拉米夫定治療對慢性乙型肝炎患者干擾素-γ的變化分析

馬孝政

懷化市第一人民醫院，湖南懷化 418000

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）是一種在世界范圍內流行的感染性疾病，被感染人群中有一部分為慢性HBV 感染患者。慢性HBV 感染的病理發病機制受多種因素的影響，許多研究認為宿主和病毒間的免疫應答反應對于該疾病的發生和發展起了關鍵性的作用。臨床通常使用拉米夫定來對患者進行治療，這是一種核苷類的抗病毒藥物，主要通過抑制病毒DNA的復制而發揮作用，但是長期使用該藥物可能導致患者產生耐藥性[1-5]。有研究認為長期使用拉米夫定后慢性HBV 患者的免疫反應出現了改變，其中Th 細胞群在該應答反應中起主要作用。為探討分析拉米夫定治療對慢性乙型肝炎患者干擾素-γ的變化影響，該院2010年1月—2012年1月針對這一現象展開調查，調查對象為70例慢性HBV，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取在該院接受治療的乙型肝炎患者70例為研究對象，患者中男45例，女25例，患者的年齡為23～78歲，平均年齡為45.3歲。所有患者經過檢測均符合慢性乙肝的診斷標準，具體參考Locarnini的標準。并且發現70例患者中在治療后病毒產生變異和未變異的各為35例，分別將這些患者標記為變異組和未變異組，同時選取同期在該院接受健康體檢的30例體檢者作為對照組。治療前所有患者都為HbeAg 陽性，其中HBV DNA≥105 copy/mL，患者的丙氨酸氨基轉移酶（ALT）大于正常值上限的2倍。同時排除具有以下描述的患者：患者合并有其他肝炎病毒的感染、患者感染HIV 病毒、使用過免疫調節劑、患者為肝炎失代償、孕婦或哺乳期婦女。免疫組、未免疫組、對照組3組年齡、性別、治療前的HBV DNA 和ALT 水平相比較，差異無統計學意義 （P>0.05），見表1。

表1 變異組、未變異組和對照組一般情況對比結果（±s）

表1 變異組、未變異組和對照組一般情況對比結果（±s）

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1.2 方法

所有患者均接受拉米夫定的治療，劑量為100 mg/d，治療時間為6個月，治療后變異組發生病毒變異的平均時間為（13.45±5.4）個月。分別采集3組受試者的外肘靜脈血液2 mL，將采集到的血液裝入普通試管和EDTA的抗凝試管，然后分離血清和血漿，檢測血清中的ALT 水平、細胞因子；檢測血漿中的HBV DNA水平。

1.3 HBV 和ALT的檢測方法

使用熒光定量方法檢測HBV DNA的含量（儀器采用Life Technology公司的PCR儀器），試劑采用和儀器相配套的試劑。使用全自動生化分析儀器對ALT進行分析（儀器使用Life Technology 生產的全自動生化分析儀），試劑使用和儀器相配套的試劑。

1.4 IFN-γ的檢測方法

使用雙抗夾心的ELISA 方法對IFN-γ的水平進行測定。試劑均購自Life Technology公司，一抗為生物素化抗體，二抗為辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素。樣本的濃度使用標準品繪制的曲線進行計算。

1.5 統計方法

所有數據使用SPSS13.0 統計軟件進行分析，計量資料采用均數±標準差（±s）表示，進行t檢驗。

2 結果

未變異組 6 個月時 IFN-γ 為（52.77±7.32）pg/mL，變異后為（52.93±6.42）pg/mL；變異組 6 個月時 IFN-γ 為（52.91±5.34）pg/mL，變異后為（25.32±0.76）pg/mL。 對照組 IFN-γ 為（7.89±4.88）pg/mL。檢測結果顯示治療后6個月時未變異組的血清IFN-γ和變異組相比差異無統計學意義（P>0.05），在病毒變異后變異組的IFN-γ水平要明顯低于未變異組，差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

慢性乙肝感染是一種常見的感染性疾病。臨床通常使用拉米夫定對患者進行治療，這種藥物可以抑制HBV的復制并能夠改善患者肝臟功能和組織病變的情況。研究報道長期使用拉米夫定可能發生HBV的變異并最終導致患者對拉米夫定產生耐藥的現象，患者血清中的HBV DNA 會再次轉陽而肝炎復發。這種現象可能是由于病毒對藥物的敏感性降低所致。變異后肝炎是否會復發主要和宿主以及病毒的自身免疫應答水平相關。特定的免疫應答和其效應機制主要涉及了Th 亞細胞群所分泌的不同細胞因子， 比如由Th1 細胞分泌的IL-2、IL-12、IFN-γ，由Th2分泌的IL-4、IL-5 等，這些細胞因子都具有調節人體體液免疫反應的功能，對于預防細胞外病原微生物的感染有重要的作用。在治療慢性乙肝的患者時，抗病毒是一個重要的過程，這個過程可以強化機體清除病毒的能力，細胞的免疫應答在抗病毒的過程中起著核心的作用。研究證明Th1/Th2 細胞比例的失衡和慢性乙肝感染有關[1-5]。

該院的研究發現使用拉米夫定對患者治療，出現變異后患者的機體免疫應答功能也隨之改變，變異組的IFN-γ水平要明顯低于未變異組。可能和病毒種群、抗原、免疫細胞因子的變化有關。提示筆者利用監測Th1 和Th2相關細胞因子的改變可能有助于及時發現患者HBV的耐藥性變化。

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