乙酰肝素酶在賁門癌中的表達及與臨床病理的關系

劉亞紅

（河南省洛陽市洛陽軍分區(qū)衛(wèi)生所，河南 洛陽 471000）

乙酰肝素酶在賁門癌中的表達及與臨床病理的關系

劉亞紅

（河南省洛陽市洛陽軍分區(qū)衛(wèi)生所，河南 洛陽 471000）

目的 檢測乙酰肝素酶和低氧誘導因子 1α 在賁門癌中的表達，分析其與臨床病理的關系并探討低氧誘導因子 1α 對調節(jié)乙酰肝素酶的可能機制。方法 用免疫組化分別檢測 48 例賁門癌和 26 例癌旁組織中乙酰肝素酶（SP 法）及低氧誘導因子 1α 蛋白（SABC 法）的表達，并分析它們與臨床病理因素之間的關系。結果 乙酰肝素酶和低氧誘導因子 1α 在 48 例賁門癌中的陽性表達率分別為 62.5% 和 45.9%，明顯高于相應癌旁組織。乙酰肝素酶陽性表達與淋巴結轉移、TNM 分期密切相關；低氧誘導因子 1α 與遠處轉移、淋巴結轉移密切相關。乙酰肝素酶與低氧誘導因子 1α 有明顯的陽性共表達率 (P=0.020)。結論 乙酰肝素酶在賁門癌中表達增高，低氧誘導因子 1α 可能參與上調乙酰肝素酶的表達水平，促進乙酰肝素酶介導的賁門癌浸潤及轉移。

乙酰肝素酶；賁門癌；臨床病理因素

浸潤和轉移是影響惡性腫瘤治愈率的主要因素，惡性腫瘤細胞侵出基底膜(BM)進入細胞外間質(ECM)是轉移過程中關鍵而必須的步驟。研究證實，乙酰肝素酶可破壞BM和ECM的完整性，從而有利于腫瘤細胞穿越ECM和血管內皮，促進侵襲和轉移的發(fā)生[1,2]。雖然目前對乙酰肝素酶在腫瘤浸潤轉移中的作用有較多了解，但是對于其賁門癌中的表達以及與臨床病理的關系研究甚少。同時低氧誘導因子1α在腫瘤的演進中扮演重要角色，與浸潤、轉移關系密切，包括加速腫瘤細胞的侵襲和轉移、促進腫瘤血管生成。研究發(fā)現(xiàn)通過抑制低氧誘導因子1α的活化可以促進乙酰肝素酶的表達[3]。但是在賁門癌中低氧誘導因子1α和乙酰肝素酶的關系仍然需要探討。我們檢測了乙酰肝素酶和低氧誘導因子1α蛋白在賁門癌中的表達，分析其與臨床病理因素之間的關系，初步探討低氧誘導因子1α對乙酰肝素酶調節(jié)的可能機制。

1 材料與方法

1.1 研究對象

河南省洛陽市三甲醫(yī)院于2007至2011年接受手術治療的賁門癌患者48例，其中女18例、男30例，年齡32～71歲，中位年齡(56±8)歲，所有標本術后經病理證實均為腺癌。

1.2 試劑及結果評估

羊抗兔低氧誘導因子1α抗體和免疫組化試劑盒購于北京中山公司；兔抗山羊乙酰肝素酶多克隆抗體購于GIBCO公司。以正常山羊或者兔血清作為一抗行陰性對照，以已知表達陽性的乳腺癌、子宮癌組織分別作為低氧誘導因子1α和乙酰肝素酶陽性對照。顯微鏡下觀察陽性細胞并計數，根據所占比例分為：(-)陽性細胞數＜10%；(+)介于10%～50%之間；(++) 陽性細胞數＞50%。

1.3 統(tǒng)計學處理

所用軟件包為SPSS13.0，統(tǒng)計學方法采用χ2檢驗和Fisher’S精確概率法，單因素分析用秩和檢驗。P＜0.05為差異有顯著性。

2 結 果

2.1 乙酰肝素酶和低氧誘導因子1α在賁門癌中的表達

乙酰肝素酶定位于賁門癌細胞的胞漿，主要表達于癌組織的邊緣。位于腫瘤邊緣的癌旁組織也有乙酰肝素酶表達而正常的賁門上皮無乙酰肝素酶表達。低氧誘導因子1α主要表達于細胞漿，而正常的賁門組織內無低氧誘導因子1α表達。實驗顯示，在賁門癌組織中，乙酰肝素酶表達率為62.5%(30/48)，癌旁組織為23.0%(6/26)，P＜0.05。低氧誘導因子1α在癌組織中表達率為45.9%(22/48)，在癌旁組織為19.2%(5/26)，P＜0.05。

2.2 乙酰肝素酶和低氧誘導因子1α表達與臨床病理的關系

表1總結了賁門癌中乙酰肝素酶和低氧誘導因子1α蛋白表達與臨床病理之間的關系。乙酰肝素酶表達與淋巴結轉移(P=0.003)以及TNM分期密切相關(P=0.032)。而低氧誘導因子1α表達與遠處轉移(P=0.032)以及淋巴結轉移密切相關(P=0.018)。二者的表達均與患者年齡及組織學分級無顯著性相關。

表1 乙酰肝素酶和低氧誘導因子1α蛋白的表達與臨床病理因素之間的關系

2.3 乙酰肝素酶和低氧誘導因子1α表達之間的關系

乙酰肝素酶表達陽性的患者其低氧誘導因子1α的表達也高，兩者具有相關性(P=0.020，表2)。

表2 乙酰肝素酶和低氧誘導因子1α表達之間的關系

3 討 論

因缺乏特異性早期癥狀且賁門在解剖方面的特殊位置，賁門癌早期誤診率很高，病死率與發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。其中轉移和浸潤是賁門癌患者預后不良的主要因素。乙酰肝素酶通過降解硫酸乙酰肝素參與血管生成、浸潤及轉移等重要過程，而該酶是哺乳動物唯一的能夠降解硫酸乙酰肝素的內切糖苷酶，因此，乙酰肝素酶已經成為抑制腫瘤浸潤、轉移理想的靶點。目前只有關于乙酰肝素酶與賁門癌關系的零星研究，且這些研究局限于乙酰肝素酶單個因素，對乙酰肝素酶與賁門癌其他臨床病理因素之間的關系卻尚無研究。本實驗表明：乙酰肝素酶在正常的賁門組織中沒有表達，而在48例癌組織中表達率高達62.5%，且表達主要見于腫瘤組織的邊緣，表明乙酰肝素酶對降解基底膜具有重要作用。雖然賁門癌在各個時期均可轉移，但是TNM分期越晚，患者的腫瘤就越具有侵襲性，并且乙酰肝素酶的表達率也增高。因此，高表達的乙酰肝素酶是胃賁門癌生長、侵襲、轉移能力增強的重要因素[4]。

與乙酰肝素酶不同，本資料顯示低氧誘導因子1α與腫瘤的淋巴結轉移、遠處轉移密切相關，且與乙酰肝素酶表達正相關。那么低氧誘導因子1α是否能調節(jié)乙酰肝素酶的表達呢？腫瘤微環(huán)境，主要是腫瘤組織處于低氧情況下，可以持續(xù)刺激低氧誘導因子1α的活化，引起低氧誘導因子1α下游相關基因的表達減弱或增強[5]。如前所述，阻斷低氧誘導因子1α信號傳導通路可以抑制乙酰肝素酶的表達增強。在體外研究中，我們曾用低氧誘導因子1α的特異性抑制劑對培養(yǎng)的賁門癌細胞預先處理，也可以抑制由缺氧誘導的乙酰肝素酶表達升高，上述結果表明：在體外，低氧誘導因子1α可以調節(jié)乙酰肝素酶的表達。目前雖無直接證據表明在體內乙酰肝素酶的表達就是受低氧誘導因子1α的調控，但是根據我們的體外實驗結果和文獻報道[6]，表明低氧誘導因子1α對腫瘤組織中乙酰肝素酶的表達，至少在部分程度上發(fā)揮重要的調控作用。因此，乙酰肝素酶在賁門癌組織中表達增高，并與腫瘤的淋巴結轉移、TNM分期密切相關，表明乙酰肝素酶可以作為預測賁門癌惡劣的生物學行為的一個指標。而乙酰肝素酶和低氧誘導因子1α在賁門癌中的共表達，初步提示在實體腫瘤，活化的低氧誘導因子1α可能上調乙酰肝素酶的表達，二者共同促進賁門癌的侵襲和轉移。

[1]Vlodavsky I,Elkin M,Abboud-Jarrous G,et al.Heparanase: one molecule with multiple functions in cancer progression[J].Connect Tissue Res,2008,49(3):207-210.

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[3]Hoffmann AC,Mori R,Vallbohmer D,et al.High expression of heparanase is significantly associated with dedifferentiation and lymph node metastasis in patients with pancreatic ductal adenocarcinomas and correlated to PDGFA and via HIF1a to HBEGF and Bfgf[J].J Gastrointest Surg,2008,12(10):1674-1682.

[4]Khan SA,Thomas HC,Davidson BR,et al.Cholangiocarcinoma[J].Lancet,2005,366(9493):1303-1314.

[5]Kizaka-Kondoh S,Inoue M,Harada H,et al.Tumor hypoxia: a target for selective cancer therapy[J].Cancer Sci,2003,94(12):1021-1028. [6]Wu W,Pan C,Yu H,et al.Heparanase expression in gallbladder carcinoma and its correlation to prognosis[J].J Gastroenterol Hepatol,2008,23(3):491-497.

R735.2

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：1671-8194（2013）03-0162-03