苗藥觀音草提取物的體外抗氧化活性研究

徐 紅，黃亞勵，張奇龍，王 麗

（貴陽醫(yī)學院化學教研室，貴州 貴陽550004）

觀音草又名吉祥草，為百合科植物吉祥草［Reineckia carnea（Andr．）Kunth］的全草，是我國西南苗族地區(qū)常用的傳統(tǒng)草藥之一。在貴州、湖南、云南、廣西、四川等苗族人口主要聚居區(qū)，苗藥觀音草應用廣泛［1］，并在苗藥產(chǎn)業(yè)化發(fā)展中扮演著重要的角色，但目前對觀音草的應用主要集中在止咳、化痰、抗炎、降血糖等方面［2，3］，藥理實驗研究少有報道，因此，對其藥用價值的深入研究和開發(fā)利用意義重大。

天然植物是很有潛力的天然抗氧化劑資源，具有高效、低毒等優(yōu)點，且其提取物兼具抗氧化作用及清除體內(nèi)自由基的作用［4］。作者在此以觀音草為研究對象，利用不同極性的溶劑對觀音草的乙醇提取物進行萃取，獲得不同極性溶劑的提取物，并研究了不同提取物的體外抗氧化活性，擬為進一步探索其藥理作用機理奠定基礎。

1 實驗

1．1 材料、試劑與儀器

觀音草藥材購于貴州安順藥材公司，經(jīng)貴陽中醫(yī)學院民族醫(yī)藥研究所鑒定為百合科植物觀音草［Reineckia carnea（Andr．）Kunth］。

無水乙醇，95%乙醇，0．2×10－3mol·L－1鄰苯三酚溶液，7．5×10－3mol·L－1水楊酸溶液，0．1%過氧化氫溶液，7．5×10－3mol·L－1硫酸亞鐵銨溶液，Tris－HCl緩沖溶液。所用試劑均為分析純，實驗用水為二次蒸餾水。

TU－1800pc型紫外可見分光光度計，北京普析公司；PHS－3C型酸度計，上海大中分析儀器廠；RE－52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠。

1．2 方法

1．2．1 觀音草提取物溶液的制備

滲漉提取樣品的制備［5］：將干燥的觀音草粉碎，稱取1．0kg，常溫下以3．0L95%乙醇浸取7d，固液分離，將濾液旋蒸后得到總浸膏；懸浮于水中，按照極性從小到大的順序，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，直至上清液近無色，將得到的各極性溶劑的萃取液旋蒸，得到不同極性溶劑提取浸膏，常溫晾干。

分別以無水乙醇－水（體積比7∶3）配制濃度為2 mg·mL－1的觀音草乙醇總提取物和不同極性溶劑提取物溶液。

1．2．2 羥基自由基（·OH）清除實驗［6］

于10mL具塞比色管中依次加入7．5×10－3mol·L－1硫酸亞鐵銨溶液1．0mL、7．5×10－3mol·L－1水楊酸溶液1．0mL、0．1%H2O2溶液1．0mL，再分別加入濃度為2mg·mL－1的觀音草乙醇總提取物或不同極性溶劑提取物溶液1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL，用蒸餾水定容，在37℃水浴中恒溫反應1h后，于波長510nm處測定體系吸光度Ai。相同條件下，測定試劑空白的吸光度A0。按式（1）計算羥基自由基的清除率：

1．2．3 超氧陰離子自由基（·O2－ ）清除實驗［7，8］

將10mL比色管、pH值8．2的Tris－HCl緩沖溶液、蒸餾水、0．2×10－3mol·L－1鄰苯三酚溶液分別在25℃水浴中保溫10min后，在10mL比色管中迅速加入 Tris－HCl緩沖溶液2．0mL、鄰苯三酚溶液2．0mL，用蒸餾水定容，搖勻，立即于325nm處每隔30s測吸光度，計算線性范圍內(nèi)每分鐘吸光度的增加值△A0。在相同條件下，分別加入濃度為2mg·mL－1的觀音草乙醇總提取物溶液1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL，按相同方法測定并計算△Ai。按式（2）計算超氧陰離子自由基的清除率：

2 結(jié)果與討論

2．1 觀音草提取物對羥基自由基的清除作用

分別測定觀音草乙醇總提取物和不同極性溶劑提取物在體外對羥基自由基的清除率，結(jié)果見圖1。

圖1 不同觀音草提取物對羥基自由基的清除率Fig．1 The scavenging rate of different extracts of Reineckia carnea （Andr．）Kunth to hydroxyl free radical

由圖1可知，觀音草乙醇總提取物和不同極性溶劑提取物對羥基自由基的清除率隨提取物濃度的增大而升高；在相同濃度下，清除率大小順序為：乙醇總提取物＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞石油醚提取物，觀音草乙醇總提取物對羥基自由基的清除作用最強，最高達到84．5%。

2．2 觀音草乙醇總提取物對超氧陰離子自由基的清除作用

測定觀音草乙醇總提取物在體外對超氧陰離子自由基的清除率，結(jié)果見圖2。

由圖2可知，觀音草乙醇總提取物對超氧陰離子自由基的清除率隨提取物濃度的增大不斷升高，最高達到79．32%。

圖2 觀音草乙醇總提取物對超氧陰離子自由基的清除率Fig．2 The scavenging rate of total ethanol extract of ineckia carnea （Andr．）Kunth to super oxide anion free radical

2．3 討論

觀音草具有較強的抗氧化性，在不同極性溶劑提取物中，以乙酸乙酯提取物清除羥基自由基的能力最強，這與文獻結(jié)果一致［5］；由于觀音草中所含的皂苷、甾體化合物、皂苷元、萜類化合物等復合成分的協(xié)同作用，使乙醇總提取物的抗氧化效果比單一極性溶劑提取物的抗氧化效果更強。因此，總抗氧化能力的評價是抗氧化活性成分篩選的重要方式。

3 結(jié)論

采用羥基自由基體系和超氧陰離子自由基體系對觀音草提取物的抗氧化性能進行了研究。結(jié)果表明，觀音草提取物對羥基自由基和超氧陰離子自由基均有較強的清除作用，其清除率隨觀音草提取物濃度的增大而升高，說明觀音草具有較強的抗氧化活性，極可能是一種天然抗氧化劑的新資源。

［1］徐宏，杜江．苗藥觀音草在民間的使用及開發(fā)應用情況［J］．中國民族醫(yī)藥雜志，2006，12（5）：43－44．

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［4］譚仁祥，王劍文，徐琛．植物成分功能［M］．北京：科學出版社，2003：423．

［5］李曉波，馮欣艷，趙儒銘，等．基于Ce（Ⅳ）分光光度法的天然產(chǎn)物抗氧化活性的評價［J］．化學研究與應用，2012，24（1）：42－47．

［6］郭青枝，趙二勞，白建華．沙棘葉提取物抗氧化性能研究［J］．化學與生物工程，2008，25（3）：58－59．

［7］張京芳，王冬梅，周麗，等．香椿葉抗氧化物提取工藝優(yōu)化與抗氧化活性分析［J］．農(nóng)業(yè)機械學報，2007，38（8）：97－100．

［8］玄紅專，桑青，麻建軍．鄰苯三酚自氧化法測定不同蜂產(chǎn)品抗氧化活性的研究［J］．食品科技，2008，33（4）：137－139．