參芪扶正注射液對小鼠腋下種植瘤及肝轉移灶的影響

周柯鑫 陳曉衍

（北京中醫藥大學東直門醫院，北京 100700）

參芪扶正注射液對小鼠腋下種植瘤及肝轉移灶的影響

周柯鑫 陳曉衍

（北京中醫藥大學東直門醫院，北京 100700）

參芪扶正注射液；小鼠；腋下種植瘤；肝轉移灶

參芪扶正注射液是一種免疫功能調節劑，對化療藥物有顯著的增效減毒作用，其作用機理一直受到醫藥界的高度重視。目前正在進行作用靶標的基因組學和蛋白質組學的深入研究。

由于參芪扶正注射液是一種多效應的物質庫，所以，本藥效價將體現中藥復方多靶點、多層次的作用特點，這給本藥的機理研究帶來一定的難點和熱點。本實驗就不同的治療干預方案，深入研究腫瘤細胞的病理學變化特點，從而尋找參芪扶正注射液的作用靶位。

1 材料與方法

表1 小鼠皮下種植瘤生長情況（g、cm）

1.1 材料

①小鼠：小鼠為4～6周齡體質量20～24g的雄性BALB/C小鼠（由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供），在II級動物實驗室飼養。②細胞液：選用小鼠結腸癌C26細胞株（美國引進，廣安門醫院腫瘤實驗室惠贈）。經3次皮下接種傳代后，無菌條件下摘取瘤體，生理鹽水洗滌，剪成小塊，勻漿，離心后取沉淀，反復3次，培養于10%新生牛血清和RPMI1640培養液（含青霉素100單位/mL、鏈霉素100單位/mL），置37℃、含5%CO2培養箱中3天，每日換液。將細胞液機械吹打成單個細胞，離心取沉淀，加生理鹽水調整細胞濃度為6 ×105/mL，觀察細胞活力＞95%，備用。③光鏡：Leica公司生產（德國制造）。TYPE：020-519.511 DM LB 100T。④電鏡：天美科技有限公司（日本制造）。TYPE：日立H-7650。⑤參芪扶正注射液（濃縮液）：麗珠集團利民制藥廠提供。⑥5-氟脲嘧啶（5-Fu）：上海旭東海普藥業有限公司生產，產品批號060402。

1.2 分組

取小鼠16只，分為皮下注射和脾內注射兩組，每組8只。又隨機分為4組，每組2只。①參芪扶正注射液組（簡稱參芪組）。②5-Fu化療組（簡稱化療組）。③參芪扶正注射液+5-Fu組（簡稱聯合組）。④造模后未予治療組（簡稱對照組）。

1.3 動物造模

①皮下注射：注射區常規消毒后，將0.2mL瘤細胞液注射于小鼠右腋下皮下。②脾內注射：小鼠稱重，以0.5%戊巴比妥鈉（50mg/ kg）腹腔內注射麻醉，3～5min后麻醉成功，取左側腋后線肋緣下縱行切口，長約0.5～1cm，安爾碘皮膚消毒，進腹后于腹外側找到柳葉狀脾臟，牽出腹腔外，用1mL注射器從脾下極進針，將瘤細胞液0.2mL注射于脾內，拔針后，酒精棉球壓迫注射部位1～2min，0號絲線依次間斷縫合肌肉、皮膚關腹。術后繼續在II級動物實驗室飼養。

1.4 干預治療

①參芪組和聯合組造模5d后，給予參芪扶正注射液0.15mL（相當于生藥160mg，為成人用量的12倍），加生理鹽水稀釋至0.5mL，腹腔內注射，隔日一次，共5次。②化療組和聯合組造模5d后，給予5-Fu 0.02mL（0.5mg），加生理鹽水稀釋至0.2mL，腹腔內注射，隔日一次，共3次。

小鼠造模后自由進食水，每日每只小鼠給生瓜子約1g，每日記錄體質量及活動情況。

1.5 取材及標本制備

①皮下注射造模組：造模前每只小鼠稱重。造模后25d，脫頸椎處死小鼠，稱重。常規消毒后取右腋下切口約2cm，打開皮膚后見色灰白瘤體，表面血管豐富，中間有軟化灶，邊界清楚，將瘤體完整取下，用游標卡尺測瘤體長徑、寬徑；用電子秤稱重，取0.2cm直徑標本放入電鏡固定液中，其余放入10%甲醛固定，備用。②脾內注射造模組：造模前每只小鼠稱重。造模后13d，脫頸椎處死小鼠，稱重。常規消毒后取腹正中切口約3cm。進腹后找到肝臟，肉眼觀察肝臟內轉移癌情況，可見肝臟各葉散在轉移灶，大者米粒大小，小者如針眼大。取最大轉移灶，用游標卡尺測長徑、寬徑，用電子秤稱重。取0.2cm直徑放入電鏡固定液，其余瘤體連同部分周圍肝組織放入10%甲醛固定，備用。

表2 小鼠肝轉移瘤生長情況（g、cm）

表3 各組瘤體切片光鏡下改變

2 結 果

2.1 小鼠瘤體生長情況

①皮下注射組小鼠瘤體生長情況，見表1。②脾內注射組肝轉移瘤生長情況，見表2。

2.2 病理學改變

①光鏡檢查：光鏡下觀察各組小鼠腫瘤細胞形態、核分裂像數目、瘤細胞壞死面積、癌周淋巴細胞及中性粒細胞數量、轉移瘤周圍肝臟組織變性壞死情況，結果發現化療組腫瘤壞死面積大，肝臟組織變性壞死較重，而參芪組和聯合組壞死程度較輕，其他未見明顯差異（表3）。因樣本數較小，無統計學意義。②透射電鏡：超微結構變化如下：癌細胞核染色質凝聚，部分呈微篩孔改變。細胞膜內陷，線粒體數量明顯減少，多數腫脹，嵴減少或斷裂，甚至消失，有不同程度的變性，部分線粒體呈空泡狀。參芪組細胞破壞較輕。見圖1。

3 討 論

3.1 小鼠瘤體生長和轉移情況

①皮下注射組小鼠造模后25d處死。4組小鼠體質量有明顯差異，參芪組和對照組較造模前體質量略有增加，平均增加1.36g；化療組和聯合組小鼠體質量明顯降低，化療組平均每只下降3.3g、聯合組平均下降2.55g；各組瘤重差距不明顯，參芪組瘤重平均6.35g，化療組平均5.15g、聯合組平均6.3g、對照組平均6.49g。由表1所見，參芪扶正注射液對小鼠有一定的保護作用，與化療組對比，荷瘤小鼠體質量無下降，瘤重較化療組為輕，自然生長狀態較活躍。②肝轉移瘤情況：8只小鼠脾內注射C26癌株，但未切脾。脾內種植瘤生長迅速，小鼠生存期較短，種植后13天即處于瀕死狀態。本組小鼠均發生肝轉移，其中全部聯合組小鼠、部分參芪組較化療組肝轉移瘤體較小，無法單獨稱重，說明參芪扶正注射液有一定的抑制肝轉移的作用。

圖1 6號電鏡

3.2 病理學檢查

送檢各組小鼠進行光鏡及電鏡檢查。光鏡觀察發現化療組腫瘤壞死面積較大，肝臟組織壞死變性較重，而參芪組和聯合組細胞破壞情況較輕；電鏡觀察癌細胞中單位體積細胞質中線粒體的膜面積和數目明顯減少，但參芪組線粒體膜面積和數目減少較其他組程度輕，說明參芪扶正注射液對機體組織有一定的保護作用。因樣本數較少，尚需進一步深入研究。

R735.7

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：1671-8194（2013）10-0075-03