六星黑點豹蠹蛾求偶行為與性信息素產(chǎn)生和釋放的時辰節(jié)律

劉金龍，荊小院，楊美紅，宗世祥，駱有慶，范麗華，劉紅霞，張金桐，*

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)化學(xué)生態(tài)研究所，太谷 030801;2.北京林業(yè)大學(xué)省部共建森林培育與保護教育部重點實驗室，北京 100083)

六星黑點豹蠹蛾Zeuzera leuconotum Butler是一種重要的園林害蟲［1］，俗稱截桿蟲。主要危害花灌木和喬木的枝梢，可造成林木死亡［2］，嚴重影響園林綠化效果。許多昆蟲的發(fā)育、行為和代謝均受時辰節(jié)律的控制［3］，與其內(nèi)分泌系統(tǒng)有關(guān)［4-7］，其中昆蟲性信息素的產(chǎn)生和釋放是昆蟲繁殖過程中產(chǎn)生性行為的重要環(huán)節(jié)，因此研究其時辰節(jié)律對于性信息素的提取和鑒定有重要的參考價值，也是利用其性信息素監(jiān)測和防治害蟲研究中的重要內(nèi)容。目前，關(guān)于六星黑點豹蠹蛾的性信息素產(chǎn)生與釋放的時辰節(jié)律尚未見報道，近年來，作者對其生殖行為進行了全面觀察［8］，并利用腺體提取，瓶內(nèi)收集、觸角電位技術(shù)以及林間處女蛾引誘試驗等方法，對六星黑點豹蠹蛾產(chǎn)生和釋放性信息素的時辰節(jié)律進行了研究，為進一步開展性信息素化學(xué)組分的提取、鑒定，以及應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試昆蟲

六星黑點豹蠹蛾的老熟幼蟲和蛹采自山東東營市黃河路兩旁綠化帶白蠟樹。剪下白蠟樹受害枝條，保留長度為30—60cm的有蟲樹枝，帶回養(yǎng)蟲室(2m×2.5m×2m)，綁縛于橫掛的鐵絲上，模擬樹體狀態(tài)飼養(yǎng)，養(yǎng)蟲室光周期L∶D=14∶10，光期5:00開始，19:00結(jié)束，溫度19—32℃，相對濕度75%—85%，保持自然通風(fēng)，待其羽化，鑒別雌雄后分別置于養(yǎng)蟲籠(50cm×50cm×60cm)，保證雌蛾全部為處女蛾，并且明確蟲齡(成蟲羽化后至第1個暗期結(jié)束視為1日齡)。

1.2 六星黑點豹蠹蛾求偶行為及其時辰節(jié)律的觀察

在自然條件下的養(yǎng)蟲室內(nèi)，將10頭同日齡處女雌蛾放養(yǎng)于同一紗罩養(yǎng)蟲籠(80cm×80cm×80cm)中，籠內(nèi)置插在水瓶中的新鮮白蠟樹枝，底部鋪一層白蠟樹葉，供雌蛾飛舞或爬行，觀察雌蛾的求偶行為及其時辰節(jié)律。據(jù)觀察，六星黑點豹蠹蛾交配均在暗期［8］，故只在暗期觀察和記錄雌蛾求偶情況，以紅色燈為觀察光源。重復(fù)3次。在暗期每隔1h觀察1次，連續(xù)觀察6d，記錄求偶頭數(shù)，按每2h的求偶率進行統(tǒng)計分析。

1.3 性信息素產(chǎn)生與釋放時辰節(jié)律的測定

利用雄蛾的觸角電位反應(yīng)(EAG)檢測雌蛾性信息素產(chǎn)生和釋放的時辰節(jié)律。性信息素提取物的制備分為腺體提取和瓶內(nèi)收集兩種方法。以雄蛾對腺體提取物的EAG值表示性信息素的產(chǎn)生量;對瓶內(nèi)收集物的EAG值表示性信息素的釋放量。

1.3.1 腺體提取

通過對雌蛾腹尖的掃描電鏡與組織切片的觀察，得知其性信息素分泌腺位于第8—9腹節(jié)之間的節(jié)間膜上。根據(jù)其生殖行為特征［8］，六星黑點豹蠹蛾在進入暗期5—8 h交配率最高，故選擇在暗期5h提取其腺體。提取時，用手輕輕擠壓雌蛾腹部，待其第8—9腹節(jié)完全伸出腹尖，用眼科手術(shù)剪快速剪下，放入5mL的具塞尖底試管中，加入0.5mL重蒸正己烷，蓋緊瓶塞，室溫下浸泡1h后，抽取提取液并轉(zhuǎn)移至樣品管中，密封，置于冰箱內(nèi)(-4℃以下)貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 瓶內(nèi)收集

參照張金桐［9］和李連昌［10］報道的方法收集雌蛾釋放的性信息素。將不同處理下的處女雌蛾放入具磨口玻璃塞的25 mL潔凈干燥的雞心瓶中，1瓶1蟲，瓶塞與磨口之間加一細銅絲，既可保障瓶內(nèi)雌蛾正常呼吸，又可防止瓶中雌蛾釋放的性信息素向外擴散。按照實驗設(shè)計要求，在不同的時辰將雞心瓶從培養(yǎng)條件下取出，立刻放入冰箱(-10℃)，冷凍15min，小心取出雌蛾，向瓶內(nèi)加入2mL重蒸正己烷，加塞后反復(fù)搖動，以便將瓶壁上和空氣中的性信息素充分洗脫。每一處理，重復(fù)5頭雌蛾。合并收集液，經(jīng)氮吹濃縮至一定體積后轉(zhuǎn)移到樣品管中，密封，置于冰箱內(nèi)(-4℃以下)貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 觸角電位測定

觸角電位測定儀由荷蘭Syntech公司生產(chǎn)。測定條件:連續(xù)氣體流量為124mL/min，刺激氣體流量為20mL/min，刺激時間為0.1s，刺激間隔60 s。

參照張金桐報道的方法［9］，取2日齡未交配雄蛾，將觸角從基部剪下，用刀片去掉觸角兩端的角質(zhì)層后，用Beadle-Ephrussi生理液將其兩端濕潤，分別與參比電極和記錄電極相連，使電路導(dǎo)通，微調(diào)觸角與電極之間的連接使基線平穩(wěn)，即可開始測定。先將濾紙條(2cm×0.5cm)縱折一下，部分插入巴斯德管端口，用微量注射器吸取一定量待測試液，滴在濾紙條上，待溶劑揮發(fā)后將其完全推入，進行觸角電位測定。

測定時，各處理提取液的測定順序是隨機的。為消除觸角因適應(yīng)而導(dǎo)致的偏差，在每一樣品測定前后，均以20μL正己烷為空白對照，分別測量空白值，取其平均值為該樣品的平均空白值，以樣品的平均反應(yīng)值減去平均空白值，得觸角對樣品的絕對反應(yīng)值。樣品均在同一根觸角上平行測定3次，計算測定的平均值。每只雄蛾只取用1根觸角。共測試6根觸角為重復(fù)，進行統(tǒng)計分析。

1.3.4 雄蛾對不同性信息素濃度的反應(yīng)曲線的測定

按1.3.1方法，選取20頭處女雌蛾，將腺體依次剪下，置于5mL具塞尖底試管中，加入1mL重蒸正己烷浸泡1h后，抽取750μL提取液于另一試管，氮吹濃縮至300μL，得濃度為1 FE/20μL(FE:female equivalent，雌當(dāng)量)正己烷溶液。以此為母液分別配制10，1，10-1，10-2，10-3，10-4，10-5FE/20μL的樣品溶液，其中10 FE/20μL是將200μL母液氮吹濃縮至20μL制成。以20μL正己烷為對照，按照濃度由低到高的順序進行觸角電位測定。

1.3.5 性信息素產(chǎn)生與釋放的日動態(tài)規(guī)律

通過檢測不同日齡處女雌蛾進入暗期后5h所產(chǎn)生和釋放的性信息素量來確定日動態(tài)節(jié)律。腺體提取時，以100μL正己烷提取5頭同一日齡雌蛾的腺體，得濃度為1FE/20 μL的性信息素提取液。同時取5頭處女雌蛾分別進行單蟲瓶內(nèi)收集，亦制備成1FE/20 μL的性信息素收集液。每個處理重復(fù)3次。以正己烷為對照。

1.3.6 性信息素產(chǎn)生與釋放的時辰節(jié)律

通過檢測2日齡處女雌蛾在不同時辰所產(chǎn)生和釋放的性信息素量來確定時辰節(jié)律。分別于光期2，6，10，14h 和暗期1，2，3，4，5，6，7，8，9h 選取 5 頭 2 日齡處女雌蛾進行腺體提取，同上制備成 1FE/20 μL 的性信息素提取液。同時在各個時辰選取5頭雌蛾分別進行單蟲瓶內(nèi)收集，同上制備成1FE/20 μL的性信息素收集液。每個處理重復(fù)3次。以正己烷為對照。

1.4 林間處女蛾誘蛾試驗

在山東東營市黃河路綠化帶進行林間誘蛾試驗。采用三角形誘捕器(黑色塑料瓦楞板制成，截面30cm×30cm×30cm，棱長40cm)，將涂有粘蟲膠的蠟紙板插入誘捕器內(nèi)。將1頭2日齡處女雌蛾裝入自制小紗籠(5cm×5cm×5cm)內(nèi)，由細鐵絲從誘捕器上棱中間垂下，距粘膠面約2cm。誘捕器懸掛在白蠟樹枝上，距地面3—4m，以僅有粘蟲膠板的誘捕器為對照，設(shè)3個重復(fù)，誘捕器間距20m以上，隨機順序布置。每2h記錄1次所誘捕的雄蛾數(shù)量，計算占全天誘蛾總量的百分率，并統(tǒng)計分析。

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件中單因素方差分析(One-Way ANOVA)進行分析處理，用Duncan法檢驗差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 六星黑點豹蠹蛾求偶行為及其時辰節(jié)律

2.1.1 雌蛾的求偶行為

經(jīng)過林間及觀測籠內(nèi)的觀察，六星黑點豹蠹蛾于暗期進行求偶和交配活動，其余時間在樹干或樹枝隱蔽處靜伏。靜伏時，雌蛾翅呈屋脊?fàn)罡采w于腹部，腹尖偶爾套縮于第7腹節(jié)內(nèi)，而大部分時間腹尖暴露于體外。在暗期5—7h，雌蛾出現(xiàn)求偶行為，求偶過程表現(xiàn)為:雌蛾由靜伏變?yōu)樵谥Ω缮纤奶幣绖樱瑑沙嵛⑾騼蓚?cè)外伸且伴隨輕微振動;爬行片刻后，兩翅振動速度明顯加快，但不起飛，爬行范圍也逐漸減小，腹部末端翹起，第8腹節(jié)和產(chǎn)卵器伸直;原地劇烈振翅，第8—9腹節(jié)繼續(xù)伸直，最終向上翹起或左右擺動，第8—9腹節(jié)節(jié)間膜已完全伸展，若無干擾或交配，可保持30min左右。在此期間，被隔離的雄蛾表現(xiàn)為:觸角豎立，腹部擺動，或迅速爬行，或定向飛往雌蛾，在雌蛾周圍振翅、爬行，腹部側(cè)向左右彎曲，不時伸出抱握器，作出企圖交配的姿態(tài)。表明求偶是雌性成蟲的一種自發(fā)性行為，也是完成其生殖交配的必需過程，同時求偶也具有一定的時間性。因此本研究以腹部上翹、產(chǎn)卵器伸直并伴隨著振翅作為標(biāo)準，判斷雌蛾是否求偶。

圖1 不同日齡雌蛾的求偶百分率Fig.1 The percentages of calling female Z.leuconotum of different ages

2.1.2 六星黑點豹蠹蛾日齡與求偶率的關(guān)系

在自然條件下的養(yǎng)蟲室內(nèi)，不同日齡雌蛾求偶率的統(tǒng)計結(jié)果如圖1所示。

可以看出，雌蛾在羽化當(dāng)天即可發(fā)生求偶行為，求偶率為43.3%;2—3日齡雌蛾求偶率最高，分別為86.7%和73.3%，與其它日齡求偶率相比差異顯著(P＜0.05);4日齡求偶率明顯下降，到6日齡僅有6.7%的雌蛾出現(xiàn)求偶行為。表明雌蛾在羽化1d后達性成熟，求偶行為在羽化后1—3d表現(xiàn)強烈，雌蛾日齡對求偶率有影響。六星黑點豹蠹蛾雌蛾成蟲期平均為6d，由此可推測求偶行為與雌蛾的生理活力相關(guān)，雌蛾的發(fā)育狀況是求偶行為的內(nèi)在制約因子［11］。

2.1.3 求偶行為的時辰節(jié)律

六星黑點豹蠹蛾的求偶率不僅受到日齡的影響，而且在同一天內(nèi)不同時辰求偶率也不一致。經(jīng)觀察其求偶行為僅在暗期，而且有時辰規(guī)律，因此在暗期觀察和記錄各日齡處女雌蛾的求偶行為，按每2h的求偶率進行統(tǒng)計分析，分析結(jié)果列于表1。

表1 六星黑點豹蠹蛾雌蛾求偶行為的時辰節(jié)律Table 1 The calling rhythm of female Z.leuconotum

可以看出，雌蛾求偶行為最早發(fā)生在進入暗期3h內(nèi)，主要是3—6日齡雌蛾;最晚發(fā)生在暗期7—9h，主要是1—2日齡雌蛾;最大求偶率出現(xiàn)在第2和3日齡的暗期5—7h之間;各日齡雌蛾求偶率隨時辰有所變化，從暗期開始到結(jié)束均表現(xiàn)為求偶率先低后高再逐漸減少的趨勢，其中1—3日齡均在進入暗期5—7h期間求偶率最大，與其它時辰差異達到顯著水平(P＜0.05)，說明六星黑點豹蠹蛾求偶行為有一定的時辰節(jié)律。由表1還可以看出，求偶時間隨日齡的增加逐漸提前，為進一步了解各日齡求偶時間的差異，經(jīng)加權(quán)平均法計算出求偶高峰期，以進入暗期的時間(加權(quán)平均值±標(biāo)準差)表示:1—6日齡雌蛾求偶高峰期依次為(5.92±1.21)h，(5.68±2.22)h，(5.04±1.37)h，(4.79±0.68)h，(4.57±0.83)h，(4.50±0.58)h。表明，六星黑點豹蠹蛾的求偶行為存在時辰節(jié)律，而且與雌蛾日齡有關(guān)，這一點與其交配行為的時辰節(jié)律［8］具有一致性。

2.2 性信息素產(chǎn)生與釋放的時辰節(jié)律

2.2.1 雄蛾對性信息素提取物的EAG反應(yīng)

以2日齡處女雌蛾和雄蛾為測試對象，進行觸角電位測定。測得雄蛾對不同濃度性信息素分泌腺提取物的觸角電位反應(yīng)如圖2。

可以看出，六星黑點豹蠹蛾雄蛾對性信息素提取物有較強的觸角電位反應(yīng)，其中對樣品溶液能產(chǎn)生觸角電位的起始濃度為 10-4FE/20μL，反應(yīng)閾值在 10-4—10-2FE/20μL之間，而在 10-1—101FE/20μL之間觸角電位反應(yīng)較強，可見雄蛾觸角對此濃度范圍的提取物反應(yīng)敏感。因此本研究選用1FE/20μL的腺體提取物作為標(biāo)準刺激濃度，觸角電位高于閾值，但也不太強，不會因多個樣品的重復(fù)測試而引起觸角敏感性降低。

2.2.2 性信息素產(chǎn)生與釋放的日動態(tài)規(guī)律

由圖3的觸角電位測定結(jié)果可以看出，雄蛾對1日齡處女雌蛾的腺體提取物和瓶內(nèi)收集物均有電生理反應(yīng);對2日齡處女雌蛾的反應(yīng)最為強烈(5.1 mV，3.9 mV)，與其它日齡達差異顯著水平(P＜0.05);對3日齡的反應(yīng)也較高，但隨后明顯降低。結(jié)果表明:羽化當(dāng)晚雌蛾體內(nèi)即可產(chǎn)生性信息素，并向體外釋放，但性信息素量較少;羽化第2天產(chǎn)生和釋放的性信息素量最多，以后逐日下降。這個結(jié)果與求偶率隨日齡的變化規(guī)律是一致的，推測六星黑點豹蠹蛾羽化后即性成熟，在其召喚求偶時，通過釋放體內(nèi)產(chǎn)生的性信息素引誘雄蛾來完成交配行為。

圖2 雄蛾對不同濃度性信息素粗提物的EAG反應(yīng)曲線Fig.2 EAG response(mean ±SD)of male to female sex pheromone content

2.2.3 性信息素產(chǎn)生與釋放的時辰節(jié)律

雄蛾對不同時辰處女雌蛾的觸角電位反應(yīng)測試結(jié)果見圖4，可以看出，雄蛾對暗期3h之前的腺體提取物反應(yīng)逐漸增強，但是對瓶內(nèi)收集物的反應(yīng)很弱;雄蛾對暗期4h的腺體提取物反應(yīng)明顯增強，且對暗期5h時提取物的反應(yīng)最為強烈，之后逐漸減弱。對暗期4h時瓶內(nèi)收集物有反應(yīng)，隨后逐漸增強，而且對暗期6h時收集物的反應(yīng)最為強烈，之后逐漸減弱。結(jié)果表明，雌蛾腺體中的性信息素含量從進入暗期后逐漸增加，在暗期5h時含量最大，隨后逐漸減少，而雌蛾釋放性信息素從暗期4h開始，至暗期6h時達到高峰，這也就說明了雌蛾腺體性信息素含量變化曲線(圖4)在暗期4h時出現(xiàn)拐點以及從5h到9h逐漸減少的原因。由此可見，六星黑點豹蠹蛾雌蛾存在有性信息素產(chǎn)生和釋放的時辰節(jié)律:產(chǎn)生量的峰值在暗期5h，而釋放量的峰值在暗期6h，與求偶行為的時辰節(jié)律存在一致性。

圖3 雄蛾對不同日齡處女雌蛾的腺體提取物和瓶內(nèi)收集物的觸角電位反應(yīng)(暗期5h)Fig.3 The EAG response(mean ± SD)of male to the gland extract and collection sex pheromone of 1—6 old virgin females at the 5th hour into scotophase

圖4 六星黑點豹蠹蛾性信息素產(chǎn)生與釋放的時辰節(jié)律(2日齡)Fig.4 Circadian rhythm of the sex pheromone production and release(2-d-old)

2.3 林間誘捕試驗結(jié)果

利用處女蛾不同時辰的誘蛾量也可以反映雌蛾釋放性信息素的時辰節(jié)律。由2日齡處女雌蛾在林間不同時間的誘蛾百分率(表2)可以看出，在光期雌蛾不能誘到雄蛾，進入暗期誘蛾量逐漸增加，誘蛾高峰出現(xiàn)在0:00—2:00(暗期5—7h)期間。進一步證明六星黑點豹蠹蛾雌蛾產(chǎn)生和釋放性信息素存在時辰節(jié)律，而且具有一致性。

3 結(jié)論與討論

求偶是昆蟲完成其生殖交配的必需過程，是一種自發(fā)行為，通常呈現(xiàn)出一定的晝夜節(jié)律性，并且這種節(jié)律受到外界因子的調(diào)節(jié)［18］。對六星黑點豹蠹蛾求偶行為的研究表明，處女雌蛾求偶率受日齡的影響，其中2日齡雌蛾求偶率最高，平均為86.7%。同日齡雌蛾的求偶行為存在明顯的時辰節(jié)律，求偶高峰期出現(xiàn)在進入暗期5—7 h。從不同日齡求偶行為時辰節(jié)律的比較分析可知，雌蛾的求偶行為具有一定的時序性:隨著蟲齡的增加，其求偶時間逐漸提前，求偶高峰期前移，但求偶率逐漸減小。這一現(xiàn)象與其它鱗翅目昆蟲，如小地老虎Agrotis ypsilon［12］、豆野螟 Maruca vitrata［13］、榆木蠹蛾 Holcocerus vicarius［14］、Lonomia oblique［15］等的求偶行為相似，Swier認為老齡處女雌蛾通過提前求偶的時間來提高與幼齡處女蛾的競爭能力，以增加對雄蛾的引誘幾率［16］，六星黑點豹蠹蛾求偶行為也符合這種適應(yīng)性的生殖策略。

表2 2日齡處女雌蛾在林間不同時間的誘蛾試驗(山東東營，2011年6月)Table 2 Percentage of the male trapped by 2-day-old virgin female moth during different time of the day in the field(Dongying，Shandong;June，2011)

昆蟲求偶時，通過向體外釋放性信息素以引誘同種異性前去交配。許多鱗翅目昆蟲性信息素的產(chǎn)生和釋放存在時辰節(jié)律，如大袋蛾 Clania variegate［19］、棗粘蟲 Ancylis sativa［10］、小線角木蠹蛾 Holcocerus insularis［9］、甜菜夜蛾Spodoptera exigua［21］、沙棘木蠢蛾Holcocerus hippophaecolus［20］等，這些蛾類的性信息素產(chǎn)生和釋放僅在一天的某一個時間段。本文試驗結(jié)果表明，六星黑點豹蠹蛾羽化當(dāng)晚雌蛾體內(nèi)即可產(chǎn)生性信息素，并且向體外釋放，羽化第2d產(chǎn)生和釋放的性信息素量最多，以后逐日下降;在一天中，雌蛾腺體中的性信息素從進入暗期后逐漸增加，在暗期5h時量最大，隨后逐漸減少，而釋放性信息素從暗期4h開始，至6h時達到高峰。處女雌蛾林間誘蛾試驗表明:誘蛾高峰出現(xiàn)在暗期5—7h期間，而且2日齡處女雌蛾的誘蛾效果最好［8］，這些結(jié)果都驗證了六星黑點豹蠹蛾性信息素的釋放也存在著一定的時辰節(jié)律。

Haynes等［6］和Pope等［22］通過對于Platyptilia carduidoctyla和 Heliothis zea的生殖行為生理學(xué)的研究證實，許多昆蟲的羽化、交配和性信息素的產(chǎn)生與釋放均存在協(xié)同性。Mazor＆Dunkelblum總結(jié)了許多鱗翅目昆蟲的求偶交配行為與性信息素的產(chǎn)生和釋放的關(guān)系［17］，都表現(xiàn)出這些方面節(jié)律上的一致性。六星黑點豹蠹蛾雄蛾對性腺體提取和瓶內(nèi)收集性信息素所產(chǎn)生的EAG反應(yīng)曲線(圖4)表明，2日齡雌蛾性信息素產(chǎn)生量的峰值在暗期5 h，釋放量的峰值在暗期6h，而求偶高峰期在進入暗期5.68h，三者之間存在著一定的一致性。性信息素的產(chǎn)生略提前于釋放，這個結(jié)果與Delisle等對Pseudaletia unipuncta以及Snir等對Chrisodeixis chalcites的研究結(jié)果相似［23-24］，推測形成這種差異的可能原因是，雌蛾求偶行為需要體內(nèi)性信息素達到一定數(shù)量才可以啟動，也反映出體內(nèi)合成性信息素早于求偶交配行為。

不少學(xué)者認為昆蟲生殖行為的時辰節(jié)律是通過內(nèi)分泌系統(tǒng)進行控制的［4-7］。本研究表明，雌蛾日齡對其時辰節(jié)律均有明顯的影響。由于各日齡雌蛾個體發(fā)育狀況和性成熟程度不一致，可見六星黑點豹蠹蛾的時辰節(jié)律首先是由其內(nèi)在的生理因素決定的。值得注意的是昆蟲的行為節(jié)律也受到環(huán)境溫度、光周期、濕度等生態(tài)因子的影響［25］。一天內(nèi)雌蛾求偶和性信息素產(chǎn)生與釋放的高峰期是由時間決定，還是由光周期或溫度決定，或者是由這些生態(tài)因子協(xié)同作用決定的，尚需做進一步的研究。

了解性信息素產(chǎn)生和釋放的時辰節(jié)律，有利于把握提取性信息素的最佳時機，為性信息素的化學(xué)鑒定提供可靠依據(jù)。六星黑點豹蠹蛾求偶行為及其性信息素的產(chǎn)生和釋放的時辰節(jié)律是其生殖行為的重要環(huán)節(jié)，也是將來利用其性信息素進行防治實踐所涉及的理論基礎(chǔ)和依據(jù)。

致謝:在采集試驗用蟲和林間試驗期間，山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植保學(xué)院周成剛教授和山東東營勝利油田管理局公共事業(yè)部楊玉武先生提供幫助，特此致謝。

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