耐異煙肼和鏈霉素的結(jié)核分枝桿菌臨床分離株與敏感株差異蛋白表達(dá)研究

何秀云 朱傳智 逄宇 黃香玉 蔣麗氣 趙雁林 莊玉輝

目前，結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis Mtb）H37Rv全基因組序列已知，但許多蛋白質(zhì)功能仍不清楚。Mtb耐藥機(jī)制、致病機(jī)制研究還有待于揭示更多Mtb蛋白功能。雖然，目前治療結(jié)核病依然采用利福平（RFP）、異煙肼（INH）、鏈霉素（S）和吡嗪酰胺（PZA）的聯(lián)合化療，但RFP、INH和S耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重。研究發(fā)現(xiàn)INH耐藥的分子診斷標(biāo)識(shí)有katG，inhA，kasA，oxyR-ahpC 間隔區(qū)突變，但仍有高達(dá)40%的耐INH菌株不能檢測(cè)到上述基因突變［1］。編碼核糖體S12蛋白的rpsL 基因突變（K43R，K88Q）是S耐藥的主要分子標(biāo)識(shí)，其次是編碼16SrRNA的rrs基因突變（530莖環(huán)和915位核苷酸）［2］。但仍有約30%S耐藥結(jié)核分枝桿菌未檢測(cè)到rpsL或rrs基因突變，推測(cè)結(jié)核分枝桿菌S耐藥還存在其他機(jī)制［3］。

宿主免疫功能和感染的Mtb毒力強(qiáng)弱決定了機(jī)體感染Mtb的結(jié)果。不同Mtb臨床分離株和不同分枝桿菌的差異可從基因水平進(jìn)行解釋?zhuān)寻l(fā)現(xiàn)增強(qiáng)胞內(nèi)生長(zhǎng)基因（enhanced intracellular survival，eis）、增強(qiáng)胞內(nèi)生長(zhǎng)速率的基因（in vivo growth，ivg），增強(qiáng)侵入位點(diǎn)（mycobacterial enhanced entry locus，mel2）與 Mtb毒力有關(guān)［4－5］。但基因表達(dá)與否與所處的環(huán)境有關(guān)，單從基因水平無(wú)法解釋菌株在不同培養(yǎng)條件下差異表達(dá)蛋白［6］。

尋找與結(jié)核分枝桿菌INH和S耐藥相關(guān)的新蛋白，以進(jìn)一步解析結(jié)核分枝桿菌INH和S耐藥機(jī)制是以后研究工作的重點(diǎn)內(nèi)容之一。蛋白質(zhì)組學(xué)可全面了解某組織、細(xì)胞器、甚至某生物的整體蛋白，其在疾病診斷標(biāo)識(shí)、疾病機(jī)制研究等方面已發(fā)揮重要作用?；诮?jīng)典雙向凝膠電泳的蛋白質(zhì)組學(xué)存在低分辨率和低敏感度，以及無(wú)法對(duì)不溶性蛋白質(zhì)、高分子量蛋白質(zhì)、極酸性蛋白質(zhì)和極堿性蛋白質(zhì)進(jìn)行分析的缺點(diǎn)。而定量蛋白質(zhì)組學(xué)能全面定量分析差異表達(dá)蛋白，為大范圍鑒定蛋白及其復(fù)合物提供了有效的途徑［7］。核素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量（isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ）技術(shù)是美國(guó)Applied Biosystems公司研發(fā)的一種新的體外多肽標(biāo)記技術(shù)，該技術(shù)定量準(zhǔn)確性高，聯(lián)用液相色譜分離彌補(bǔ)了凝膠分離在蛋白質(zhì)疏水性，相對(duì)分子質(zhì)量和等電點(diǎn)方面的限制［10］；該技術(shù)不僅可以對(duì)任何類(lèi)型的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定，并可同時(shí)對(duì)8個(gè)樣品進(jìn)行定量，從而縮小了不同樣品不同批次間的試驗(yàn)誤差，有較好的重復(fù)性［8］。本研究采用iTRAQ技術(shù)分析耐INH和S的Mtb臨床分離株02166、INH和S敏感株01105和H37Rv的菌體蛋白，通過(guò)Mascot搜索及生物信息學(xué)對(duì)蛋白定量分析，旨在尋找與結(jié)核分枝桿菌INH和（或）S耐藥相關(guān)的新蛋白。

材料和方法

一、菌株

Mtb臨床分離株02166和01105由國(guó)家疾病預(yù)防控制中心國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室從臨床分離、鑒定（毒力、耐藥性和基因型）和保存。02166菌株和01105菌株均為北京基因型、毒力高于H37Rv。02166菌株對(duì)INH和S耐藥、對(duì)RFP、EMB、Km、Ofx敏感，01105菌株對(duì)上述抗結(jié)核藥均敏感。02166菌株、01105菌株及H37Rv抽提菌體蛋白的菌體由國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室提供。菌體經(jīng)鈷60照射滅活，保存于－80℃?zhèn)溆谩?/p>

二、主要試劑和儀器

iTRAQ-8plex標(biāo)試劑盒購(gòu)自ABI公司；胰蛋白酶（trypsin）、三乙基碳酸氫銨（triethylammonium bicarbonate，TEAB）購(gòu)自Sigma公司；Bradford定量試劑盒購(gòu)自美國(guó)伯樂(lè)Bio-Rad公司；三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）、羥乙基哌嗪乙硫磺酸｛2-［4-（2-Hydroxyethyl）-1-piperazinyl］ethanesulfonic acid，HEPES｝、3-［3-（膽酰胺丙基）二甲氨基］丙磺酸內(nèi)鹽｛3-［（3-Cholamidopropyl）dimethylammonium］-1-propanesulfonate，CHAPS｝、苯甲基磺酰氟化物（phenylmethyl sulfonylfluoride，PMSF）、二硫蘇糖醇（dithiothreitol，DTT）、十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）、乙腈、碘乙酰胺（iodoacetamide，IAM）等試劑均為進(jìn)口分裝試劑，磷酸二氫鉀（KH2PO4）、氯化鉀（KCl）、丙酮、甲酸等為國(guó)產(chǎn)分析純。低溫超高壓連續(xù)細(xì)胞破碎機(jī)JN3000為廣州聚能生物科技有限公司產(chǎn)品；超聲波細(xì)胞粉碎儀JY92－Ⅱ?yàn)閷幉ㄐ轮ド锟萍脊煞萦邢薰井a(chǎn)品；半制備型高壓液相色譜 （high pressure liquid chromatography，HPLC）系統(tǒng)為日本島津產(chǎn)品，Luna 5uSCX 100A色譜柱（250×4.60mm，5μm）為美國(guó)菲羅門(mén)公司（Phenomenex）產(chǎn)品；Nano-LC MicroTOF-QⅡ?yàn)槊绹?guó)Bruker公司產(chǎn)品；C18反相色譜柱（100×0.075mm，5μm）為美國(guó) Agilent產(chǎn)品。

三、菌體蛋白iTRAQ分析

（一）菌體蛋白提取

滅活的 Mtb經(jīng)1×PBS（pH 7.4）洗滌30min，4℃、8000×g離心30min，棄上清。30ml裂解液［Tris-Cl 20mmol／L，pH 8.5；1mmol／L乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA），1mmol／L PMSF充分懸浮沉淀，低溫超高壓連續(xù)細(xì)胞破碎機(jī)將菌細(xì)胞破碎、功率不超過(guò)1500W，1次循環(huán)后將菌液再重新進(jìn)樣，4次循環(huán)破菌，溶液總體積不超過(guò)50ml。4℃、20000×g離心30min，取20ml上清加入5ml 50%TCA／丙酮（100ml丙酮溶解50g TCA），冰水浴2h，4℃、20000×g離心30min。－20℃預(yù)冷丙酮洗滌沉淀3次，每次洗滌均4℃、20000×g離心30min；沉淀自然晾干，即為制備好的Mtb全菌體蛋白樣品，凍存于－80℃?zhèn)溆谩?/p>

（二）菌體蛋白復(fù)溶及定量

取部分制備好的Mtb全菌體蛋白樣品沉淀于1.5ml離心管，加入復(fù)溶緩沖液（8mol／L尿素，4%CHAPS，30mmol／L HEPES，pH 調(diào)至8.0～8.3），加入PMSF至終濃度1mmol／L、EDTA至終濃度2mmol／L，混勻并冰上放置5min。加入DTT至終濃度10mmol／L，超聲（超聲波發(fā)射2s、間歇3s、功率240W）5min助溶，15℃、20000×g離心25min。取上清，加入DTT至終濃度10mmol／L，56℃恒溫水浴1h，迅速加入IAM至終濃度55～100mmol／L，暗室室溫靜置1h。加入4倍于樣品溶液體積的預(yù)冷丙酮，－20℃沉淀至少3h。4℃、20000×g離心20min，棄上清。300μl 50%TEAB、0.1%SDS溶液復(fù)溶沉淀，超聲（超聲波發(fā)射2s、間歇3s、功率240W）3min助溶。Bradford試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)含量。

（三）蛋白質(zhì)酶解

每個(gè)樣品取100μg蛋白，含0.1%SDS的50%TEAB補(bǔ)齊體積至3個(gè)樣品為相同體積。每100μg蛋白質(zhì)樣品加入3.3μg胰蛋白酶，37℃水浴24h；補(bǔ)加1μg胰蛋白酶，37℃水浴12h。酶解樣品真空冷凍干燥，30μl含0.1%SDS的50%TEAB復(fù)溶肽段。取1μl復(fù)溶肽段經(jīng)ZipTip?Pipette Tips脫鹽，1μl基質(zhì)洗脫的蛋白樣品直接上樣基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（matrix-assisted laser desorption／ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）檢測(cè)肽質(zhì)量指紋圖譜以評(píng)價(jià)胰蛋白酶消化效果。

（四）標(biāo)記肽段

將iTRAQ-8plex標(biāo)記試劑盒中的標(biāo)記試劑（113、115和121）平衡至室溫，每管標(biāo)記試劑中加入70μl異丙醇，顛倒混勻后加入到對(duì)應(yīng)的酶解肽段樣品中，113標(biāo)記臨床分離株01105、115標(biāo)記臨床分離株02166、121標(biāo)記 H37Rv?；靹?、稍離心后，室溫靜置2h。

（五）半制備型HPLC分離肽段

A 液（25%乙腈，10mmol／L KH2PO4，磷酸調(diào)pH值至3.0孔徑0.22μm有機(jī)膜過(guò)濾）平衡系統(tǒng)，10～20min；標(biāo)記的樣品用A液稀釋10倍，全部上樣，流速1ml／min。洗脫梯度：0%～5%B液（25%乙腈，2mol／L KCl，10mmol／L KH2PO4，磷酸調(diào)pH值至3.0，孔徑0.22μm 有機(jī)膜過(guò)濾），1min；5%～30%B液，20min；30%～50%B液，5min；50%B液，5min；50%～100%B液，5min；分部收集樣品。收集樣品用C18反相色譜柱除鹽，低溫抽干、0.1%甲酸復(fù)溶肽段用于Nano LC分離。

（六）Nano LC分離及質(zhì)譜鑒定

HPLC分離并脫鹽的0.1%甲酸復(fù)溶肽段上樣。流動(dòng)相 A 液：H2O，0.1%甲酸；B液：乙腈，0.1%甲酸。洗脫梯度為：0%～5%B液，0～10min；5%～45%B液，10～80min；45%～80%B液，80～85min；80%B液，85～100min；80%～5%B液，100～105min；5%B 液，105～120min。流速0.0003ml／min。Nano LC 分離的樣品直接注入MicroTOF-QⅡ質(zhì)譜儀，一級(jí)質(zhì)譜（mass spectrometry，MS）掃描質(zhì)荷比（m／z）范圍為300～2000。每個(gè)一級(jí)質(zhì)譜圖自動(dòng)選擇3個(gè)最強(qiáng)母離子進(jìn)行串級(jí)掃描，MS-MS掃描 m／z范圍為200～3000，每組樣品質(zhì)譜鑒定3次重復(fù)。MicroTOF-QⅡ質(zhì)譜儀檢測(cè)參數(shù)：離子源（ESI，正離子掃描），掃描范圍（Auto MS2，m／z 50～2000），Set capillary（1400V），干燥熱源 （150 ℃），碰 撞池 （500.0VPP），傳輸時(shí) 間（150μs），前脈沖存儲(chǔ)時(shí)間（2.0μs），校準(zhǔn)方法（自動(dòng)調(diào)諧優(yōu)化電壓，外標(biāo)法校準(zhǔn)質(zhì)量數(shù)）。

（七）生物信息學(xué)分析

質(zhì)譜掃描完畢，得到質(zhì)譜信號(hào)圖。質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析軟件DataAnalysis 4.0（美國(guó)Bruker公司）打開(kāi)質(zhì)譜信號(hào)圖，打開(kāi)baf數(shù)據(jù)，自動(dòng)分析標(biāo)峰得到mgf文件。合并mgf文件。將合并后的mgf文件進(jìn)行Mascot檢索（SwissProt下載的Mtb數(shù)據(jù)庫(kù)為搜索數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行本地搜索）。Mascot檢索參數(shù)：酶（enzyme）：胰蛋 白 酶 （trypsin）；數(shù) 據(jù) 庫(kù) （database）：swissprot-rat；肽段電荷 peptide charge：＋，＋＋，＋＋＋；儀器（instrument）：ESI-QUAD-TOF；固定修飾（fixed modification）：脲甲基化carba-midomethyl（C）；可變修飾（variable modification）：Gln-＞pyro-Glu（N-term Q），氧化反應(yīng) oxidation（M），iTRAQ-8plex（K），iTRAQ-8plex（N-term）和iTRAQ-8plex（Y）；肽質(zhì)量值誤差范圍（peptide tol）：0.1u（monoisotopic）；MS-MS碎片離子的質(zhì)量值誤差范圍（MS-MS tol）：0.1u；最大錯(cuò)配（max missed cleavages）：1。篩選：P＜0.05。差異表達(dá)蛋白質(zhì)定量以Mascot搜庫(kù)結(jié)果為基礎(chǔ)，以mz 113和mz 121為對(duì)照組，依據(jù)Mascot的加權(quán)方式，根據(jù)一組肽段核素報(bào)告基團(tuán)的相對(duì)含量的比例進(jìn)行定量，02166菌株分別與01105菌株和H37Rv的直接比值顯示相對(duì)定量結(jié)果，根據(jù)不同肽段鑒定次數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，從而判定相對(duì)定量結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）［9］（DataAnalysis 4.0軟件直接給出統(tǒng)計(jì)結(jié)果，P＜0.05或P＞0.05）。若蛋白質(zhì)標(biāo)記的報(bào)告基團(tuán)信息丟失，則該蛋白無(wú)定量信息。

結(jié) 果

一、菌體蛋白鑒定及相對(duì)定量

02166菌株與01105菌株比較有153個(gè)差異表達(dá)蛋白，其中，表達(dá)上調(diào)蛋白12個(gè)（3個(gè)蛋白上調(diào)倍數(shù)＞1.2）；表達(dá)下調(diào)蛋白141個(gè)（104個(gè)蛋白下調(diào)倍數(shù)＜0.8）。02166菌株與 H37Rv菌株比較有129個(gè)差異表達(dá)蛋白，表達(dá)上調(diào)蛋白33個(gè)（20個(gè)蛋白上調(diào)倍數(shù)＞1.2）；表達(dá)下調(diào)蛋白96個(gè)（67個(gè)蛋白下調(diào)倍數(shù)＜0.8）。

01105菌株與H37Rv菌株比較差異表達(dá)蛋白有130個(gè)，表達(dá)上調(diào)蛋白113個(gè)（74個(gè)蛋白上調(diào)倍數(shù)＞1.2）；下調(diào)表達(dá)蛋白27個(gè)（11個(gè)蛋白下調(diào)倍數(shù)＜0.8）。

02166菌株與01105菌株和H37Rv比較共同差異表達(dá)蛋白有86個(gè)，共同表達(dá)下調(diào)69個(gè)（其中Rv3118、Rv2626c和Rv2986c表達(dá)下調(diào)倍數(shù)＜0.5），共同表達(dá)上調(diào)6個(gè)（Rv0234c和Rv2466c表達(dá)上調(diào)倍數(shù)＞1.2），11個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)或上調(diào)不一致表1 67個(gè)蛋白在02166菌株與01105菌株比較中差異表達(dá)，卻在02166菌株與H37Rv比較中無(wú)差異表達(dá)；43個(gè)蛋白在02166菌株與H37Rv比較中差異表達(dá)，卻在02166菌株與01105菌株比較中無(wú)差異表達(dá)。

二、差異表達(dá)蛋白相對(duì)分子質(zhì)量和等電點(diǎn)分布

02166菌株與01105菌株或H37Rv比較無(wú)冗余的差異表達(dá)蛋白共196個(gè)，其理論相對(duì)分子質(zhì)量和等電點(diǎn)分布廣泛，相對(duì)分子質(zhì)量范圍為7.63～326.22；等電點(diǎn)范圍為3.74～12.48。83.4%差異表達(dá)蛋白相對(duì)分子質(zhì)量小于60，77.4%差異表達(dá)蛋白等電點(diǎn)小于7（圖1A，B）。

三、差異表達(dá)蛋白功能分析

根據(jù)巴斯德研究所功能分類(lèi)樹(shù)（http：／／genolist.pasteur.fr／tuberculist）對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行功能分類(lèi)，差異表達(dá)蛋白主要參與脂類(lèi)代謝（1）、中間代謝和呼吸（7）和保守假定蛋白（10）；兩組差異表達(dá)蛋白均無(wú)屬于穩(wěn)定RNAs（4）、插入序列和噬菌體（5）、PE／PPE 家 族 蛋 白 （6）、未 知 功 能 蛋 白 （8）（圖2）。

四、核糖體蛋白和參與脂類(lèi)代謝蛋白

9個(gè)核糖體蛋白在02166菌株與01105菌株和H37Rv比較中均下調(diào)表達(dá)，其中Rv0056、Rv0651、Rv0652、Rv0701和Rv0719為50S核糖體蛋白，Rv2785c、Rv2909c和Rv3458c為30S核糖體蛋白，Rv1630為可能的核糖體蛋白S1。Rv0641（50S核糖體蛋白）和Rv0707（30S核糖體蛋白）僅在02166菌株與01105菌株比較中下調(diào)表達(dá)，Rv2442c和Rv3456c（50S核糖體蛋白）僅在02166菌株與H37Rv比較中分別下調(diào)和上調(diào)表達(dá)。

表1 02166菌株與01105菌株和H37Rv比較表達(dá)上調(diào)或下調(diào)不一致的蛋白

34個(gè)脂類(lèi)代謝（1）蛋白在INH耐藥菌株中差異表達(dá)：Rv3804c、Rv3140、Rv2245、Rv0824c、Rv1925、Rv3130c、Rv3801c、Rv1094、Rv2941和 Rv3800c在02166菌株與01105菌株和H37Rv比較中均下調(diào)表達(dá)；Rv0154c、Rv0222、Rv0242c、Rv0503c、Rv1070c、Rv1492、Rv2187、Rv2247、Rv2831 和 Rv3274c在02166菌株與01105菌株比較中下調(diào)表達(dá)，Rv0873和Rv1181在02166菌株與01105菌株比較中上調(diào)表達(dá)；Rv0231、Rv1074c、Rv1483、Rv2244、Rv2246、Rv2524c、Rv2940c、Rv3720和 Rv3774在02166菌株與H37Rv比較中下調(diào)表達(dá)，而Rv1543、Rv1544和Rv3061c在02166菌株與H37Rv比較中上調(diào)表達(dá)。

討 論

研究表明iTRAQ技術(shù)可用于鑒定大分子、極酸、極堿蛋白，不僅可以彌補(bǔ)雙向電泳不足，而且iTRAQ定量鑒定的蛋白數(shù)量多于經(jīng)典雙向凝膠電泳［10］。本研究采用iTRAQ技術(shù)有效地定量鑒定了耐INH和S Mtb臨床分離株02166、藥物敏感臨床分離株01105和標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv之間的差異蛋白，02166菌株菌體蛋白與01105菌株和H37Rv比較共同差異表達(dá)蛋白有86個(gè)，且差異表達(dá)蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量和等電點(diǎn)分布范圍廣泛。

katG （Rv1908c）、aphC （Rv2428）、kasA（Rv2245）和inhA（Rv1484）基因突變與部分耐INH的 Mtb臨床分離株相關(guān)［11－12］。Rv2245和 Rv1484參與脂肪酸合成，Rv1908c和Rv2428參與解毒作用。本研究發(fā)現(xiàn)，Rv1908c和Rv2245在02166菌株與01105菌株和H37Rv比較中均下調(diào)表達(dá)，Rv2428只在02166菌株與H37Rv比較中下調(diào)表達(dá)，Rv1484在02166菌株與01105菌株和H37Rv比較中均未出現(xiàn)差異表達(dá)。藥物S主要與細(xì)菌核糖體30S亞基單位結(jié)合，抑制蛋白合成。研究表明，rpsL和rrs基因突變與S耐藥相關(guān)［13］，rpsL編碼30S核糖體蛋白S12（Rv0682）。本研究未鑒定到Rv0682，但發(fā)現(xiàn)9個(gè)核糖體蛋白在02166菌株與01105菌株和H37Rv比較中均下調(diào)表達(dá)，其中Rv0056、Rv0651、Rv0652、Rv0701和Rv0719為50S核糖體蛋白，Rv2785c、Rv2909c和Rv3458c為30S核糖體蛋白，Rv1630為可能的核糖體蛋白S1。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn) Rv0056、Rv0652、Rv0701、Rv1630和Rv2785c在Mtb中均為藥物／化合物優(yōu)先作用靶點(diǎn)（http：／／tdrtargets.org／）。但這5個(gè)核糖體蛋白在02166菌株中下調(diào)表達(dá)與Mtb S耐藥的關(guān)系，有待進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

基于雙向電泳的蛋白質(zhì)組學(xué)的研究鑒定到5個(gè)蛋白（Rv1446c、Rv3028c、Rv0491、Rv2971和Rv2145c）在INH耐藥Mtb中上調(diào)表達(dá)［14］。S耐藥株上調(diào)表達(dá)Rv0350、Rv0440、Rv1240、Rv3075c、Rv2971、Rv3028c、Rv2145c、Rv2031c和 Rv0569，進(jìn)一步采用silico docking分析表明只有Rv0350、Rv0440和Rv2971與S呈現(xiàn)有意義的相互作用［15］。因此，Rv2971、Rv3028c和Rv2145c在S耐藥株和INH耐藥株中均上調(diào)表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)Rv0440、Rv2145c和Rv3028c在02166菌株與01105菌株和H37Rv比較中均下調(diào)表達(dá)，Rv0350和Rv2971、Rv1240分別在02166菌株與01105菌株比較中上調(diào)和下調(diào)表達(dá)、Rv3075和Rv2031在02166菌株與H37Rv比較中下調(diào)表達(dá)，Rv0491、Rv0569和Rv1446c在本研究中未鑒定到。這種不同蛋白質(zhì)組學(xué)方法發(fā)現(xiàn)不同差異表達(dá)蛋白的現(xiàn)象較常見(jiàn)［16］。

綜上所述，定量蛋白質(zhì)組學(xué)能有效鑒定到差異表達(dá)蛋白。Rv0234c、Rv2466c、Rv3118、Rv2626c和Rv2986c在02166菌株與01105菌株和H37Rv比較中均差異表達(dá)（下調(diào)倍數(shù)＜0.5或上調(diào)倍數(shù)＞1.2），9個(gè)核糖體蛋白在02166菌株與01105菌株和H37Rv比較中均下調(diào)表達(dá)。這些蛋白與INH和S耐藥關(guān)系還未見(jiàn)報(bào)道，因此，值得進(jìn)一步探討這些蛋白與Mtb INH、S耐藥的關(guān)系，為進(jìn)一步研究結(jié)核分枝桿菌INH、S耐藥機(jī)制提供新靶點(diǎn)。

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