氣相色譜質譜聯用法測定干制魚中敵百蟲殘留

殷 帥* 林 海蔣秋桃孟慶玉雷玉萍吳公平

（1 湖南省食品藥品檢驗研究院，湖南 長沙 410001；2 湖南省食品藥品監督管理局，湖南 長沙 410001）

氣相色譜質譜聯用法測定干制魚中敵百蟲殘留

殷 帥1* 林 海1蔣秋桃1孟慶玉1雷玉萍1吳公平2

（1 湖南省食品藥品檢驗研究院，湖南 長沙 410001；2 湖南省食品藥品監督管理局，湖南 長沙 410001）

目的建立干制魚中敵百蟲殘留的氣相色譜質譜聯用檢測方法。方法采用Agilent 7890A/5975C 氣相色譜/質譜聯用儀，HP-5MS毛細管柱(i.d. 30m×0.32mm×0.25μm)，樣品中敵百蟲經三氯甲烷提取，提取液濃縮、脫脂、凈化后，用氣相色譜法-質譜聯用儀測定，外標峰面積法定量，子離子豐度比定性。結果敵百蟲線性范圍為0.1～5.0μg/mL，r=0.9998，檢測限為0.02mg/kg，在0.1～2.0mg/kg的3個添加水平的平均回收率為84.8%～107.7%。結論本方法可以準確、快速的檢測出干魚中敵百蟲的含量。

敵百蟲；氣相色譜質譜聯用法

敵百蟲是高效、低毒及低殘留的殺蟲劑。對魚體內外寄生的吸蟲、線蟲、棘頭蟲及危害魚苗、魚卵的枝角類、橈角類、蚌鉤介幼蟲和水蜈蚣等均有良好的殺滅作用。但由于敵百蟲在弱堿性條件下，可形成殘毒性更大的敵敵畏[1]，當pH值為8～10時，敵百蟲轉變成敵敵畏僅需半小時。因此，不但要顧及魚蝦的毒性效應，而且對人、畜的安全也不可忽視。

近年來，我國曾多次發現有不法商販使用敵百蟲加工咸魚，給人們的身體健康和生命安全帶來了極大的安全隱患。針對這一現象，我們建立了干制魚中敵百蟲的測定方法。該方法可準確檢測干制魚中的敵百蟲，能夠為餐飲食品安全風險監測提供技術支撐。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

GC-7890A氣相色譜儀，帶5975C質譜儀；syncoreanalyst多樣品蒸發系統；pt3100d型數顯程控式均質機；Thermo Heraeus 高速冷凍離心機；HMS-350渦旋混合器；XS205型電子分析天平。

1.2 試劑與試藥

敵百蟲標準品（Trichlorphon，純度：98.2%，由Sigma公司提供）；乙腈、三氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷均為色譜純，無水硫酸鈉、乙酸鋅均為分析純，水為去離子純化水；高純氦氣。

2 方法與結果

2.1 GC-MS條件

色譜條件：色譜柱為HP-5MS毛細管柱（柱長30m，內徑0.25mm，膜厚度0.25μm）；載氣:高純氦氣，恒流，流速為1.0mL/min；脈沖不分流進樣，進樣量1μL。進樣口溫度200℃，柱溫升溫程序：從50℃起，保留2min，以10℃/min升至170℃，保留1min，再以20℃/min升至200℃，保留3min。

質譜條件：EI源，轟擊電壓70eV；離子源溫度230℃，四極桿溫度150℃，輔助接口溫度260℃；采集模式：全掃描與選擇離子監測（SIM）同時進行，掃描范圍：50～550amu；特征選擇離子見表1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標準溶液的制備

取敵百蟲標準品約10mg，精密稱重，置20mL容量瓶中，用乙酸乙酯配制成濃度為500μg/mL的標準儲備液。精密吸取敵百蟲標準儲備液適量，用乙酸乙酯逐級稀釋成濃度分別約為0.1、0.5、1、2、5μg/mL的標準系列。

表1 選擇特征離子與定量離子

2.2.2 供試品溶液的制備

取干魚絞碎混勻，取約5g（精確至0.01g），置50mL離心管中，加入乙酸鋅0.5g，再加入2+9乙腈溶液20mL，均質儀均質2min，4000r/min離心3min，上清液轉移至250mL分液漏斗中，離心管中殘渣再加入乙腈20mL，均質2min，4000r/min離心3min，合并提取液于同一250mL分液漏斗中，加20g/L硫酸鈉水溶液100mL，震蕩混勻，加入30mL二氯甲烷，劇烈振搖3min，靜置分層，將下層二氯甲烷液通過無水硫酸鈉柱，用250mL濃縮瓶收集，上層再加入30mL二氯甲烷，重復提取，提取液合并至250mL濃縮瓶中，用旋轉蒸發器濃縮至干，定量加入1mL乙腈溶解殘留物，加入乙腈飽和的正己烷1mL，渦旋振蕩2min，置冰箱中冷凍保存2～3h，高速離心2min，取上清液，即得。

2.2.3 空白對照溶液的制備

作總試劑表的空白實驗，按上述供試品溶液制備的方法，從“加入0.5g乙酸鋅”開始，制成空白對照溶液。空白對照應無干擾。

2.3 測定法

精密吸取標準溶液、供試品溶液及空白對照溶劑各1μL，注入氣相色譜儀，測定，色譜圖及質譜圖見圖1～5。

2.4 線性關系考察

以5個濃度水平的敵百蟲標準溶液，按上述測定條件，分別注入氣相色譜質譜聯用儀，以亞磷酸二甲酯的定量離子的峰面積對濃度繪制標準曲線。在0.1～5.0μg/mL濃度范圍內峰面積（Y）與濃度（X）的線性回歸方程為Y=140616X+18596，線性相關系數達到0.9998，線性關系良好。

2.5 回收率與精密度試驗

稱取5.0g干制魚空白樣品，分別加入約0.5μg（平行處理3份）、5μg（平行處理6份）、10μg（平行處理3份）敵百蟲標準溶液，按照2.2.2操作方法制備供試品溶液，回收率及精密度實驗結果見表2。

2.6 方法檢測限

圖1 空白對照溶液

圖2 標準溶液(1 亞磷酸二甲酯;2 敵敵畏)

圖3 供試品溶液

圖4 亞磷酸二甲酯質譜全掃描圖

圖5 敵敵畏質譜全掃描圖

表2 回收率及精密度試驗結果（n=12）

以干制魚空白樣品進行加樣回收測定，在0.02mg/kg添加水平時，亞磷酸二甲酯定性離子的S/N為3，因此本方法的檢測限為0.02mg/kg。

3 討 論

3.1 敵百蟲的測定方法一般有化學顯色法[2]、氣相色譜法[3]、液相色譜-串聯質譜法等[4]。因本實驗檢測的樣品基質是干制魚，干擾因素很多，采用化學顯色法和氣相色譜法檢測易產生假陽性結果，專屬性不強。液相色譜-串聯質譜法檢測靈敏度高，專屬性強，但儀器配備的難度大，費用高。故本實驗采用氣相色譜質譜聯用法檢測干制魚中敵百蟲含量，測定結果可靠，專屬性強，檢測靈敏度高。

3.2 敵百蟲易分解成亞磷酸二甲酯和三氯乙醛[5]，經質譜檢測，標準品除出現亞磷酸二甲酯的峰外，還出現一個明顯的色譜峰，經查看質譜掃描圖，該物質與敵敵畏的質譜圖基本一致，可能是敵百蟲在氣相色譜儀的高溫條件下轉化形成了敵敵畏。故參考“農業部783號公告-3-2006水產品中敵百蟲殘留量的測定”，敵百蟲以亞磷酸二甲酯含量計，進行定量。

3.3 干制魚中油脂類成分含量很高，按照“農業部783號公告-3-2006水產品中敵百蟲殘留量的測定”的前處理方法處理樣品后，供試品溶液的顏色較深，放置一段時間后還可能析出白色固體物質。這樣的含有大量雜質的供試品溶液非常容易污染氣相色譜儀的襯管和色譜柱，并且質譜圖中會出現很多雜峰，給分析帶來很大的麻煩。本實驗在前處理步驟中加入已經飽和的正己烷萃取雜質及冷凍高速離心，能大量去除供試品溶液中的脂類雜質，減少了儀器的污染，也使質譜圖干凈了很多，在不影響檢測結果準確性的條件下方便了結果分析。

[1] 詹玉蓮.有機磷農藥中毒的急救及注意事項[J].中國社區醫師, 2007,3(9):53.

[2] 方波,鐘良康.食品中敵敵畏與敵百蟲快速測定方法的探討[J].現代預防醫學,2006,33(4):580.

[3] 張晶,任一平.火腿、鰻鲞中敵百蟲和敵敵畏的氣相色譜快速檢測[J].中國衛生檢驗雜志,2006,16(12):1475-1477.

[4] 黃捷,白桂昌,呂軼峰,等.快速高分離液相色譜-串聯質譜法測定水產品中敵百蟲殘留[J].中國衛生檢驗雜志,2010,20(7):1666-1667.

[5] 農業部783號公告-3-2006水產品中敵百蟲殘留量的測定[S]. 2006-12-161.

R155.5+1

B

1671-8194（2013）12-0075-02

湖南省科技重大專項課題湖南省食品安全監控技術體系研究與示范

*通訊作者：E-mail：ys2275836@163．com