復方硫酸鋅滴眼液無菌檢查方法的建立

王 瑛 楊利紅*

（黑龍江省食品藥品檢驗檢測所，黑龍江 哈爾濱 150001）

復方硫酸鋅滴眼液無菌檢查方法的建立

王 瑛 楊利紅*

（黑龍江省食品藥品檢驗檢測所，黑龍江 哈爾濱 150001）

目的 建立復方硫酸鋅滴眼液的無菌檢查方法。方法 按照《中國藥典》2010年版附錄的要求，采用薄膜過濾法，通過接種6株陽性代表菌進行方法學驗證，沖洗液用量為每筒300mL。結果 6株陽性代表菌株在試驗組與陽性對照組均生長良好。結論 本法可消除復方硫酸鋅滴眼液的抑菌作用，適用于該制劑的無菌檢查。

復方硫酸鋅滴眼液；無菌檢查；方法學驗證

復方硫酸鋅滴眼液對革蘭陽性菌及革蘭陰性菌均具有抑制作用，用于治療結膜炎、沙眼等眼部感染，是臨床常用藥物。為有效控制藥品的質量，保證無菌檢查方法的科學性和檢驗結果的準確性。根據《中國藥典》2010年版[1]附錄無菌檢查的要求，建立復方硫酸鋅滴眼液的無菌檢查方法，并對其進行方法學驗證。

1 材 料

1.1 培養基與試劑

硫乙醇酸鹽流體培養基、改良馬丁培養基、蛋白胨、肉湯培養基。以上均為北京三藥生產。

1.2 菌種

金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]、大腸埃希氏菌[CMCC(B)44 102]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63 501]、生孢梭菌[CMCC(B)64 941]、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]、黑曲霉[CMCC(F)98 003]。

1.3 樣品

復方硫酸鋅滴眼液（哈爾濱醫科大學附屬第一醫院，批號：20101123，20101124，20101125規格：5mL/支）。

2 方法與結果

2.1 菌液制備

取經30～35℃培養18～24h的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌與枯草芽孢桿菌營養肉湯培養物各1mL、取經23～28℃培養24～48h的白色念珠菌的改良馬丁液體培養物1mL、30～35℃培養18～24h的生孢梭菌的硫乙醇酸鹽液體培養物1mL，分別加入0.9%無菌氯化鈉溶液9mL中10倍依次稀釋至濃度約為10～100cfu/mL；取經培養5～7d的黑曲霉改良馬丁瓊脂斜面培養物，加入含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液5mL，將孢子洗下，搖勻，吸取1mL至無菌試管中，用含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液10倍稀釋至濃度約為10～100cfu/mL，備用。

2.2 方法驗證

2.2.1 試驗組

取供試品60支，分別置6個濾筒過濾（每筒10支），沖洗液用量為每筒300mL，分次沖洗并在最后一次沖洗液中分別加入1mL已制備好的上述6株菌液，再加入相應的培養基100mL，按規定條件培養3～5d，逐日觀察。

2.2.2 菌液組

另取6個濾筒，加入相應的等量培養基，分別加入1mL各試驗菌液，按規定條件培養3～5d，逐日觀察。

2.2.3 供試品對照組

取供試品20支，置2個濾筒中過濾（每筒10支），沖洗液用量為每筒300mL，再分別加入硫乙醇酸鹽流體培養基和改良馬丁培養基各100mL，按規定條件培養3～5d，逐日觀察。

2.2.4 陰性對照組

取試驗用0.1%無菌蛋白胨水溶液300mL，分置兩個濾筒中過濾，再分別加入硫乙醇酸鹽培養基和改良馬丁培養基，按規定條件培養3～5d，逐日觀察。

表1 試驗組與陽性對照組微生物生長情況

3 討 論

眼用藥劑是指用于治療和診斷眼疾直接用于眼的各類劑型。包括滴眼劑、洗眼劑、眼膏劑、眼用注射劑以及眼用膜劑和接觸眼鏡等。雖然眼用藥劑（除眼用注射劑外）均非直接進入組織或血液，但由于眼組織較為嬌嫩，一旦受損后果嚴重，因此眼用藥劑不同于一般的外用制劑，均要求無菌以保證用藥安全。因此《中國藥典》2010年版中要求眼用制劑以無菌檢查法取代微生物限度檢查。

復方硫酸鋅滴眼液主要成分為鹽酸小檗堿、硫酸鋅和硼酸，具有一定的抗菌作用，可與細菌DNA形成復合物，從而影響DNA的復制，干擾細菌生長繁殖；對革蘭陽性菌及革蘭陰性菌如痢疾桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌、結核桿菌等都有抑制作用；并能增強人體白細胞的吞噬功能。用于治療結膜炎、沙眼等眼部感染。

本試驗采用薄膜過濾法對樣品的無菌檢查進行方法學驗證，以每株菌接種10支的樣品量進行驗證試驗，沖洗量選取以每筒300mL即可消除其抑菌作用。同時考察沖洗液、培養基對試驗的影響，以證明試驗結果的可靠性。本試驗建立的無菌檢查方法準確、可行，為臨床用藥安全提供有力保障。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典(二部)[S].北京:化學工業出版社, 2010:103-107.

R9

B

1671-8194（2013）20-0088-02

*通訊作者