賁門癌組織中Midkine蛋白的表達及其臨床意義

呼秀峰 姚 俊 馮笑山* 茹 藝 劉 剛

（河南科技大學第一附屬醫院腫瘤中心，河南 洛陽 471003）

賁門癌組織中Midkine蛋白的表達及其臨床意義

呼秀峰 姚 俊 馮笑山* 茹 藝 劉 剛

（河南科技大學第一附屬醫院腫瘤中心，河南 洛陽 471003）

目的 檢測賁門癌組織中 Midkine 蛋白表達情況，探討 Midkine 蛋白與賁門癌生物學行為的關系及意義。方法 采用免疫組織化學SP 法檢測 Midkine 蛋白在正常賁門黏膜、賁門不典型增生組織、賁門癌組織中的表達情況，將檢測結果與賁門癌臨床病理資料進行統計學分析，并對所有病例進行隨訪，探討其與賁門癌預后的關系。結果 Midkine 蛋白在賁門癌中表達上調，且表達率（76.4%）顯著高于賁門不典型增生組織（26.9%）及正常賁門黏膜（5%），其表達強度與患者年齡、性別、腫塊大小、組織分化程度無關（P ＞ 0.05），而與浸潤深度、淋巴結轉移及預后正相關，差異有統計學意義（P＜ 0.05）。結論 Midkine 蛋白高表達顯示賁門癌惡性程度高、分期晚、預后不良 ; Midkine 蛋白在賁門癌的發生、發展中起重要作用。

賁門腫瘤；Midkine 蛋白；免疫組織化學；預后

賁門腺癌（Gastric cardiac adenocinoma GCA）是上端胃臨近食管部位發生的腺癌，流行病學調查顯示其發病率呈逐年上升趨勢，是增長速度最快的惡性腫瘤之一[1]。近年來賁門癌的診斷及治療方面取得較大進展，但由于缺乏敏感、特異的早期診斷指標，所以賁門癌仍是預后差，病死率相當高的惡性腫瘤之一。Midkine蛋白（MK）是一種肝素結合性生長因子，通過促細胞增殖及血管生成、誘導細胞惡性轉化、抗凋亡等功能影響惡性腫瘤細胞的生長增殖、分化凋亡，與惡性腫瘤的發生密切相關。研究顯示，Midkine蛋白在肝癌、胃癌、結直腸癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌、神經母細胞瘤等許多惡性腫瘤中過表達，并與腫瘤浸潤及預后密切相關[2]，但MK在賁門癌中的表達尚未見報道。本研究采用免疫組織化學方法（SP法）對賁門癌組織中Midkine蛋白表達情況進行檢測，分析其在賁門癌中的表達及與臨床病理的關系，探討其在賁門癌發生發展及侵襲、轉移中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

72例賁門癌均取自2007年～2009年河南科技大學第一附屬醫院病理科手術切除后經病理診斷明確的存檔蠟塊。其中賁門癌組織72例，男56例，女16例，平均年齡（55.4±7.56）歲。癌旁不典型增生組織26例，男17例，女9例，平均年齡（54.2±7.9）歲。距癌組織10cm以上癌旁正常組織40例，男28例，女12例，平均年齡（55.3±8.3）歲。患者術前均未接受放療和化療。

1.2 主要試劑

兔抗人Midkine蛋白多克隆抗體購自SantaCruz公司，抗兔及抗鼠SP超敏試劑盒、DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術開發公司。

1.3 方法

將原石蠟包埋的蠟塊作4μm切片，每例作連續切片5張，分別作HE染色、Midkine蛋白和syndecan-1免疫組織化學SP法染色，2片備用。各組織切片常規脫蠟及水化后，依次按說明書完成免疫組化染色各步驟。用已知陽性對照片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 結果判斷

陽性結果判斷標準：Midkine蛋白陽性染色定位于細胞膜和（或）細胞質內。凡細胞質和/或細胞膜出現清晰的棕黃色染色的細胞即為陽性細胞。先在低倍鏡下觀察，隨機讀取5個高倍視野下的陽性細胞數。并將陽性細胞計數分為四個等級，分別為：無陽性細胞計0分，≤25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，＞75%計4分。并將著色強度分為三個等級分別為：無色計0分，淺黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。最后將兩項評分相乘，得出結果并分為四個等級：0分為陰性（-），1～2分為弱陽性（+），3～4分為中度陽性（++），大于4分則為強陽性（+++）。

1.5 統計學處理

采用SPSS17.0統計軟件包作統計分析，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義，生存分析應用單變量Log-rank檢驗。

2 結 果

2.1 MK的表達

MK在正常賁門黏膜組織中多呈陰性表達，少部分為弱陽性，陽性率為5.0%。MK在賁門癌組織中的表達呈細胞漿或膜分布，陽性信號為棕黃色顆粒，陽性率為76.4%（55/72），顯著高于在賁門不典型增生組織及賁門正常組織中的表達，三者相比結果具有明顯差異（P＜0.01）（表1）。

表1 不同賁門黏膜組織中Midkine蛋白的表達

2.2 Midkine蛋白表達與賁門癌臨床病理學特征關系

72例賁門癌中MK的陽性表達表達率為76.4%。MK的表達與TNM分期（χ2=12.231，P＜0.05）、有無淋巴結轉移（χ2=8.50，P＜0.05）及漿膜浸潤（χ2=5.073，P＜0.01）顯著相關，差異有統計學意義；其表達與患者年齡、性別、腫塊大小、組織分化程度無關（P＞0.05）（表2）。

2.3 賁門癌組織中Midkine蛋白表達與預后的關系

本組患者隨訪時間為48個月，72例賁門癌患者中，Midkine蛋白陽性表達患者中位生存時間為27.0個月，3年生存率為37.5%。Midkine蛋白陰性表達組的中位生存時間及3年生存率均高于Midkine蛋白陽性表達組（P=0.029）。經檢驗Midkine蛋白與患者預后相關，即Midkine蛋白陰性患者總體生存期長，見。

3 討 論

表2 Midkine蛋白表達與GCA臨床病理學特征關系

賁門癌是一種在胃賁門部發生的惡性腫瘤，是我國北方地區常見的消化道惡性腫瘤之一，流行病學調查顯示其發病率呈逐年上升趨勢，是增長速度最快的惡性腫瘤之一[3]。在西方國家，隨著遠側部胃癌發病率的逐年下降[4，5]，賁門腺癌的發病率已接近全部胃癌的50%[6]。流行病學和人群研究提示，賁門癌的誘發因素、病理特征、以及臨床特征與胃遠側部位腫瘤明顯不同[7]。腫瘤侵襲、轉移的機制很復雜，是多階段、多步驟、多因素、多基因的發展過程，近年來雖然賁門癌在診斷與綜合治療方面取得較大進展，腫瘤切除率和生存率有所提高，但由于早期癥狀不典型，加之缺乏敏感、特異的早期診斷指標，大多數患者就診時已為中晚期，綜合治療后的五年生存率不超過24%[8]，因此深入研究賁門癌的發生、發展、浸潤和轉移機制，對于診斷及制定合理治療方案，具有重要的理論意義和臨床價值。

Midkine蛋白（MK）即肝素結合生長因子。1988年，Kadomatsu等人通過差異雜交方法在小鼠胚胎腫瘤細胞（HM-1）中發現的一種新基因，并報道其在胚胎性癌細胞分化早期強烈表達[9]。人類MK基因（MDK）定位于11P11.2上，由5個外顯子和4個內含子組成。其編碼蛋白質分子量為13-kDa，富含堿性氨基酸和半胱氨酸[10]。目前已發現的MK受體包括syndecan家族成員、蛋白多糖受體型酪氨酸激酶、低密度脂蛋白（LDL）、受體相關的蛋白（LRP）以及間變性淋巴瘤激酶（ALK）等[11]。研究顯示MK具有多種生物學功能，與多種疾病的發病有關，然而MK最引人注目的特點是其在癌癥晚期頻繁并且強烈表達[2]。MK在癌變過程中顯示腫瘤的相關活性，包括轉化、纖維蛋白溶解、細胞轉移、細胞存活、抗凋亡等作用，但是到目前為止，MK促進腫瘤生長的確切的作用機制尚不清楚[12]。研究顯示MK在許多惡性腫瘤如食管癌、胃癌、結直腸癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、腎癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、wilms瘤、神經母細胞瘤及硬脊膜瘤中高頻率、高強度表達，并與腫瘤發展進程及嚴重程度密切相關[13]。Obata等[14]報道，胃賁門癌患者血清中MK含量顯著提高，而且晚期癌的血清MK含量高于早期瘤。趙志國等[15]報道胃賁門癌組織中MK表達陽性率達76.6%，其表達水平與胃賁門癌的浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期及微血管密度密切相關，與患者年齡、腫瘤的大小、性別，胃賁門癌分化程度無關，患者血清中MK水平亦明顯高于正常人。然而，MK在賁門癌中的表達尚未見報道。本研究顯示，在72例賁門癌患者中有55例Midkine蛋白過度表達，陽性率為76.4%。賁門癌組織中Midkine蛋白的陽性表達顯著高于癌旁正常組織（χ2=52.437，P＜0.01），與文獻報告的胃癌Midkine蛋白表達率一般在65%～80%相仿，（III+Ⅳ）期賁門癌組織中MK陽性表達率顯著高于（I+II）期（χ2=12.630，P＜0.05），有淋巴結轉移組MK陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移組（χ2=8.5，P＜0.05）。有漿膜浸潤組MK陽性表達率高于無漿膜浸潤組（χ2=5.073，P＜0.01）。結果顯示Midkine蛋白過表達患者往往分期較晚，預后較差，提示Midkine蛋白可能促進腫瘤細胞增殖、浸潤及轉移。研究未能發現MK表達與年齡、性別及腫瘤細胞分化程度的相關性。

由于MK受體種類繁多，多種受體可能單獨或聯合調節MK生物活性，這些受體之間的相互作用及復合物組成的詳細情況尚未見確切報道，所以目前還不清楚它們之間通過怎樣的機制相互作用，值得我們進一步研究。綜合本實驗結果認為MK可能與胃賁門癌的發生、發展有關，并能反映出胃賁門癌組織的惡性程度及侵襲能力，提示可作為胃賁門癌早期診斷及預后分析的指標之一，在臨床診斷及指導術后治療方面有一定價值。

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R735.2

：B

：1671-8194（2013）10-0083-03

洛陽市新技術研發計劃項目（編號：NO.1002238B）

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