2054例中期妊娠產前診斷染色體核型分析

湯麗霞，禤潔甜，梁彩紅，林 蔚，陳華錦，鄭慧潔，楊 光

（廣東佛山市第一人民醫院臨床研究所 528000）

介入性產前診斷的實施是防止染色體異常患兒出生的有效方法之一。羊水或臍血穿刺后，經過體外細胞培養，獲取中期染色體核型，分析染色體數目或結構是否正常，判斷胎兒染色體是否異常，能夠幫助孕婦選擇分娩正常發育的胎兒。近年來，隨著中國政府對《母嬰保健法》的普及和執行力度的加強，以及婦產醫學在產前診斷領域的技術進展，產前篩查和產前診斷的受眾面越來越大，染色體異常的患兒出生數量下降，大大提高了出生人口的健康質量。在有了一定數量的產前診斷染色體核型分析工作后，對臨床應用的產前診斷指征進行回顧性分析，旨在總結產前診斷常用指征的應用價值，提高產前診斷異常染色體胎兒的檢出率。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年1月至2012年4月間在本院就診的符合產前診斷指征的中期妊娠孕婦2054例，經過知情同意后羊水穿刺1755例，臍血穿刺299例，孕周15～25周，年齡20～43歲。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養和染色體制備 羊水和臍血穿刺均經腹壁在B超定位指引下進行。羊膜腔穿刺抽取羊水20～30mL，平均分置于2支15mL離心管中，離心后棄上清，羊水第一線培養采用GIBCO羊水培養基6mL重懸沉淀，第二線培養采用以色列羊水培養基6mL重懸沉淀，分別接種于25cm2培養瓶，置37℃、5%CO2的培養箱中培養，6～7d后觀察，收獲前1d換液，在細胞克隆數達到5堆以上，且細胞生長旺盛，數量足夠時，加入秋水仙素繼續培養4～6h進行收獲，常規制片和G顯帶后核型分析。每例計數20個中期分裂相，分析5個核型以上。臍血標本接種達輝外周血淋巴細胞培養基，標本均實行雙線培養。

1.2.2 產前診斷指征 中期妊娠產前診斷指征主要包括在以下6種：（1）唐氏篩查高風險，包括21三體高風險，18三體高風險、13三體高風險；（2）高齡孕婦，≥35歲的孕婦；（3）超聲檢查胎兒異常超聲標記，包括妊娠中期或中期前檢出的胎兒各系統的異常超聲影像學指標，如胎兒頸后透明帶寬度值增大、胸腔積液、脈絡叢囊腫、腦室增寬、心室強光斑、雙腎盂分離、腸管回聲增強、羊水過多或過少、鼻骨發育不良、肱骨及股骨短小等。（4）夫婦單方為染色體平衡易位攜帶者；（5）不良孕產史：流產史、新生兒死亡；（6）其他：包括不良接觸史、孕母血清篩查中單項高、母親智力低下、近親結婚以及上述5組未能包括的產前診斷指征。有重疊指征選擇入其中一組。6組之間沒有重疊。

1.2.3 異常染色體判斷 計數20個核型，分析核型大于或等于5個，異常核型判斷標準執行SICN2005。羊水培養核型分析結果為嵌合體時，進行臍血染色體核型分析，并以臍血核型分析結果與羊水核型分析結果相符時為真性嵌合體。胎兒核型分析結果為易位時，需排除是否為父母一方攜帶來源，如果為父母來源的平衡易位，則不包括在異常核型數據中。

2 結 果

2.1 染色體異常檢出結果 產前診斷70例異常染色體種類分布見表1。在2054例羊水和臍血細胞核型分析中，染色體數目異常占47.1%，結構異常占30.0%，嵌合體占異常染色體22.9%。

2.2 各種產前診斷指征染色體異常結果分布 各種產前診斷指征檢查例數和異常染色體構成比，以及染色體異常檢出率見表2。

表1 產前診斷異常染色體種類分布

表2 產前診斷各種指征與染色體核型異常檢出的分析

3 討 論

染色體結構和數目異常是嚴重的出生缺陷之一，染色體病患兒通常智力低下，生長發育遲緩，缺乏特異性臨床學表現。中期妊娠產前診斷染色體核型分析是有效阻止染色體病患兒出生的重要和有效手段之一。本研究中，2054例孕婦進行羊水和臍血染色體檢查，結果胎兒染色體異常檢出率為3.4%（70／2054），與同類文獻報道的檢出率基本一致［1－2］。夫妻單方平衡易位攜帶者生育染色體病患兒的檢出率為42.9%（3／7），明顯高于其他指征。唐氏篩查高風險、高齡和B超提示胎兒異常3種產前診斷指征異常染色體檢出率分別為3.7%（39／1052）、1.4%（10／706）、8.1%（15／186），其與國內外同類文獻報道的檢出率水平持平［3－4］。3種指征所包含的異常染色體患兒檢出數占檢出總數的91.4%（64／70）。3種指征包含了產前診斷孕婦的94.6%（1944／2054）。本研究中羊水染色體分析檢出18例嵌合體，其中經臍血染色體分析驗證有5例嵌合體為細胞培養引起的假性嵌合體［5］。

雖然唐氏篩查所選出的唐篩高風險指征中異常染色體胎兒檢出率為3.7%，但是55.7%的異常染色體胎兒是從唐氏篩查高風險陽性的孕婦中檢測出來。唐氏篩查高風險是產前診斷的重要指征之一，提高這個由眾多檢查指標和臨床指標綜合確定的檢查界值，需要不斷地對檢測系統進行調整，需要進行診斷性試驗的詢證評價，以進一步提高異常染色體胎兒檢出率。

高齡孕婦是指孕婦的分娩年齡大于或等于35周歲，是唐氏綜合征嬰兒的一個重要危險因素。因此有越來越多的高齡孕婦直接進入產前診斷。本研究中高齡孕婦指征占比為34.37%，總數為706例。高齡孕婦直接進入產前診斷的胎兒異常染色體檢出率為1.4%（10／706）。在唐氏篩查高風險幾項指征中比較，高齡孕婦胎兒染色體異常檢出率為最低。高齡孕婦直接進入有創性的胎兒產前診斷，無疑對高齡孕婦造成較大的精神壓力。對高齡孕婦根據篩查結果行產前診斷，可以減少高齡孕婦的介入性產前診斷手術［6－7］。高齡孕婦直接進入還是結合產前篩查的其他指征進入產前診斷需要進一步多角度的研究。

［1］張國強，賴有行，周永賢，等.唐氏綜合征產前血清篩查與染色體核型符合情況分析［J］.廣東醫學院學報，2007，25（3）：269－270.

［2］禤潔甜，梁彩紅，林蔚，等.798例妊娠中期羊水細胞染色體核型分析［J］.廣州醫藥，2009，40（6）：31－33.

［3］Muller F，Thalabard JC，Ngo S，et al.Detection and falsepositive rates of maternal serum markers for Down syndrome screening according to maternal age in women over 35years of age.A study of the agreement of eight dedicated software packages［J］.Prenat Diagn，2002，22（5）：350－353.

［4］沈國松，張甦，何平亞，等.779例高齡孕婦的產前篩查與診斷結果分析［J］.中國產前診斷雜志：電子版，2009，1（2）：29－32.

［5］Shalev E，Zalel Y，Weiner E，et al.The role of cordocentesis in assessment of mosaicism found in amniotic fluid cell culture［J］.Acta Obstet Gynecol Scand，1994，73（2）：119－122.

［6］孫立娟，李巖，張秀玲，等.3800例羊水細胞染色體核型分析及相關遺傳咨詢［J］.國際婦產科學雜志，2011，38（1）：68－71.

［7］Yang F，Wang H，Shi JC，et al.Validity of different methods to prenatal screening fro Down＇s syndrom during first and second trimester pregancy of Chinese－women［J］.Biomed Environ Sci，2013，26（2）：87－93.