通脈降脂方對神經(jīng)元膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)缺氧模型保護作用的研究*

徐 強，鄭偕扣，李 燁，武重陽，江海濤，趙英強，孫蘭軍

（天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，天津 300150）

缺血是臨床上引起神經(jīng)細(xì)胞損傷最常見的原因，缺血后神經(jīng)元死亡是一個極其復(fù)雜的病理過程，主要表現(xiàn)為壞死和凋亡兩種形式，其中凋亡可能決定了最終梗死面積。膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最主要的細(xì)胞成分，其中膠質(zhì)細(xì)胞參與構(gòu)成中樞神經(jīng)元生存的微環(huán)境，對神經(jīng)元的發(fā)育、生長及損傷后再生發(fā)揮著重要作用。由于神經(jīng)保護劑可減少腦梗死面積，不引發(fā)出血，無溶栓、抗凝治療出血的并發(fā)癥，用前無需進行詳細(xì)的病因鑒別診斷，使得早期治療成為可能，因而神經(jīng)保護劑的治療效果和前景是令人鼓舞的。

中藥作用的多途徑性與腦損傷病理變化的多樣性具有針對性效應(yīng)，其作用靶點不僅在神經(jīng)元，同時可通過其“伙伴細(xì)胞”——星形膠質(zhì)細(xì)胞的介導(dǎo)發(fā)揮保護效應(yīng)。目前已被動物模型和臨床試驗證實的中藥保護劑有銀杏、三七皂苷、人參皂苷、補陽還五湯等。通脈降脂方是天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑，長期應(yīng)用于臨床，對于高血壓、高脂血癥及腦血管病有確切臨床療效，獲得了顯著的社會效益和經(jīng)濟效益。本方由鹿角、三七、人參、全蝎、水蛭按照 2∶2∶2∶1∶1 組成，具有滋陰益氣、活血化瘀功效，前期藥理研究證實通脈降脂方能降低血液黏度，增強紅細(xì)胞變形能力，改善腦組織微循環(huán)。基于以上研究基礎(chǔ)，本研究從細(xì)胞和整體兩個方面探討通脈降脂方神經(jīng)保護的作用及機制，為臨床上應(yīng)用中藥治療腦血管疾病神經(jīng)損傷提供實驗依據(jù)。

本研究采用星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元共培養(yǎng)模型，將神經(jīng)元細(xì)胞接種在膠原包被的3.0 μm的Transwell PTFE微孔膜上，用含阿糖胞苷的培養(yǎng)基培養(yǎng)1周后，將此長滿神經(jīng)元的Transwell PTFE微孔膜轉(zhuǎn)入長有星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)孔中，實現(xiàn)神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的共培養(yǎng)。此種共培養(yǎng)體系既能夠較好地模擬在體時的腦內(nèi)真實環(huán)境，反映神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞之間的相互關(guān)系，又能夠?qū)煞N細(xì)胞完全分離，避免了普通共培養(yǎng)方法無法將兩種細(xì)胞分離的缺陷。在缺氧損傷條件下，使用通脈降脂方進行干預(yù)，結(jié)果顯示通脈降脂方能促進神經(jīng)元細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞活力的提高，降低細(xì)胞早期凋亡率，明顯減少乳酸脫氫酶的釋放，神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)組療效優(yōu)于單獨神經(jīng)元組，并呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系。

在此基礎(chǔ)上，筆者應(yīng)用干預(yù)自發(fā)性高血壓（SHR）大鼠，從整體動物的層次進一步探討其作用機制。SHR大鼠是一種被廣泛認(rèn)可的用于研究人類原發(fā)性高血壓的遺傳型動物模型。其在出生后前幾個月時間內(nèi)能夠自行發(fā)展成為穩(wěn)定的高血壓，同時伴隨出現(xiàn)高血壓相關(guān)的包括腦組織在內(nèi)的多種靶器官損傷。本研究顯示，中藥復(fù)方通脈降脂方在改善血壓、血脂的同時，可明顯減少神經(jīng)元凋亡數(shù)目，結(jié)果與體外實驗一致。提示通脈降脂方對于早期腦損傷的預(yù)防有一定價值，為開發(fā)促進內(nèi)源性神經(jīng)再生的適合于臨床應(yīng)用的藥物提供實驗依據(jù)。

本研究從細(xì)胞學(xué)和整體動物的不同層次，揭示了中藥通脈降脂方綜合的神經(jīng)保護作用，并初步闡明其獨特的作用機制，其神經(jīng)保護作用可能部分通過星形膠質(zhì)細(xì)胞達到保護作用。為臨床應(yīng)用中藥治療神經(jīng)損傷提供新的依據(jù)，并為通脈降脂方進一步深入研究和開發(fā)提供了新的思路，對神經(jīng)損傷的防治有比較重要的意義。