老年原發(fā)性高血壓患者A C E基因I/D多態(tài)性與厄貝沙坦降壓療效的關系

蔡靜波

江蘇省省級機關醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇南京 210024

原發(fā)性高血壓（Essential Hypertension,EH）是遺傳與環(huán)境因素共同作用所致的多基因遺傳病，是冠心病、腦卒中等心腦血管疾病的獨立危險因素，嚴重影響人類健康。隨著分子生物學的發(fā)展，高血壓相關基因研究及基于基因型的個體化降壓治療成為研究熱點。在血壓的調(diào)節(jié)和高血壓的發(fā)生發(fā)展中，腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-Angiotensin System,RAS)起著極重要的，有時是關鍵性的作用。目前高血壓病的基因治療也集中在針對RAS各個成分的基因上，該系統(tǒng)每個成分都被高度懷疑為高血壓相關基因[1]。

血管緊張素轉換酶（Angiotensin-Converting Enzyme,ACE）基因是RAS基因中主要的基因之一，位于染色體17q23區(qū)，約21 kb，含26個外顯子和25個內(nèi)含子。ACE基因的內(nèi)含子16上有一個287bp的插入（Insertion,I）和缺失（Deletion,D）的多態(tài)性。因此ACE基因分為II、DD和ID 3種基因型[2]。該研究旨在探明ACE基因的多態(tài)性在老年原發(fā)性高血壓患者中的分布情況，并探討此多態(tài)性分布與血管緊張素II受體拮抗劑厄貝沙坦降壓療效的關系。以2011年1月—2011年12月該院門診就診的初發(fā)的1級原發(fā)性高血壓患者30例為研究對象，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取在該院門診就診的初發(fā)的1級原發(fā)性高血壓患者 （年齡≥60歲）30例，其中男性16例，女性14例，年齡63～84歲，平均年齡（73.2±5.8）歲。入選患者均符合2005年中國高血壓防治指南的診斷標準，即坐位收縮壓≥140 mmHg和（或）舒張壓≥90mmHg，并排除繼發(fā)性高血壓、肝腎功能異常及糖尿病。所有患者均填寫知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 藥物干預和血壓測定 入選患者均服用厄貝沙坦 （賽諾菲公司）單藥治療，150 mg/d，每4周由專人采用水銀柱袖帶血壓計測量坐位右上臂血壓，每次測量3次并計算均值，測量時間為上午 8∶00—10∶00，共觀察 8 周。

1.2.2 基因組DNA的提取 肝素抗凝外周血4 mL，應用紅細胞裂解液提取白細胞，按照基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）提供的實驗步驟提取DNA。紫外分光光度計（Pharmacia Biotech）測定DNA濃度，并標化樣品DNA濃度值至20 ng/μL。

1.2.3 ACE基因多態(tài)性測定 采用聚合酶鏈式反應（PolymeraseChain Reaction,PCR）法檢測ACE基因的多態(tài)性。引物序列：Forward：5'-GCCCTGCAGGTGTCTGCAGCATGT-3'，Reverse：5'-GGATGGCTCTCCCCGCCTTGTCTC-3'(江陰百橋國際生物科技孵化園有限公司設計、合成)。PCR反應體積 10 μL，包括：10×buffer（含 Mg2+）1 μL， 10 μmol/L 上、下游引物各 0.2 μL，10 mmol/L 三磷酸脫氧核苷（deoxy-ribonucleoside triphosphate,dNTP）0.8 μl，基因組 DNA20 ng，20 U/L Taq DNA 聚合酶 0.05 μL，消毒雙蒸水 6.75 μl。應用-PCR儀進行PCR擴增，反應條件為：94℃預變性3 min，94 ℃變性 30 s，56.5℃退火 30 s，72℃延伸 60 s，共 32個循環(huán),最后72℃延伸10 min。PCR擴增產(chǎn)物在1.5%瓊脂糖凝膠上電泳，進行多態(tài)性分析。

1.3 統(tǒng)計方法

應用SPSS11.5軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料用百分數(shù)表示，計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，采用t檢驗。

2 結果

2.1 ACE I/D基因型在老年原發(fā)性高血壓患者中的分布情況

PCR產(chǎn)物分為2種片段：597 bp的插入片段（I）和319 bp的缺失片段（D）。 ACE 基因分為 3種基因型：II型（597 bp）；DD 型（319 bp）；ID 型（597 bp 和 319 bp 的雜合子）（見圖 1）。

入選患者II基因型有14例，占總數(shù)的46.7%，其中男性6例，女性8例；ID基因型有13例，占43.3%，其中男性9例，女性4例；DD基因型有3例，占10%，其中男性1例，女性2例。

圖1 老年EH患者ACE基因多態(tài)性分析M：DNA Marker， 自上而下依次為 500 bp，400 bp，300 bp，200 bp 和100 bp。

1～5 為其中 5例患者的 ACE I/D基因型電泳結果：1、3、4為II型，2為ID型，5為DD型。

2.2 ACE I/D基因型與厄貝沙坦對老年原發(fā)性高血壓患者降壓療效的關系

根據(jù)ACE基因I/D基因型分布將入選患者分為II組和ID+DD組（由于本組資料中DD基因型只有3例，故將ID型和DD型合為一組）。兩組的基線血壓值比較，差異無統(tǒng)計學意義。

II組患者服用厄貝沙坦治療8周，收縮壓降幅為（12.21±1.97）mmHg，舒張壓降幅為（5.93±1.54）mmHg。ID+DD 組患者治療后收縮壓較基線水平下降了（12.25±3.13）mmHg，舒張壓較基線水平下降了（5.88±1.89）mmHg。厄貝沙坦的降壓療效在2組不同基因型的患者間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

3 討論

臨床研究發(fā)現(xiàn)不同個體對抗高血壓藥物治療的臨床反應差異很大。基因變異及其多態(tài)性是影響個體間藥物反應差異的主要因素之一[3]。ACE基因的多態(tài)性對血中ACE濃度和活性起著重要作用，其中DD型ACE濃度和活性最高，ID型居中，II型最低。所以，D等位基因在ACE基因表達調(diào)控方面起活化作用，而I等位基因則起抑制作用。此外，DD型正常人及EH患者AT1基因表達最高，ID型次之，II型最低，提示D等位基因可能與血壓的升高有關[4]。該研究中，DD基因型在老年EH患者中分布最少，II和ID基因型分布比例相當。II基因型和ID+DD基因型相比較，基線收縮壓及舒張壓均無明顯差異，未發(fā)現(xiàn)D等位基因?qū)夏闑H患者血壓水平的影響。該結果可能與研究病例數(shù)較少（僅30例）有關，尚有待進一步進行大樣本人群的調(diào)查。

在高血壓病程中，長期過度的RAS激活，尤其是血管緊張素II（Angiotensin II,Ang II）的增加是發(fā)生致死及致殘性臨床轉歸終點事件的中心環(huán)節(jié)。Ang II的合成有2種途徑：ACE途徑和非ACE途徑。Ang II可與許多組織的細胞膜上的AT1受體結合使血壓升高。血管緊張素轉換酶抑制劑僅能抑制ACE途徑AngII的產(chǎn)生，而AngII受體拮抗劑則提供了新的治療方法[5]。

厄貝沙坦是一種口服的血管緊張素II受體 （Angiotensin IIreceptor,AT受體）拮抗劑，血漿半衰期長達11～15 h。厄貝沙坦與血管緊張素競爭性地與AT受體結合，抑制AT1受體的同時激活AT2受體，增加內(nèi)皮細胞中緩激肽及前列腺素的釋放，上調(diào)一氧化氮的表達，發(fā)揮擴血管及降低血壓的作用。同時厄貝沙坦不抑制緩激肽的降解，故而無干咳等不良反應，臨床使用中患者依從性較好[6]。

表1 ACE I/D基因型與厄貝沙坦對老年EH患者降壓療效的影響

該研究結果顯示，對老年原發(fā)性高血壓（1級）的患者，應用厄貝沙坦單藥治療8周，血壓可降至140/85 mmHg左右，療效基本滿意。在這些受試者中，ACE基因II型與ID+DD型相比較，對厄貝沙坦的降壓反應無明顯差異，這與厄貝沙坦主要作用于RAS的終末環(huán)節(jié)AT受體有關。

總之，厄貝沙坦可有效治療老年原發(fā)性高血壓，ACE基因I/D多態(tài)性不影響其降壓療效。

[1]胡大一，黃峻，馬長生，等.心血管內(nèi)科學高級教程[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2011：32-35.

[2]李莉，楊建一，王文娟.RAS及其基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓[J].Int JGenet,2006,29(5):389-392.

[3]Marteau JB,Zaiou M,Siest G,et al.Genetic determinants of blood pres-sure regulation[J].J Hypertens,2005(23):2127-2143.

[4]Jing L,Ningling Sun.A study of angiotensin converting enzyme genepolymorphism in essential hypertension[J].J China-Japan Friendship Hospital,2005,19(1):19-21.

[5]馬淑彥.厄貝沙坦與硝苯地平聯(lián)用治療高血壓臨床觀察[J].ChinaPrac Med,2010,17(5):146-147.

[6]葉朝暉.厄貝沙坦聯(lián)合尼群地平治療高血壓43例臨床療效觀察[J].Guide of China Medicine,2010,14(5):81-82.