腫瘤相關基因Ki67在肺癌中的表現及臨床意義

李瑩瑩 王 艷

哈爾濱醫科大學附屬腫瘤醫院，黑龍江哈爾濱 150000

肺癌是近年來發病率越來越高的一項疾病，隨著經濟社會的發展，人們生活水平的不斷提高，隨之而來的環境污染也是日益嚴重，汽車尾氣，大氣污染和水資源污染日益嚴重，我們的生活環境越來越惡劣，人們的健康受到了嚴重的威脅，肺癌的發病率越來越高，肺癌成為危害人們健康的嚴重疾病。并且肺癌的產生除了跟惡劣的環境有關，也跟人類本身的基因有關，肺癌是一個多基因調控的疾病。科研工作者在研究肺癌機理的時候重點從基因的角度出發，從基因的角度找到控制肺癌發病的關鍵基因，為后續的找出治療肺癌的方法打下基礎。腫瘤相關基因Ki67時近年來被廣泛研究的一個重要的細胞增殖標記，通過近年來相關肺癌病證的研究和診斷，發現腫瘤相關基因Ki67在肺癌中有很高表達率，并且有研究顯示腫瘤相關基因Ki67與癌癥的生物學行為和預后有一定的相關關系。腫瘤血管生成已成為判斷惡性腫瘤轉移及預后的重要指標。

本研究的研究對象Ki67是一種增殖細胞相關的核抗原，與有絲分裂密切相關，是細胞增殖生長的關鍵基因，是作為標記細胞增殖狀態的抗原兒存在的，腫瘤相關基因Ki67表現陽性說明癌細胞增殖活躍，腫瘤相關基因Ki67變現陰性說明癌細胞增殖狀態并不活躍。但根據目前的研究成果來看，腫瘤相關基因Ki67的確切機制并沒有一個明確的定義和概念，本研究力圖通過對肺癌患者的手術標本的觀察，通過觀察Ki67在肺癌組織中的表達狀況及其與病理和臨床特征，力求找出診斷和治療肺癌的相關方法找出腫瘤相關基因Ki67控制的相關性狀，解決一直困擾我們的癌癥的問題和疑惑。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇哈爾濱醫科大學附屬腫瘤醫院2010—2012年的肺癌手術病例，獲取肺癌手術病人的手術標本88例，其中男性患者50例，女性患者38例，年齡層面包括23～78歲的患者，平均年齡58歲，為了實驗結果的準確性，所選取的患者在術前都沒有進行過放、化療等治療手段的治療。

1.2 試劑與方法

1.2.1 試劑 VEGF多克隆抗體，Ki67單克隆抗體。

1.2.2 實驗方法 實驗方法采用免疫組化二步法。實驗通過國際標準的免疫組化二步法進行檢驗，并且全程過程，要參照腫瘤相關基因Ki67試劑的說明書來檢測Ki67的表達，石蠟切片脫蠟至水，微波抗原修復，二步法過氧化物酶阻斷液孵育5 min，第一抗體NET-1。工作濃度1/200；鼠抗人單克隆抗體Ki67濃度1/100。室溫30 min，之后通過二步法HRP處理，采用DAB染色的方法。仔細觀察相關石蠟切片的標本結果，通過p5法判斷相應的現象，并得出結論。

1.3 結果判斷P5

肺癌組織中NET-1、Ki67的表達特征NET-1表達在癌細胞膜上或胞質中，Ki67陽性定位于肺癌細胞核中。肺癌中MVD均值為27.8。實驗選用的陽性對照組均顯示為陽性的表達。陰性對照均未檢出NET-1、Ki67的陽性表達。10例非腫瘤胃黏膜中NET-1均勻分布于胞漿，均呈低表達，MVD值9.46。5例偶見基底層細胞Ki67核表達。對39例三指標均為過表達的病例進行免疫組化三重標記雙染，在同一張切片上的三種標記通過不同的顯色劑分別表達了組織的不同部位，NET-1陽性表達在癌細胞胞質或胞膜呈褐色，Ki67表達現象中，在癌細胞核呈藍黑色。免疫組化三重標記雙染在組織原位顯示三指標表達呈正相關。

1.4 統計學處理

結果表明基因Ki67的表達指標的相關性分析用Spearman等級相關分析；用χ2檢驗等級分組變量間表達陽性率的趨勢，用Fisher直接計算概率法比較不同臨床病理因素表達陽性率之間的差異；數據的相關處理用相關統計學軟件Stata9.0進行。用Logrank檢驗比較兩組曲線，用Kaplan-Meier估計生存曲線。檢驗意義水準為P ＜ 0.05。

2 結果

Ki67與肺癌的發生和發展有一定的關系，了解Ki67的產生和發展機理，對診斷和治療肺癌起到有一定的作用，研究Ki67可以得出相關的結論，為治療肺癌打下了堅實的理論基礎。

本研究結果表明，在肺癌患者手術標本的同一張切片上，肺癌腫瘤細胞質與膜NET-1表達時，癌細胞核Ki67也是相伴表達的，可見二者之間有一定的關聯性，通過對本研究對象哈爾濱醫科大學附屬醫院的88例肺癌患者的手術標本進行調查和研究的基礎上，結果通過科學的統計和分析，我們得出了一下的結論，肺癌組織中Ki67的陽性表達率分別為99．6%，證明了腫瘤相關基因Ki67與癌細胞的增殖有很強的正相關性，本研究還通過抽樣調查和結果分析，最終結果顯示肺癌中NET-1和Ki67表達呈顯著正相關，更客觀地表明NET-1基因表達不但能顯著促進腫瘤血管的形成，并且與癌細胞增殖有關，Ki67的表達對于肺癌的發生和影響具有一定程度的重要的意義。

3 討論

本研究結果告訴我們，在我們研究肺癌機理的時候，要多從內部基因機理的角度去發現和解決問題，基因層面是物質最原始和本身的層面，這些層面能夠告訴我們事物產生的最原始的機理，基因控制蛋白質的合成，也就意味著控制了我們的生命活動的進行和發展，要是我們可以從基因的層面了解了肺癌的發病和發展的話，也就意味著，我們掌握了肺癌的全部知識，對于以后對于肺癌進行防治和治療診斷就有了十分重要的理論依據參考。發現基因問題，并解決基因問題，也是現代分子生物學研究的重要趨勢和方法，能夠從微觀的角度的分析事物對于我們來說是一種新的突破。本研究對Ki67在肺癌的產生和發展的趨勢中進行了研究，并得出了一定的結論。這是醫學領域的一個重大的突破。

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