MTA1基因的表達水平與胃癌淋巴結轉移相關性的臨床研究

鄭君華， 王永兵， 顧天來， 羅蕓葆

(上海市浦東新區人民醫院普外科， 上海 浦東新區 201200)

胃癌在我國是最常見的惡性腫瘤之一，死亡率居惡性腫瘤首位[1]。淋巴結轉移是胃癌最主要的轉移途徑，可占70%左右[2]。在胃癌的淋巴結轉移中，許多腫瘤轉移促進基因可能參與這一過程。其中MTA1基因為其中之一。TohY等[3]研究發現，MTA1過表達的胃癌患者更多出現漿膜浸潤、淋巴結轉移及血管受累。為進一步探討其表達水平與胃癌淋巴結轉移關系:

1 資料和方法

1.1 病例和標本來源:全部病例來源于本院2008年至2011年的住院胃癌手術患者。標本來自以上病例。每個病例送檢的病理組織均包括正常胃黏膜、胃癌原發灶及胃癌淋巴結轉移灶。所有標本均經病理診斷確認。

1.2 實驗儀器和材料:Trizol購自美國Invitrogen公司、RT-PCR擴增試劑盒購于 Takara公司;PTC-200 PCR循環儀由美國MJ公司提供。LightCycler(480高通量實時熒光定量PCR系統購自美國Roche Diagnostics公司。凝膠電泳成像系統為美國Bio-Rad公司產品。人MTA1基因擴增引物由Takara公司設計完成。引物上游序列:5'-ACGACATGAACGGCTGTTACTCAC-3';引物下游序列:5'AGCGGCTTGCGTAC-3'。產物長度:442bp基因擴增引物。

1.3 方法

1.3.1 樣本總RNA提取和反轉成cDNA:Trizol法提取細胞總RNA，紫外分光光度儀檢測RNA的質量和濃度。取總RNA 3μg進行逆轉錄反應，步驟按操作說明書進行，逆轉錄的cDNA置-20℃保存。

1.3.2 實時熒光定量 PCR擴增:取cDNA 2μL，加入10×buffer 2.5μL、dNTP 0.5μL、模板1.0μL、上游引物(10μM)1.0μL、下游引物(10μM)1.0μL、Taq 酶 0.5μL、ddH2O 17.0μL，反應總體積合計 25μL。混勻后按下列條件進行PCR反應:94℃ 5min→(94℃40sec→58℃40sec→72℃40sec)×30→72℃ 7min，擴增產物為420bp。

1.3.3 結果判斷:取擴增產物10μL，上樣于1.6%瓊脂糖凝膠，電泳后置0.5 mg/mL溴乙錠染色25 min，用凝膠成像系統分析結果。

1.4 統計學處理:本研究采用SPSS16.0軟件分析，定量資料中符合正態分布和方差齊者，用t檢驗。不符合正態分布或方差不齊者，選用Wilcoxon符號秩檢驗。

2 結果

2.1 正常胃黏膜組織、胃癌原發灶的MTA1mRNA表達數據比較，見表1。

表1 正常胃黏膜組織胃癌原發灶的MTA1mRNA表達比較

正常胃黏膜組織、胃癌原發灶的MTA1mRNA表達相關數據經Wilcoxon符號秩檢驗分析后，有顯著統計學差異(P=0.008＜0.01)。結合前者MTA1mRNA表達的陽性率明顯低于后者，說明胃癌原發灶的MTA1mRNA表達水平遠高于正常胃黏膜組織。

2.2 正常胃黏膜組織、胃癌淋巴結轉移灶的MTA1mRNA表達數據比較，見表2。

表2 正常胃黏膜組織胃癌淋巴結轉移灶的MTA1mRNA表達比較

正常胃黏膜組織、胃癌淋巴結轉移灶的MTA1mRNA表達相關數據經Wilcoxon符號秩檢驗分析后，有顯著統計學差異(P=0.005＜0.01)。結合前者MTA1mRNA表達的陽性率明顯低于后者，說明胃癌淋巴結轉移灶的MTA1mRNA表達水平遠高于正常胃黏膜組織。

2.3 胃癌原發灶、胃癌淋巴結轉移灶的MTA1mRNA表達數據比較，見表3。

表3 胃癌原發灶胃癌淋巴結轉移灶的MTA1mRNA表達比較

胃癌原發灶、胃癌淋巴結轉移灶的MTA1mRNA表達相關數據經Wilcoxon符號秩檢驗分析后，有統計學差異(P=0.045＜0.05)。結合前者MTA1mRNA表達的陽性率低于后者，說明胃癌淋巴結轉移灶的MTA1mRNA表達水平遠高于胃癌原發灶。

3 討論

MTA1基因是1993年 Pencil等[4]利用相差雜交技術首次在鼠乳腺癌細胞株中分離出一新的乳腺癌轉移相關基因，經部分測序證明其在GEBANK/EMBL數據庫沒有同源性核苷酸序列。1994年Toh等[5，6]測定該基因的核苷酸序列及其蛋白產物的氨基酸序列命名為MTA1(metastasis-associated 1，MAT1)，該基因全長為2.2kb，其cDNA全長為2756bp。并利用Southern印跡法找到其對應的人類同源物MTA1。Toh等[5]研究還發現MTA1mRNA在各種正常鼠的器官中，睪丸、腦、肝中則有較高水平的表達，這表明MTA1基因在正常組織細胞中具有一定的生理功能，如細胞的增殖。MTA1蛋白具有磷酸化位點和SH3結合位點，說明MTA1蛋白可與其他一些維持細胞正常功能的蛋白發生作用，在信號傳導通路中發揮一定作用。當處于病理狀態下，過表達MTA1的癌組織具有明顯的高浸潤率和淋巴結轉移率，且更易血行轉移[7]。MTA1基因可能是通過參與信號轉導與基因表達，調控一系列與浸潤轉移有關的蛋白，在癌細胞侵襲和轉移過程中發揮重要作用。

盡管MTA1基因是第一個被發現和證實的一種與腫瘤轉移相關的基因，但其確切作用機制尚不完全清楚，有待于進一步揭示。當前多項研究表明MTA1基因的表達與胃癌淋巴結轉移有一定關系。Toh等[7]采用RT-PCR技術檢測手術切除的胃癌標本中MTA1 mRNA的表達情況，發現34例胃癌組織標本中有13例過表達，且浸潤的深度越深，淋巴結的轉移率越高。周芳[8]應用免疫組化SP法檢測67例胃癌、31例癌旁非典型增生及20例正常胃黏膜組織的MTA1蛋白表達，結果顯示，MTA1蛋白表達與胃癌浸潤程度、分化程度及淋巴結轉移密切相關。

通過本次臨床研究，表明MTA1基因普遍表達于胃癌中。尤其，當胃癌發生轉移時，其表達會明顯提高。雖然正常胃粘膜細胞呈現弱表達，但遠低于癌細胞，這可能與其有一定的生理功能有關。綜合上述，MTA1基因的表達水平與胃癌淋巴結轉移程度存在一定正相關性，說明該基因在胃癌淋巴結轉移中可能起著重要的作用，因此MTA1基因表達量可作為評價腫瘤惡性程度的潛在指標。

[1]陳孝平，石應康，段德生等.外科學[M].北京:人民衛生出版社，2002.573

[2]陳灝珠.實用內科學[M].北京:人民衛生出版社，2005.1883

[3]Toh Y，Oki E，Oda S，et al.Overexpression of the MTA1 gene in gastrointestinal carcinomas:correlation with invasion and metastasis[J].Int Cancer，1997，74(4) ∶459

[4]Pencil SD，Toh Y，Nicolson GL.Candidate metastasis associated genes of the rat 13762NF mammary adenocarcinoma[J].Breast Cancer Res Treat，1993，25(2):165-174.

[5]Toh Y，Pencil SD，Nicolson GL.A novel candidate metastasis-associate gene，mta1，differentially expressed in highly metastatic mammary adenocarcinoma cell lines[J].Biol Chem，1994，269(37):22958-22963.

[6]Toh Y，Oki E ，Oda S ，et al.Analysis of the complete sequence of the novel metastasis-associated candidate gene，mta 1，differentially expressed in mammary adenocarcinoma and breast cancer cell lines[J].Gene，1995，159(1):97-104.

[7]Ahoney MG，Simpson A，Jost M，et al.Metastasis-associated protein(MTA1)1 enhances migration，invasion and anchor age-independent survival of immortalized human keratinocytes[J].Oncogene，2002，21(14):2161-2170

[8]周芳.MTA1蛋白在胃癌中的表達及臨床意義[J].山東醫藥，2008，48(25):22-23.