慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T細胞亞群分析及與病毒載量相關性研究

朱蘇蘭，魯 陳，熊德琴，李左娟（.江西省贛州市信豐縣贛南醫學院第二附屬醫院 4600；.江西省南昌市第九醫院 000；.江西省兒童醫院，南昌 000）

乙型病毒性肝炎的發病機制并不是由乙型肝炎（下稱乙肝）病毒（HBV）直接引起肝細胞損害，目前認為細胞免疫在清除病毒、引起肝損害中起了重要作用［1］。T淋巴細胞是主導機體免疫功能最主要的免疫細胞之一，它可直接針對已感染HBV的肝細胞膜上所表達的病毒抗原產生免疫反應，并對病毒的清除產生作用。本試驗旨在探討乙肝患者周圍血T淋巴細胞亞群以及其與乙型肝炎病毒復制的關系，現將檢測結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年12月至2012年3月南昌市第九醫院住院及門診患者診斷為慢性乙肝病例92例，臨床診斷標準參照2010年全國病毒件肝炎會議修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》［2］。無合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染的實驗室證據；排除酒精性肝炎、自身免疫性肝炎等其他肝炎；排除腫瘤、自身免疫性疾病、其他感染性疾病。健康對照組20例來源于同一時期健康體檢人群。

1.2 方法

1.2.1 患者分組 所有患者分為3組：（1）HBV攜帶組30例，男12例，女18例；慢性乙肝患者35例，其中男24例，女11例；慢性重型乙肝患者組27例，其中男18例，女9例。健康對照組20例，其中男5例，女15例。入選患者根據患者外周血病毒量分為以下3組：（1）DNA陰性組（16例），HBV DNA為陰性的患者。（2）低病毒載量組（31例），HBV DNA為1×103～1×105的患者。（3）高病毒載量組（45例），HBV DNA為1×106～1×108的患者。

1.2.2 外周血T淋巴細胞亞群檢測 采用流式細胞術測定外周血T淋巴細胞表面標志。儀器購自美國BD公司，型號為FACSCalibur。試劑由BD公司生產。

1.2.3 血清HBV病毒載量測定 采用熒光定量聚合酶鏈反應進行檢測法。儀器為美國ABI7300型基因擴增儀，試劑由杭州艾康生物有限公司提供，嚴格按說明書操作，結果大于1.0×103copy/mL為陽性。

1.3 統計學方法 組間比較采用t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 健康對照組與HBV感染者外周血T淋巴細胞亞群檢測結果 見表1。統計結果顯示，健康對照組與HBV攜帶者組比較，T淋巴細胞亞群結果，差異均無統計學意義（P＞0.05）；健康對照組、HBV攜帶者組與慢性乙肝患者組相比只有CD4＋差異有統計學意義；健康對照組、HBV攜帶者組與慢性重型乙肝組比較，T淋巴細胞亞群結果比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；慢性乙肝患者組與慢性重型乙肝比較只有CD4＋差異有統計學意義。

表1 健康對照組與HBV感染者外周血T淋巴細胞亞群結果（±s）

表1 健康對照組與HBV感染者外周血T淋巴細胞亞群結果（±s）

注：與健康對照組比較，aP＜0.05；與 HBV攜帶組比較，b P＜0.05；與慢性乙肝患者組比較，c P＜0.05。

組別 n CD4＋（%） CD8＋（%） CD4＋/CD8＋20 47.2±5.8 34.3±5.3 1.40±0.46 HBV攜帶組 30 46.3±5.6 34.0±5.9 1.35±0.37慢性乙肝患者組 35 43.3±6.2ab 37.2±6.8 1.17±0.48慢性重型乙肝組 27 38.8±6.8abc 40.8±7.8ab 0.95±0.42健康對照組a

2.2 健康對照組和各組不同病毒載量的HBV感染者T淋巴細胞亞群測定結果 見表2。結果顯示，健康對照組與DNA陰性組比較差異均無統計學意義（P＞0.05）；健康對照組與低病毒載量組、高病毒載量組相比，T淋巴細胞亞群結果，差異有統計學意義（P＜0.05）；DNA陰性組與低病毒量組比較除CD4＋外CD8＋、CD4＋/CD8＋差異均有統計學意義（P＜0.05）；DNA陰性組與高病毒載量組比較，T淋巴細胞亞群結果，差別有統計學意義（P＜0.05）；低病毒載量組與高病毒載量組比較，T淋巴細胞亞群結果，差異有統計學意義（P＜0.05）。

表2 健康對照組和各組不同病毒載量的HBV感染者T淋巴細胞亞群結果（±s）

表2 健康對照組和各組不同病毒載量的HBV感染者T淋巴細胞亞群結果（±s）

注：與健康對照組比較，aP＜0.05；與DNA陰性組比較，b P＜0.05；與低病毒載量組比較，c P＜0.05。

組別 n CD4＋（%） CD8＋（%） CD4＋/CD8＋20 47.2±5.8 34.3±5.3 1.40±0.46 DNA陰性組 16 46.8±5.1 34.1±5.2 1.38±0.35低病毒載量組 31 43.8±5.6a 38.0±6.7ab 1.13±0.41ab高病毒載量組 45 38.5±7.31abc 41.4±7.1abc 0.91±0.40健康對照組abc

3 討 論

HBV是一種嗜肝DNA病毒，感染HBV后病毒在體內長期存在、不斷復制，病毒不能被清除，這些患者稱HBV慢性感染者。慢性病毒感染者中，如果肝功能一直正常，稱為慢性病毒攜帶者；反之，如果引起肝功能異常則稱為慢性肝炎。慢性肝炎患者病毒復制水平、肝損害程度、免疫反應形式等個體差異很大。

T細胞由不同的亞群組成，CD4＋、CD8＋細胞代表兩類主要T細胞，CD4＋T淋巴細胞主要是輔助型T淋巴細胞（Th），Th在病毒的免疫應答中發揮中心作用，同時，對病毒清除起重要作用［3］。CD8＋T細胞激活和抑制嚴格依賴CD4＋T細胞。CD8＋T細胞主要包括細胞毒性T細胞（Tc）和抑制性T細胞（Ts），Ts通過釋放分泌可溶性介質下調體液免疫和細胞免疫。Tc是細胞免疫的主要效應細胞，在被細胞因子激活后，產生穿孔素和顆粒酶，將靶細胞破壞，這是HBV感染后引起肝細胞損傷的主要原因，也是機體清除細胞內病毒的主要機制［4］。在正常情況下，二者保持一定比例，處于動態平衡狀態，維持機體細胞免疫功能。為了解慢性HBV感染者細胞免疫功能情況，本試驗檢測了92例慢性HBV感染者T淋巴細胞亞群，結果顯示HBV攜帶組與健康對照組比較T淋巴細胞亞群結果差異無統計學意義，表明HBV攜帶者多處于免疫耐受期，機體不能產生針對HBV的細胞免疫應答，肝組織無明顯免疫損傷，故T細胞亞群 CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋水平無明顯變化。慢性乙肝組患者CD4＋與健康對照組比較差異有統計學意義，慢性重型乙肝組患者CD4＋、CD8＋和CD4＋/CD8＋與健康對照組比較差異有統計學意義，以慢性重型乙肝外周血CD4＋、CD8＋和CD4＋/CD8＋最為明顯，提示細胞免疫在乙肝發展為重型肝炎進程中是不可忽視的重要因素。不同臨床類型慢性HBV感染者之間也有不同程度的差異，呈一定次序的規律性：從健康對照組到慢性重型乙肝組CD4＋、CD4＋/CD8＋逐漸降低，而CD8＋則逐漸升高。CD4＋T細胞降低，表明機體免疫功能下降，感染HBV后不易清除，是導致HBV感染慢性化的重要原因之一，與目前研究結果一致［5］；增加的CD8＋T細胞一般認為主要是Tc，慢性乙肝患者肝活檢發現，肝小葉壞死區周圍存在大量的Tc，造成肝細胞不斷破壞引起患者血清丙氨酸氨基轉移酶持續升高。

外周血HBV載量是反映病毒感染和復制程度的重要指標。流行病學調查結果表明，持續高HBV載量發生肝硬化和肝細胞癌的患者明顯增加，這說明高HBV病毒載量患者免疫功能低下［6］。本試驗結果顯示，DNA 陰性組 CD4＋、CD4＋/CD8 下降，CD8 升高，但與健康對照組比較差異無統計學意義，表明病毒無活動性復制，存在HBV整合的肝細胞，免受特異性細胞毒細胞的攻擊而免于被破壞。高病毒載量組和低病毒載量組CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋與健康對照組比較差異均有統計學意義，且高病毒載量患者比低病毒載量患者T淋巴細胞亞群變化更明顯，這與董莉等［7］報道吻合。在 HBV DNA復制時患者體內存在免疫抑制因子，能抑制T細胞增殖和CD4＋T細胞分泌白細胞介素－2（IL－2），而IL－2可引起 T細胞亞群相互影響，造成細胞免疫功能失調，病毒難以清除［8］。

綜上所述，慢性HBV感染者T細胞亞群改變不僅與HBV感染有關，也與HBV DNA復制有關，HBV DNA復制可進一步導致乙肝患者細胞免疫功能紊亂。即肝細胞損害與HBV病毒載量和T淋巴細胞亞群密切相關。因此，通過對慢性HBV感染者T細胞亞群和病毒載量檢測可了解機體的免疫功能，從而為臨床抗病毒治療療效及預后的判斷提供了科學依據，并有可能通過改善免疫細胞紊亂來治療慢性HBV感染。

［1］ 龍昭華，朱薏，蘇杭，等.乙型肝炎病毒攜帶孕婦外周血T淋巴細胞亞群水平分析［J］.國際醫藥衛生導報，2009，15（13）：4－5.

［2］ 中華醫學會肝病學分會，中華醫學會感染病學分會.2010版慢性乙型肝炎防治指南［J］.中華肝臟病雜志，2011，16 11－16.

［3］ 顧錫炳，楊小娟，王棟，等.慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平與外周血T淋巴細胞和NK細胞計數的關系［J］.實用肝臟病雜志，2010，13（6）：441－442.

［4］ 李鴻賓，江曉萍，葉珺，等.測定慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞亞群的臨床意義［J］.安徽醫藥，2006，10（8）：588－589.

［5］ 何英，張允奇，吳潤香，等.慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞亞群變化與病毒復制的關系［J］.檢驗醫學，2009，24（11）：808－811.

［6］ You J，Zhuang L，Zhang YF，et al.Peripheral T－lymphocyte subpopulations in different clinical stages of chronic HBV infection correlate with HBV load［J］.World J Gastroenterol，2009，15：3382－3393.

［7］ 董莉，李軍，韓亞萍，等.阿德福韋酯對HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者外周血T細胞亞群的影響［J］.蘇州大學學報：醫學版，2008，28（6）：962－965.

［8］ Liu A，Chert BF，Chert EJ，et al.Role of hepatitis B viral load and bass core pranoter mutation in hepatocellular Careinoma in hepatitis Bcaer S［J］.Infect Dis，2006，193：1258－1265.