牛磺酸對大鼠心肌缺血再灌注后肝損傷的保護作用

嵇月娥施文艷楊 儉

（1 江蘇建康職業學院實驗中心，江蘇 南京 211800；2 南京醫科大學藥學院，江蘇 南京 211800）

牛磺酸對大鼠心肌缺血再灌注后肝損傷的保護作用

嵇月娥1施文艷1楊 儉2

（1 江蘇建康職業學院實驗中心，江蘇 南京 211800；2 南京醫科大學藥學院，江蘇 南京 211800）

目的 觀察牛磺酸對大鼠心肌缺血再灌注肝損傷時超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）含量和磷脂酶A2（PLA2）的影響。方法 大鼠隨機分4組（n=10），對照組、牛磺酸低、中、高劑量組，采用大鼠冠狀動脈結扎再通的方法，觀察牛磺酸對大鼠心肌缺血再灌注后血清和肝組織勻漿SOD、NO和PLA2的影響。結果 牛磺酸各劑量組與對照組相比，血清和肝組織勻漿SOD含量明顯提高，NO含量和血清PLA2濃度明顯降低。結論 牛磺酸能夠通過清除自由基，降低NO及自由基損傷，降低PLA2而減輕炎癥反應和急性損傷，對心肌缺血再灌注肝損傷有一定的保護作用。

缺血再灌注；肝損傷；牛磺酸

心臟缺血/再灌注（I/R）在臨床較多見，不僅引起心肌損傷、壞死，還可引起全身炎癥反應，導致肺、肝、腎等器官的繼發性損傷，其中肝損傷是非常重要的臟器損傷。牛磺酸是體內含量最豐富的氨基酸，已有實驗[1-3]表明：牛磺酸具有清除氧自由基、抗脂質過氧化，調節細胞內鈣穩態和穩定細胞膜等作用，是機體內源性細胞保護和抗損傷物質。本實驗是觀察牛磺酸對大鼠心肌缺血再灌注肝損傷時超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）含量和磷脂酶A2（PLA2）的影響，進一步探討牛磺酸對大鼠心肌缺血再灌注肝損傷保護的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

SD大鼠由南京醫科大學實驗動物中心提供；SOD、NO含量測定試劑盒購于南京建成生物工程研究所；ELISA檢測試劑盒購買于上海西唐生物科技有限公司。

1.2 方法

大鼠40只，雌雄不限，體質量180～250g，隨機分4組（n=10），對照組、牛磺酸低、中、高劑量組，分別腹腔注射生理鹽水、牛磺酸100、200、400mg/kg，5mL，30min后腹腔注射20%烏拉坦5mL/kg麻醉，采用大鼠冠狀動脈結扎再通的方法，冠狀動脈結扎30min后剪開結扎線再灌注2h，取頸動脈血，分離血清，迅速摘取肝臟，生理鹽水沖洗，剪碎后進行組織勻漿，配成10%勻漿液，4000r/min離心20min，取上清液檢測。

1.3 SOD、NO和PLA2測定

SOD測定：按試劑盒說明書操作步驟，制備空白管、測定管，550nm波長處蒸餾水調零進行比色，計算SOD含量。NO測定：按試劑盒說明書步驟操作，制備標準管、測定管和空白管，540nm波長處空白管調零進行比色，計算NO含量。PLA2測定：按試劑盒說明書，稀釋標準品，設空白孔、標準孔、待測樣品孔。450nm波長處空白孔調零測各孔的吸光度（OD值），計算樣品濃度（μg·L）。

1.4 統計學分析

2 結 果

2.1 牛磺酸對大鼠心肌缺血再灌注后血清SOD、NO和PLA2的影響：與對照組相比，牛磺酸各劑量組SOD含量明顯升高（P＜0.01），NO含量明顯降低（P＜0.05，P＜0.01），PLA2濃度有明顯降低（P＜0.01），見表1。

表1 各組大鼠血清SOD、NO和PLA2含量

2.2 牛磺酸對大鼠心肌缺血再灌注后肝組織勻漿SOD、NO和PLA2的影響：與對照組相比，牛磺酸各劑量組SOD含量明顯升高（P＜0.01），NO含量在牛磺酸中、高劑量組明顯降低（P＜0.01），PLA2濃度較對照組有明顯降低（P＜0.01），見表2。

表2 各組大鼠肝組織勻漿SOD、NO和PLA2含量

3 討 論

心肌缺血再灌注可引起肺、腎、肝、腦等多組織器官的繼發性損傷，研究認為在其發生機制中起重要作用的包括氧自由基的生成、鈣超載、白細胞和細胞因子等[2-4]。組織在缺血再灌注時釋放大量氧自由基，引起脂質過氧化反應，以及細胞鈣超載和細胞因子大量釋放入血至各組織器官，引起白細胞浸潤，炎癥介質釋放等，引起各組織器官細胞膜、線粒體、溶酶體等生物膜通透性增加，最終造成組織損傷。超氧化物歧化酶（SOD）是體內重要的抗氧化酶，當體內自由基生成增多時，它與超氧陰離子反應生成過氧化氫，再由過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化酶轉變成為水， 清除自由基，可對抗因氧自由基對細胞造成的損傷，它是體內清除自由基的首要物質。本實驗中牛磺酸各劑量組均可明顯提高大鼠心肌缺血再灌注后血清和肝組織中SOD活性，減少過量NO的產生，從而減輕缺血再灌注引發的自由基對肝組織的損傷。

磷脂酶A2（PLA2）是一種水解酶，亦是花生四烯酸、前列腺素及血小板活化因子等生物活性物質生成的限速酶，所產生的脂質介質在炎癥和組織損傷時起關鍵性作用，參與炎癥及急性損傷的致病過程。PLA2在缺血再灌注的肝損傷過程中發揮了重要的作用[4-5]。本實驗中牛磺酸可以降低大鼠心肌缺血再灌注血清和肝組織中PLA2濃度，減輕肝損傷。

本實驗發現牛磺酸在心肌缺血再灌注損傷中的運用，可以提高血清和肝組織SOD含量，降低NO含量和PLA2濃度，提示牛磺酸可以減輕大鼠心肌缺血再灌注對肝組織的損傷。其作用機制可能是通過清除自由基、防止脂質過氧化、提高機體抗氧化能力、改善細胞內鈣超載、抑制過量NO生成、抑制PLA2相關的炎癥反應，減少組織的急性損傷，從而對大鼠心肌缺血再灌注肝損傷起到保護作用。

[1] 王銀環,董淑云,張娜,等.牛磺酸對大鼠肢體缺血再灌注后肝臟損傷的保護效應[J].第四軍醫大學學報,2006,27(22):2047-2050.

[2] 門秀麗,張連元,孫樹勛,等.牛磺酸對大鼠肢體缺血/再灌注后肺組織損傷的保護作用[J].中國應用生理學雜志,2004,20(3):229-231.

[3] 鞠浩爽,尚躍豐,羅鵬,等.牛磺酸增強漸增再灌注心肌保護作用的實驗研究[J].中國藥理學通報,2012,28(6):810-814.

[4] 張金池,鄭國富,吳明祥,等.異甘草酸鎂對大鼠肢體缺血再灌注肝損傷時磷脂酶A2的影響[J].中華肝臟病雜志,2012,20(7):537-541.

[5] 徐勇,涂植光.兩類磷脂酶A2抑制劑對大鼠內毒素性肝損傷的保護作用[J].國際檢驗醫學雜志,2007,28(10):907-909.

R542.2+2

B

1671-8194（2013）34-0069-02