射聯合肝動脈灌注熱碘油的確切療效及安全性。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及癌株

7～8周齡純種新西蘭大白兔30只，體重2.5～2.8 kg，雌雄不限，由解放軍第150醫院動物實驗室提供。癌株種類為VX2鱗狀細胞癌，由解放軍150醫院中心實驗室提供；速眠新Ⅱ注射液2 ml/支。

1.2 兔VX2肝癌模型制備

取冰凍VX2腫瘤細胞懸液0.5 ml接種于兔右后肢外側肌肉群內，2周后肌肉內有一實質性包塊。將包塊從荷瘤兔肌肉群內取出，取腫瘤邊緣生長旺盛的魚肉樣組織數塊，切成大小約1 mm3的瘤塊備用，用速眠新Ⅱ注射液按0.3 ml/kg肌內注射，并用地西泮0.5 ml腹腔注射麻醉后，在彩色多普勒超聲（彩超）引導下用18 G針頭的注射器將瘤組織注入肝左葉內實質區。接種完成后，由動物實驗室專業人員飼養。2周后，彩超測量并記錄腫塊大小（圖1）。電鏡下可見兔肝內瘤體呈浸潤性生長，與肝實質邊界模糊，間質分界不清，結締組織較少，瘤巢邊緣分布著被浸潤的肝索結構；腫瘤細胞彌散排列，可見纖維間隔及豐富的新生毛細血管（圖2）。

圖1 兔VX2肝癌標本

圖2 兔VX2肝癌病理標本（HE，× 200）

1.3 方法

1.3.1 實驗分組 30只荷瘤兔隨機分為實驗組和對照組，每組15只。實驗組采用經肝動脈灌注聯合經皮穿刺瘤內注射60℃熱碘油，對照組經肝動脈灌注25℃常溫碘油。

1.3.2 治療方法 用速眠新Ⅱ按0.3 ml/kg經靜脈注射麻醉后，用固定板仰臥位固定荷瘤兔，腹股溝剪毛后，潔爾碘消毒，穿刺股動脈，在X線透視下依次進入4 F RH導管至腹腔動脈，繼而將2.7 F微導管超選擇至肝動脈，DSA造影可見肝左動脈供血的腫瘤染色影（圖3），實驗組灌注60℃碘化油2 ml栓塞瘤體后，瘤體內碘油沉積（圖4），3 d后在彩超引導下用18 G穿刺針行經皮穿刺瘤內注射60℃碘化油1 ml栓塞腫瘤（圖5）；對照組灌注25℃碘化油3 ml；術中觀察呼吸、心率等生命體征。

1.3.3 觀察指標 ① 彩超檢測腫瘤在治療前后的體積變化，計算生長率，即生長量 =治療后15 d的體積-治療前的體積。②觀察治療前及治療后5 d的血清丙氨酸轉氨酶（ALT）水平。

圖3 兔VX2肝癌肝動脈造影

圖4 熱碘油2 ml栓塞瘤體

圖5 經皮瘤體內注射熱碘油1 ml

1.4 統計處理

2 結果

2.1 腫瘤生長率及生存期

治療前兩組荷瘤兔體質量、腫瘤體積差異無統計學意義（P＞0.05）。治療后兩組生長率差異有統計學意義（P＜0.05，表1）。實驗組存活期與對照組相比差異有統計學意義（P＜0.05）。

表1 兩組治療前后腫瘤生長率（n=8，±s）

表1 兩組治療前后腫瘤生長率（n=8，±s）

a與對照組相比，P＜0.05

組別 治療前 治療后15 d實驗組 1565±3151054±463a 0.96±0.42a對照組 1568±3231275±4722.18±0.75腫瘤體積（mm3）生長率（%）

2.2 血清ALT水平

治療前兩組ALT水平差異無統計學意義（P＞0.05）。治療后5 d血清ALT水平均上升，組間差異無統計學意義（P＞0.05）；兩組肝功能有一定損傷，均表現為一過性，見表2。

表2 兩組治療前、后血清丙氨酸轉氨酶水平（n=8，±s）

表2 兩組治療前、后血清丙氨酸轉氨酶水平（n=8，±s）

組別 治療前 治療后5 d實驗組 757±165844±22578±42對照組 773±171813±19872±37丙氨酸轉氨酶（u/L）增加量（u/L）

3 討論

研究表明，加熱對殺傷腫瘤細胞有一定的影響[1]，其原理是熱可以引起細胞膜通透性增加，繼而出現代謝障礙及乳酸堆積，熱可以抑制酶的活性，引起細胞不可逆損傷，最終造成腫瘤細胞死亡。由于腫瘤組織血管網密集，神經不健全，在加熱后不能有效通過血流疏散熱量，引起局部溫度升高，實驗證明腫瘤細胞比正常組織細胞耐熱性更差，這是熱碘油栓塞的重要原理。Tabaru等[2]聯合經肝動脈和局部注射碘化油治療兔VX2瘤，其療效較單獨肝動脈灌注碘化油或化療藥物治療顯著。

臨床經驗表明，任何單一療法均難以徹底殺死腫瘤細胞，特別是對于體積較大的瘤塊，經肝動脈不能完全栓塞瘤體，瘤周易殘存癌細胞[3]，而影響療效；故目前提倡多手段聯合治療肝癌。肝動脈灌注熱碘油是將熱療與栓塞技術結合的一項新的熱療技術，它將熱碘油直接注入腫瘤的供血動脈，通過癌灶“血管池”的蓄積作用與虹吸作用使熱碘油長時間作用于腫瘤組織，通過栓塞及熱效應直接殺死癌細胞，而對于肝、腎、心臟等臟器的損害較輕。經皮穿刺瘤內注射熱碘油則是對經肝動脈栓塞碘油不能覆蓋瘤區的補充治療。Maeda等[4]的研究表明，局部溫度高于42.5℃時腫瘤細胞就會出現不可逆的損傷和死亡，而正常細胞可以通過血管擴張途徑散熱，自身溫度才升高0.5℃～1℃，故臨床常選擇42.5℃～45℃作為熱療的治療窗。

本實驗通過建立兔VX2肝癌模型，比較介入性灌注常溫（25℃）碘油與介入性灌注熱（60℃）碘油聯合瘤體內注射的療效，組間差異有統計學意義（P＜0.05），而ALT差異無統計學意義，證明介入聯合方法使用熱碘油可以優勢殺死腫瘤而對正常組織影響不大。這對于彌補單獨介入性灌注常溫碘油的不足，提供改進方法的依據。介入灌注熱碘油后，腫瘤毛細血管的滲透性較正常肝組織明顯增大[5]，也為熱碘油更多的栓塞瘤體，加大瘤體的滅活提供了環境基礎。曹瑋等[6]用60℃熱碘油行兔肝動脈栓塞，得到了更好的療效，同時對肝功能影響不大。本實驗結果表明，經皮穿刺瘤內注射聯合經肝動脈灌注60℃熱碘油可抑制腫瘤生長，從而進一步減少癌細胞復發和轉移的概率，加大了腫瘤的壞死區。本實驗結果顯示，常溫（25℃）和熱（60℃）碘油栓塞瘤體后，對肝功能的影響不大，而療效差異明顯，證明熱碘油治療肝癌的應用價值。這也說明，只要掌握好適應證，熱碘油栓塞瘤體并不增加對肝功能的損害。有實驗顯示，用60℃碘油經微導管注入瘤區，溫度仍可達 45℃的有效治療溫度[7]。

本研究采用經皮瘤內注射、肝動脈栓塞和熱療結合，增加了腫瘤滅活的效能，可能是腫瘤綜合治療的一種新方法。我們也希望隨著介入技術的不斷發展，熱療和介入聯合方法在臨床治療腫瘤方面能發揮更大的作用。

[1]曹 瑋，張洪新，萬 毅，等.溫熱（60℃）化療栓塞對肝癌患者紅細胞免疫功能的影響 [J].臨床放射學雜志，2008，27：1255-1257.

[2]Tabaru K，Konno T，Oda T，et al.Treatment of VX2 carcinoma implanted in the liver with arterial and intraperitoneal administration of oily anticancer agents [J].Cancer Chemother Pharmacol，2001，47： 149-154.

[3]楊永波，程紅巖.肝動脈化療栓塞治療中碘油用量的現狀與研究進展[J].介入放射學雜志，2012，21： 348-352.

[4]Maeda T，Kuramoto S，Shimojima Y，et al.Basic studies of intra-arterial hyperthermic treatment[J].Gan To Kagaku Ryoho，1992，19： 1667-1670.

[5]李廣琪，曹 瑋，李 超，等.肝動脈熱灌注對兔肝VX2腫瘤及正常肝組織血管滲透性功能的作用 [J].介入放射學雜志，2010，19： 217-219.

[6]曹 瑋，王執民，張洪新，等.兔VX2肝癌阿霉素熱碘油栓塞的療效觀察[J].臨床放射學雜志，2004，23： 438-440.

[7]梁志會，王執民，張洪新，等.經皮肝動脈介入性熱療對犬肝功的影響[J].第四軍醫大學學報，2000，21： 430-432.