HPLC測定板藍根藥材及其制劑中表告依春含量的方法分析

梁 劍

（湘潭市中醫醫院，湖南 湘潭 411100）

HPLC測定板藍根藥材及其制劑中表告依春含量的方法分析

梁 劍

（湘潭市中醫醫院，湖南 湘潭 411100）

目的 探討HPLC用于測定板藍根及相關制劑當中表告依春的含量方法，從而控制板藍根以及其相關制劑的質量。方法 選擇反相高效的液相色譜法，其色譜柱定SB-C18ZORBAX（5μm，150mm×4.6mm)；其流動相三乙胺-磷酸-水-乙腈（0.05∶0.73∶90.72∶8.50）；其流速為每分鐘0.7mL；其檢測波長為245nm，其柱溫為30℃。結果 在表告依春的含量測定中，其線性范圍為0.3060～0.0204μg，其r為0.9998，其平均加樣的回收率為98.99%，其RSD為1.31%。結論 高效的液相色譜法對板藍根及其相關制劑中的表告依春進行含量測定，可靠準確，能夠用于對板藍根藥材以及其相關制劑進行質量評價。

含量測定；制劑；高效的液相色譜法；表告依春；板藍根

目前板藍根為比較常用的一種抗病毒中藥，最開始記載自《神農本草經》，其中表告依春系板藍根起到抗病毒作用的有效成分，也是反映該藥材及其相關制劑質量最重要的指標；本文研究選擇反相高效的液相色譜法對板藍根藥材以及其相關制劑（包括板藍根顆粒與復方的板藍根顆粒以及板藍根含片和板藍根糖漿）當中的表告依春其含量進行測定[1-4]。報道如下。

1 資料與方法：

1.1 一般資料

l100 Agilent型高效的液相色譜儀（主要包括四元泵與自動進樣器，以及DAD的陣列二極管檢測器）；5200KQ型的超聲清洗器；211D-BP電子天平。選定表告依春的對照品以及板藍根，包括板藍根顆粒與復方的板藍根顆粒，包括板藍根含片與板藍根糖漿。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

C18 SB ZORBAX-色譜柱（5μm，150×4.6mm），三乙胺-磷酸-水-乙腈（0.05∶0.73∶90.72∶8.50）；其流速為每分鐘0.7mL；其檢測波長為245nm，其柱溫為30℃。其高效的液相色譜可見圖1。

1.2.2 其中對照品的溶液制備

首先稱取其表告依春的對照品量1.0mg，予以精密稱定后，放置在10mL容量的量瓶中，并加流動相直至刻度，當搖勻后，在制為質量濃度系每升0.102g的對照品溶液。

1.2.3 制備供試品溶液：

1.2.3.1 將板藍根的藥材供試品首先取粉末約為0.2g，予以精密稱定，并置于50mL的錐形瓶中，再加入20mL的水后稱重，以超聲對其提取達60min后放冷，之后再稱重，以水補足其損失的質量并過濾，再將初濾液棄去，之后取出2mL續濾液，再以水浴蒸干，其殘渣加至流動相進行適量溶解，同時定容在10mL的量瓶當中予以搖勻，最后取出續濾液即可得到供試品的溶液。

1.2.3.2 制備板藍根顆粒的供試品

首先取出本品10袋并研細，選取2g并精密稱定，再置于50mL的錐形瓶當中，之后加入20mL的水，通過水浴加熱同時震搖將其溶解后搖勻并過濾，再將初濾液棄去，之后取2 mL續濾液以水浴蒸干，其殘渣加至流動相予以適量溶解，同時定容在10mL的量瓶當中并搖勻。

圖1 高效的液相色譜

1.2.3.3 制備板復方藍根顆粒的供試品

取出本品10袋，研細，精密量取2g，置于50mL錐形瓶中，加入20mL水，水浴加熱并振搖，使其完全溶解，過濾，取續濾液2mL，水浴蒸干，殘渣加適量流動溶解，置于10mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.2.3.4 制備板藍根含片的供試品溶液

取10片本品，將其研細后取0.8g并精密稱定，再置于50mL的錐形瓶之中，接著加20 mL水，以水浴加熱，同時震搖溶解，在搖勻后過濾棄去其初濾液，再取2mL續濾液予以水浴蒸干，其殘渣加入流動相進行適量溶解，之后定容在10mL的量瓶中予以搖勻。

1.2.3.5 制備板藍根糖漿的供試品溶液

精密稱定5mL本品，將其置于50mL的錐形瓶當中，之后加20mL水，予以搖勻，在搖勻后過濾掉其初濾液，再取2mL的續濾液給以水浴蒸干，其殘渣加入流動相進行適量溶解，之后定容在10mL的量瓶中予以搖勻。

1.2.4 考察線性關系

首先精密量取每升0.102g的上述對照品，將其分別放置在量瓶（10mL）中，一直加流動相到刻度并搖勻，再分別吸取對照品溶液，然后按照上述2.1的色譜條件予以測定，同時以y（峰面積），X（對照品質量）予以線性回歸。

1.2.5 精密度試驗

先要精密量取密度為每升8.16mg的對照品溶液，共20uL，基于同樣的條件下來回進樣6次，計算出對照品的峰面積為1496.44，RSD0.58%，說明其精密度狀況良好。

1.2.6 穩定性試驗

準備好待測的供試品溶液，然后參考上面色譜條件進行相關操作，在0h、2h、4h、8h、16h……進樣，得出最后的峰面積，根據峰面積得出平均的峰面積是1506.45，RSD1.02%。

1.2.7 重復性試驗

量取同批次板藍根藥材0.2g，稱定6份，根據以上方法制備出6份供試品溶液，精密取出20uL，然后參考上面色譜條件進行相關測定，得出表告依春質量分數是每g中含有4.245mg，RSD1.43%。

1.2.7 加樣回收率試驗

量取既定含量的表告依春板藍根粉0.11g，稱定9份，對每3份添加等量表告依春，根據上面所講的方式來制備出供試品，進行測定。得出9份平均回收率是97.99%，RSD1.33%。

2 結 果

稱定出：①0.2g板藍根的藥材粉末，②2g板藍根的顆粒粉末，③2g復方板藍根的顆粒粉末，④0.8g板藍根的含片粉末，⑤5mL板藍根糖漿，按照1.2.1項目下的色譜條件，以外標法予以測定，同時計算各個樣品中其表告依春所占的含量，其測定結果可見下表1。

3 討 論

表1 上述樣品中其表告依春所占的質量分數

3.1 據文獻報道，以HPLC對板藍根中其靛藍與靛玉紅等有效含量進行測量，其中靛藍與靛玉紅主要呈脂溶性，以水來提取大多提取不出，但實際的生產中，其板藍根則多系水提取；此外，目前板藍根于臨床上最主要的應用是用作抗病毒藥物，由于靛藍以及靛玉紅均不具抗病毒的活性，所以靛藍以及靛玉紅的含量不適合用于板藍根以及其相關制劑的進行含量測定的指標；在本研究中，選擇RP與HPLC來測定板藍根以及其相關制劑中所含表告依春的量，應用此法不僅重復性好，而且準確度也較高，應予推廣。

3.2 在本文試驗中，對比甲醇一水與甲醇含酸水以及乙腈和含酸水流的動相系統中洗脫情況，其結果顯示：所測乙腈含酸水的流動相系統同甲醇一水以及甲醇含酸水相較，差異顯著，由于甲醇水系統能夠讓表告依春以及其他成分難于分開，所以甲醇含酸水同樣也不能夠呈較好的分離。

3.3 綜上所述，高效的液相色譜法對板藍根及其相關制劑中的表告依春進行含量測定，可靠準確，能夠用于對板藍根藥材以及其相關制劑進行質量評價。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典.一部[S].北京:化學工業出版社,2005: 142.

[2] 徐麗華,黃芳,陳婷,等.板藍根中的抗病毒活性成分[J].中國天然藥物,2005,3(6): 359.

[3] 黃芳,熊雅婷,徐麗華,等.板藍根不同提取物中抗病毒成分表告依春在大鼠體內的藥代動力學[J].中國藥科大學學報,2006,37 (6):519.

[4] 安益強,賈曉斌,袁海建,等.HPLC測定板藍根藥材及其制劑中表告依春的含量[J].中國中藥雜志,2008,33(18):12.

R282.71.03

B

1671-8194（2013）21-0102-02